郭宏亮，黃榮芳，方麗萍

（昆明市婦幼保健院 婦科，云南 昆明 650031）

沙眼衣原體（CT），解脲支原體（UU），人型解脲支原體（Mh） 感染與輸卵管妊娠的相關性也是近年來的研究熱點。受精卵在子宮體腔以外著床稱為異位妊娠，其發(fā)病率約為2%。輸卵管妊娠是育齡女性異位妊娠中最常見的一種，約占95%。因輸卵管不利于胎盤著床和胚胎發(fā)育，輸卵管妊娠發(fā)生破裂和出血的風險極大，是導致孕早期婦女死亡的重要原因。病原微生物引起的輸卵管炎癥是輸卵管妊娠的主要病因。以往認為引起輸卵管炎的病原體主要是細菌、淋病奈瑟菌等，隨著醫(yī)學的進步及檢驗手段的提高，對輸卵管炎的病因有了新的研究，有報道[1]指出沙眼衣原體和支原體也是引起輸卵管妊娠的重要病原體。我們通過對輸卵管妊娠患者及孕早期女性宮頸分泌物CT，UU，Mh的檢測探討CT，UU，Mh與輸卵管妊娠的關系。

有學者的研究發(fā)現(xiàn)在宮內膜中能檢測到CT，UU，Mh[2]，在輸卵管組織同樣也能檢出CT，UU，Mh[3,4]，那么盆腔液中是否也能檢測到CT，UU，Mh，這是一個有待研究的問題。目前國內檢測并研究盆腔液CT，UU，Mh感染的課題相對較少。我們通過檢測宮頸分泌物和盆腔液中的CT，UU，Mh，探討盆腔液中CT，UU，Mh感染的情況。

資料與方法 一、研究對象 所有研究對象均選取自2013年7月-2014年3月在昆明市婦幼保健院婦科門診、婦科住院部和生殖醫(yī)學科就診的患者，均需滿足的納入標準：有性生活史，在2周內未使用過任何抗生素，取樣3d內沒有陰道沖洗，沒有陰道用藥及性生活，排除經(jīng)期的女性。

選取婦科住院部收治的輸卵管妊娠患者81例作為研究組，選取同時期婦科門診孕早期要求終止妊娠并排外既往有異位妊娠史的患者102例作為對照組；取宮頸分泌物行支原體培養(yǎng)、沙眼衣原體檢測。

二、標本采集 （一） 宮頸分泌物：用無菌窺陰器擴張陰道，注意窺陰器上不能涂潤滑劑及消毒劑，以防干擾測定結果。用消毒棉簽擦拭宮頸口多余的分泌物，然后用滅菌棉拭子插入宮頸口內（2～4） cm處緩慢旋轉（2～3） 圈，停留（10～30） s后取出，取出時注意不要碰到陰道壁，放于無菌試管內送檢支原體和沙眼衣原體。

（二） 盆腔液：在術中用相同規(guī)格的無菌拭子在道格拉斯陷窩擦拭取盆腔液，無菌拭子放于無菌試管內送檢支原體和沙眼衣原體。

（三） 陰道分泌物：用2支無菌棉簽取陰道側壁上1/3分泌物后送檢。

三、UU和Mh檢測及藥敏試驗 （一） 試劑UU和Mh檢測采用液體培養(yǎng)法。試劑盒是由珠海迪爾生物工程有限公司生產(chǎn)的UU/Mh分離培養(yǎng)藥敏試劑盒。試劑盒主要由支原體培養(yǎng)基和檢測卡組成。培養(yǎng)基中含有尿素、馬血清、酵母提取液、酚紅指示劑、混合抗生素、生長因子等物質，稀釋液中有支原體基礎肉湯和精氨酸，當UU和Mh生長時，尿素和精氨酸分解生成的堿性物質引起PH值上升，培養(yǎng)基由黃色變成紅色。培養(yǎng)基中加有抑菌劑，可抑制生殖道中的細菌和真菌的生長。本試劑盒可同時檢測UU和Mh。

（二） 方法 從冰箱取出所需數(shù)量干燥培養(yǎng)基，用無菌吸頭吸取培養(yǎng)基100μl加入檢測卡C-空白孔。將采集的標本拭子插入培養(yǎng)瓶，在靠近液面上方的瓶壁擠壓旋轉拭子數(shù)次，充分混勻，使拭子中的樣本滲入，棄拭子。充分混勻接種標本的培養(yǎng)基，取100μl加入檢測卡除C-空白孔的各空中。各孔滴加2滴無菌礦物油，蓋上檢測卡的蓋子，置于35℃～37℃的恒溫箱培養(yǎng)，在24h和48h分別觀察結果。操作過程中注意無菌原則，避免污染。

