王曉青，賈燕花，高 磊，馬 靜，劉皈陽(yáng)

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氯霉素羊毛脂軟膏中氯霉素含量和有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法的改進(jìn)

王曉青，賈燕花，高 磊，馬 靜，劉皈陽(yáng)*

目的 建立HPLC方法測(cè)定氯霉素的羊毛脂軟膏中氯霉素的含量和有關(guān)物質(zhì)。方法采用高效液相色譜法，色譜柱：安捷倫C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相：0.01 mol/L庚烷磺酸鈉緩沖溶液-甲醇(68∶32)，檢測(cè)波長(zhǎng)：277 nm，進(jìn)樣量：20 μL。結(jié)果氯霉素在49.96～199.84 μg/mL的濃度范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系，精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果良好，平均回收率為99.12%，RSD為0.51%(n=9)，氯霉素與其他雜質(zhì)的分離度良好。結(jié)論該方法具有良好地準(zhǔn)確度、精密度、專屬性，能良好的控制氯霉素羊毛脂軟膏的質(zhì)量。

氯霉素羊毛脂軟膏；HPLC；含量測(cè)定

0 引言

氯霉素羊毛脂軟膏由氯霉素、羊毛脂、甘油和凡士林組成，臨床上主要用于放射治療引起的皮膚創(chuàng)面感染、濕疹、皮炎等。文獻(xiàn)中氯霉素含量測(cè)定方法采用紫外分光光度法和高效液相色譜法[1-2]。《中國(guó)藥典》2010年版采用HPLC法測(cè)定氯霉素原料的含量和有關(guān)物質(zhì)[3]。本研究采用HPLC法測(cè)定氯霉素羊毛脂軟膏中氯霉素的含量以及有關(guān)物質(zhì)，以提供質(zhì)量可控的藥品[4-8]。

1 儀器和試藥

島津LC-20AD高效液相色譜儀；島津UV-2450紫外分光光度儀；METTLER AL104電子分析天平。氯霉素對(duì)照品(批號(hào)：130555-201203)、氯霉素二醇物對(duì)照品(批號(hào)：130436-200704)和對(duì)硝基苯甲醛對(duì)照品(批號(hào)：130562-200902)均購(gòu)自于中國(guó)食品藥品檢定研究院。氯霉素羊毛脂軟膏由解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院生產(chǎn)(批號(hào)：20130805、20130806-1、20130806-2)。甲醇為色譜純(Fisher)，庚烷磺酸鈉、三乙胺、磷酸二氫鉀、磷酸、乙醇均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：安捷倫C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以0.01 mol/L庚烷磺酸鈉緩沖溶液(取磷酸二氫鉀6.8 g，用0.01 mol/L庚烷磺酸鈉溶液溶解并稀釋至1 000 mL，再加三乙胺5 mL，混勻，用磷酸調(diào)劑pH值至2.5)-甲醇(68∶32)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)277 nm，進(jìn)樣量20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密量取氯霉素對(duì)照品、氯霉素二醇物對(duì)照品及對(duì)硝基苯甲醛對(duì)照品各適量，用50%乙醇溶液稀釋制成每1 mL中各含0.1 mg、12.5 μg和1.25 μg的溶液，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取供試品約100 mg，加乙醇5 mL，微溫使基質(zhì)融化，攪拌，冷卻使基質(zhì)凝固，分取乙醇液于100 mL量瓶中，基質(zhì)再用50%乙醇同法處理3次，每次10 mL，洗液并入量瓶中，加50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即為含量測(cè)定供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例制備不含氯霉素的樣品，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照樣品。

2.3 專屬性試驗(yàn) 主成分含量測(cè)定的專屬性考察取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各20 μL，依次注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。氯霉素二醇物和對(duì)硝基苯甲醛對(duì)氯霉素的含量測(cè)定無(wú)干擾；陰性對(duì)照對(duì)氯霉素含量測(cè)定無(wú)干擾。

2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取氯霉素對(duì)照品24.98 mg，置于25 mL量瓶中，加50%乙醇使溶解并定量稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL中含氯霉素約1 mg的溶液。精密量取該溶液0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、2.0 mL，分別置于10 mL量瓶中，用50%乙醇稀釋至刻度，即得線性關(guān)系考察供試液，分別精密量取各溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以氯霉素的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：y=34 467 x-7 091(r=0.999 9)。結(jié)果表明，氯霉素在49.96～199.84 μg/mL的濃度范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖

2.5 精密度試驗(yàn) 精密稱取氯霉素對(duì)照品10.96 mg，置于100 mL容量瓶中，用50%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得精密度試驗(yàn)供試液。按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。計(jì)算氯霉素峰面積積分值的RSD值，RSD=0.2%，表明本方法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下的供試品溶液，于室溫放置，按照“2.1”項(xiàng)的色譜條件，分別于0、3、6、9、12、15 h測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算氯霉素峰面積積分值的RSD值，RSD=0.1%。結(jié)果表明，本方法穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批號(hào)供試品適量(130816-2)，按照“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，平行制備6份，按照外標(biāo)法計(jì)算氯霉素含量。計(jì)算含量測(cè)定結(jié)果的RSD值，RSD=1.1%。結(jié)果表明，本方法重復(fù)性良好。

2.8 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 精密稱取氯霉素對(duì)照品適量(16、20、24 mg)，每個(gè)濃度各3份，按照處方比例加入相應(yīng)量的空白基質(zhì)，加乙醇5 mL，按照“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備準(zhǔn)確度試驗(yàn)供試品溶液。按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，按照外標(biāo)法計(jì)算氯霉素的含量，計(jì)算回收率。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.9 樣品含量及供試品有關(guān)物質(zhì)測(cè)定 分別取3批供試品適量，精密稱定，按照“2.2”項(xiàng)下的方法分別制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算氯霉素含量，結(jié)果見(jiàn)表2。精密量取供試品適量，約250 mg，按照“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，即得氯霉素羊毛脂軟膏有關(guān)物質(zhì)檢查供試品溶液；以“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液作為有關(guān)物質(zhì)檢查的對(duì)照品溶液。按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使氯霉素二醇物對(duì)照品峰的峰高約為滿量程的50%，采用外標(biāo)法計(jì)算有關(guān)物質(zhì)的含量。結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=2)

表3 樣品有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果

3 討論

文獻(xiàn)中選擇乙醇為溶劑，50%乙醇為稀釋劑，根據(jù)準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果，該供試品制備溶劑能使主成分和基質(zhì)得到良好分離，準(zhǔn)確地測(cè)定制劑中主成分的含量。同時(shí)，本試驗(yàn)分別考察了不同的儀器、色譜柱、流速、流動(dòng)相比例對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，結(jié)果表明，各條件下被測(cè)組分能有效分離，該方法耐用性良好。本試驗(yàn)考察了制劑在強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、氧化、光照、高溫條件下的穩(wěn)定性，在強(qiáng)堿條件下，氯霉素二醇物的含量顯著增加；在高溫條件下，氯霉素二醇物的含量顯著增加；在強(qiáng)酸、氧化、光照條件下，氯霉素二醇物的含量無(wú)明顯變化，對(duì)樣品在運(yùn)輸和儲(chǔ)存的過(guò)程中，應(yīng)注意各種因素對(duì)樣品質(zhì)量的影響，以提供質(zhì)量合格的藥品。綜上所述，改進(jìn)后的方法具有良好的準(zhǔn)確度、精密度、專屬性，能良好地控制氯霉素羊毛脂軟膏的質(zhì)量。

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Improvement of the method for the determination of content and related substances in chloramphenicol and lanolin ointment

WANG Xiao-qing,JIA Yan-hua,GAO Lei,MA Jing,LIU Gui-yang*

(Department of Pharmacy,The First Affiliated Hospital of PLA General Hospital,Beijing 100048,China)

Objective To establish an HPLC method for the determination of content and related substances in chloramphenicol and lanolin ointment.MethodsThe determination was performed on Agilent C18column (4.6 mm×250 mm,5 μm) with the mobile phase of 0.01 mol/L sodium heptanesulfonate-methanol (68∶32).The detection wavelength was 277 nm and the sample size was 20 μL.ResultsThe linear range of the chloramphenicol was 49.96～199.84 μg/mL with an average recovery of 99.12% (RSD=0.51%,n=9).The test had good results of precision,stability,repeatability and resolution.ConclusionThe method is accurate,precise and specific for the quality control of chloramphenicol and lanolin ointment.

Chloramphenicol and lanolin ointment; HPLC; Determination of content

2014-11-27

解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院藥劑藥理科，北京 100048

軍隊(duì)“十二五”軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項(xiàng)課題(13ZJZ17-2)

10.14053/j.cnki.ppcr.201505022

*通信作者