（三） 結果判讀 陰陽性結果判定標準：黃色或橙黃色→陰性；清晰透明紅色→陽性；渾濁紅色→污染。C-空白孔應為陰性，若為陽性表示有污染，本次試驗無效。分離鑒定孔陰性（48h），可報告無UU和Mh生長。UU分離鑒定孔陽性，則報告檢測出解脲支原體。Mh分離鑒定孔陽性，則報告檢測出人型支原體。

四、沙眼衣原體檢測 （一） 檢測方法 采用Unipath有限公司生產(chǎn)的沙眼衣原體檢測試劑盒（免疫層析法） 檢測沙眼衣原體抗原，向提取試管中加入提取液（含低于0.1%疊氮鈉的提取試劑）至0.6ml，將宮頸分泌物棉拭標本浸沒在提取液中并攪動至少5秒，將提取試管于80℃加熱（10～12） min，即可提取沙眼衣原體抗原，將標本提取液在室溫下18℃～30℃冷卻至少5min，將滴管附件蓋在提取試管上，向檢測塊的標本窗滴上5滴提取液，15min后讀取檢測結果。

（二） 結果判讀 結果窗內無線條出現(xiàn)為沙眼衣原體抗原陰性，結果窗內有一條線出現(xiàn)為沙眼衣原體抗原陽性。若質控線（C） 不出現(xiàn)紅線，則結果無效。

五、陰道分泌物檢測 陰道分泌物鏡檢：將陰道分泌物均勻涂于載玻片上，用油鏡觀察線索細胞、假絲酵母菌的芽孢、菌絲。然后將棉簽放入無菌試管中，滴上生理鹽水稀釋后，涂于載玻片上，直接在光鏡下檢查滴蟲。需氧菌陰道炎及細菌性陰道病測定：采用北京中生金域診斷技術有限公司生產(chǎn)的需氧菌陰道炎/細菌性陰道病五項聯(lián)合測定試劑盒。外陰陰道假絲酵母菌?。猴@微鏡下見到假絲酵母菌的孢子或菌絲。

滴蟲性陰道炎:顯微鏡下懸滴法檢查見到滴蟲。需氧菌陰道炎：當過氧化氫（H2O）2，白細胞酯酶（LE） 陽性，同時β-葡萄糖醛酸苷酶（GUS），凝固酶（GADP） 一項陽性或兩項均為陽性者。細菌性陰道?。寒斶^氧化氫（H2O）2，白細胞酯酶（LE） 陽性，同時伴線索細胞陽性和（或）唾液酸苷酶（SNA） 陽性者。

六、統(tǒng)計學方法 將研究對象的臨床資料、沙眼衣原體檢測結果、陰道分泌物檢測結果、解脲支原體和人型支原體的檢測錄入EXCEL數(shù)據(jù)庫，采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。率的比較采用χ2檢驗、四格表確切概率法，P值＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義，P值＞0.05為差異無統(tǒng)計學意義。

結 果 研究組與對照組宮頸分泌物沙眼衣原體、支原體檢出情況。

研究組與對照組宮頸分泌物均未檢測出沙眼衣原體。

研究組81例中宮頸分泌物培養(yǎng)出支原體51例，陽性率為62.96%，對照組102例宮頸分泌物培養(yǎng)出支原體48例，陽性率為47.06%，研究組陽性率明顯高于對照組，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義，見表1。

手術患者宮頸分泌物和盆腔液沙眼衣原體、支原體檢出情況：305例手術患者的宮頸分泌物及盆腔液未檢測出沙眼衣原體。305例手術患者中宮頸分泌物培養(yǎng)出支原體的有152例，陽性率為49.84%；盆腔液培養(yǎng)出支原體的有0例，陽性率為0；宮頸分泌物陽性率明顯高于盆腔液，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義，見表2。

結 論 在本實驗研究范圍內：宮頸支原體感染是導致不孕、輸卵管妊娠的原因之一；支原體可能合并其他病原微生物共同致病。

討 論 UU和Mh與輸卵管妊娠關系的討論：輸卵管妊娠是婦產(chǎn)科常見的急腹癥，是孕產(chǎn)婦死亡的原因之一，嚴重威脅女性的生殖健康。病原微生物引起的輸卵管炎癥是輸卵管妊娠的主要病因。以往認為引起輸卵管炎的病原體主要是細菌、淋病奈瑟菌等，隨著醫(yī)學的進步及檢驗手段的提高，對輸卵管炎的病因有了新的研究，有報道[1]指出UU和Mh也是引起輸卵管妊娠的一種重要病原體。

國內賀子秋[5]調查1985年～1986年，1995年～1996年2個時間段輸卵管妊娠發(fā)病率呈上升趨勢，支原體的感染亦呈上升趨勢，認為二者有關。黃新可等[6]的研究報道：輸卵管妊娠患者宮頸分泌物培養(yǎng)支原體陽性率顯著高于對照組；2次以上輸卵管妊娠患者宮頸分泌物培養(yǎng)支原體陽性率高于初次輸卵管患者。認為支原體感染與輸卵管妊娠之間密切相關。張帝開等[7]對大白兔的輸卵管感染支原體后進行病理分析，發(fā)現(xiàn)輸卵管黏膜層上皮細胞出現(xiàn)輕度腫脹，黏膜下層炎性細胞浸潤，電鏡下可見支原體粘附于輸卵管黏膜上皮細胞上。同時，輸卵管表面的纖毛出現(xiàn)粘連、倒狀，微絨毛稀少、甚至脫落，提示支原體到達輸卵管可致輸卵管黏膜上皮的損傷。有學者對胚胎附著的輸卵管組織進行了支原體的檢測，結果發(fā)現(xiàn)發(fā)生輸卵管妊娠的輸卵管組織支原體的檢出率明顯高于對照組，認為支原體感染與輸卵管妊娠相關[4]。

表2 宮頸分泌物和盆腔液支原體檢出情況

本研究中研究組宮頸分泌物支原體陽性率達62.96%，明顯高于正常早孕人群的陽性率47.17%，有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。輸卵管妊娠患者宮頸分泌物支原體的陽性率與郭慧梅[8]等報道的一致，提示支原體感染與輸卵管妊娠有關。支原體能吸附于宿主細胞表面，吸取脂質和膽固醇，破壞宿主細胞膜；溶解磷脂，使宿主細胞膜遭受損傷，影響膜的生物合成和免疫功能；產(chǎn)生毒性代謝產(chǎn)物，對宿主細胞有急性毒性作用；刺激機體產(chǎn)生特異的細胞免疫和體液免疫，最終引起輸卵管的形態(tài)結構和生理功能的改變[9]。

［1］童燕群．解脲支原體和沙眼衣原體感染與輸卵管妊娠的[J]．現(xiàn)代預防醫(yī)學，2011，38(16)：3194-3195．

［2］張岱，魏宏，廖秦平．女性生殖道支原體及其他病原體在急性盆腔炎中的檢出率[J]．中國婦幼保健，2010，25(3)：366-369．

［3］劉志紅，鄧玉清，王玉潔，等．解脲支原體和沙眼衣原體感染與輸卵管妊娠的關系[J]．中國醫(yī)師雜志，2004，6(10)：1416-1417．

［4］郝艷華，程明剛，鄧志敏，等．解脲支原體與輸卵管妊娠關系的研究[J]．中原醫(yī)刊,2005,32(14):20-21.

［5］賀子秋，張慧娟，戴鐘英，等．輸卵管傳性播疾病病原體感染與輸卵管妊娠關系的研究[J]．實用婦產(chǎn)科雜志，1999，15（5）：254-255.

［6］黃新可，張羨，羅新，等．女性下生殖道沙眼衣原體及解脲支原體感染與輸卵管妊娠的相關性[J]．中國實用婦科與產(chǎn)科雜志，2012，28（8）：628-630.

［7］張帝開，賈繼輝，鄺健全，等．解脲支原體對輸卵管黏膜上皮細胞致病性研究[J]．中國微生態(tài)學雜志，2009，15（6）：317-319.

［8］郭慧梅，田瑩．輸卵管妊娠與生殖道支原體感染關系的臨床分析[J]．河北醫(yī)學，2008，14(2)：151-153．

［9］曲艷，于濤，夏麗穎，等．解脲支原體和沙眼衣原體感染致不孕癥機制研究[J]．中華醫(yī)學研究雜志，2007，7（10）：881-882.