王雪，李文，唐丹，陸勇，劉霞，余海波

·藥理毒理·

越鞠丸對(duì)大鼠胃酸胃蛋白酶的影響

王雪1，李文1，唐丹1，陸勇1，劉霞1，余海波2

目的：觀察越鞠丸對(duì)大鼠胃酸、胃蛋白酶的影響。方法：將SD大鼠50只隨機(jī)分為正常組、空白對(duì)照組、越鞠丸低劑量組、中等劑量組和高劑量組，每組10只。末次灌胃后收集胃液，測(cè)定各組大鼠胃液胃酸、胃蛋白酶濃度和胃蛋白酶活力的變化。結(jié)果：各實(shí)驗(yàn)組胃酸、胃蛋白酶濃度和胃蛋白酶活力均較正常組增加（P＜0.05），同時(shí)胃蛋白酶濃度和胃蛋白酶活力在低劑量組和高劑量組之間比較有顯著差異（P＜0.05）。結(jié)論：越鞠丸通過提高胃液酸度、胃蛋白酶濃度及胃蛋白酶活力發(fā)揮行氣解郁的生理功效，并且與高劑量相比，低劑量使用效力相當(dāng)。

越鞠丸；胃酸；胃蛋白酶；胃蛋白酶活力

越鞠丸出自《丹溪心法》，是治療郁證的代表方劑，由香附、川芎、蒼術(shù)、梔子、神曲五味藥組成，行氣解郁，主治氣、血、痰、火、濕、食之郁證，廣泛適用于胸膈痞悶、脘腹肚脹、吞酸嘔吐、飲食不消、胸脘刺痛、噯氣腹脹等癥[1,2]。雖其臨床應(yīng)用廣泛，但對(duì)其引起的生理改變機(jī)制研究報(bào)道甚少，本文報(bào)道其對(duì)大鼠胃酸、胃蛋白酶的影響，擬為越鞠丸的臨床應(yīng)用提供進(jìn)一步的生理機(jī)制研究的理論支持，有利于越鞠丸的進(jìn)一步推廣使用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)SD大鼠50只，雌雄各半，體重為（180～220）g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.1.2 藥品 越鞠丸的準(zhǔn)備方法：香附、蒼術(shù)、川芎、梔子、神曲各10 g。先用乙醇提取， 揮發(fā)去酒精， 然后將全部藥渣加水800 mL，普通方法煎煮，將提取液與煎煮液混合， 濃縮成所需濃度。

1.1.3 試劑 大鼠胃蛋白酶（PP）ELISA試劑盒，購(gòu)自艾萊薩生物 （Elisa Biotech）公司，貨號(hào)：EIA-3170。血紅蛋白（CAS號(hào)：9008-02-0）、酪氨酸（CAS號(hào)：60-18-4）購(gòu)于上海譜振生物科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組與給藥 大鼠隨機(jī)分為正常組、空白對(duì)照組、越鞠丸低劑量組、中等劑量組、高劑量組?？瞻讓?duì)照組灌服生理鹽水，越鞠丸低中高劑量分別為

10 g/kg 、20 g/kg 、30 g/kg體重，各組1次/d灌胃，每次用藥體積均按1 mL/100g計(jì)算。連續(xù)灌胃14天。1.2.2 胃液標(biāo)本的收集 于最后1次給藥后2 h，禁食(不禁水)12 h，以25 mg．kg-1戊巴比妥鈉麻醉大鼠，解剖上腹部，從幽門向胃插入一直徑約為2 mm的塑料管，在胃靠近幽門球部結(jié)扎固定，以收集胃液，并由口腔經(jīng)食管用塑料管插入前胃，與食管一起結(jié)扎，以pH 為7.0、35℃ 的生理鹽水用蠕動(dòng)泵按10 mL．h-1的速度進(jìn)行胃內(nèi)灌流，收集1小時(shí)流出液，供實(shí)驗(yàn)用。

1.2.3 指標(biāo)觀察與方法

（1）胃液酸度測(cè)定：采集到的胃液用pH測(cè)定儀直接測(cè)定pH值。

（2）胃蛋白酶含量測(cè)定：按照ELISA試劑盒說明書操作，測(cè)定胃蛋白酶含量。

（3）胃蛋白酶活性單位測(cè)定：參考文獻(xiàn)[3]應(yīng)用酪氨酸法測(cè)定胃蛋白酶的活性：先制備酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后分別取酪氨酸對(duì)照液， 胃液各1 mL，置37℃ 水浴中， 保溫5分鐘，精密加入預(yù)熱至37℃的血紅蛋白試液5 mL，搖勻，立即計(jì)時(shí)，在37℃水浴中反應(yīng)10分鐘，立即精密加入5 % 三氯醋酸5 mL，搖勻，濾清，在275 nm處測(cè)定吸收度（同時(shí)分別做空白對(duì)照）。胃蛋白酶活力按CP90方法的公式計(jì)算即得：在規(guī)定的條件下每分鐘能酶解血紅蛋白生成1mg的酪氨酸為1個(gè)胃蛋白酶活力單位。

2 結(jié)果

2.1 越鞠丸對(duì)實(shí)驗(yàn)各組大鼠胃液酸度、胃蛋白酶濃度、胃蛋白酶活力的影響的比較，結(jié)果見表1。

表1 越鞠丸對(duì)各組大鼠胃液酸度、胃蛋白酶濃度、胃蛋白酶活力的影響比較

3 討論

越鞠丸出自朱震亨《丹溪心法》，為治療“ 六郁” 之名方。朱震亨認(rèn)為： “氣血沖和，萬病不生，一有佛郁，諸病生焉。故人身諸病，多生于郁” ( 丹溪心法·六郁》)。郁者， 結(jié)聚而不得發(fā)越，當(dāng)升者不得升，當(dāng)降者不得降，當(dāng)變化者不得變化。此為傳化失常，六郁( 氣、濕、痰、熱、食、血) 之病作矣。郁證多緣于思慮不伸，而氣先受病，故用越鞠丸總解諸郁。方中用香附快氣，以調(diào)諸氣的佛郁，蒼術(shù)健脾燥濕以除痰， 神曲和中助化以消食，桅子清郁火，川芍開血分之郁結(jié)。朱震亨認(rèn)為，凡郁在中焦，以蒼術(shù)、川芍開提其氣以升散之，并隨證加入諸藥。桅子“ 瀉三焦火，清胃脘血，治熱厥心痛，解郁熱，行氣結(jié)” 。氣不郁則痰不生，用越鞠丸以開胃腸三焦之郁，從而使胸隔痞悶、脫腹脹痛、暖腐吞酸、惡心嘔吐、飲食不消等癥消失， 繼而命名氣、濕、痰、熱、食、血“六郁” 得到宣發(fā)， 促進(jìn)機(jī)體的新陳代謝，改善全身的病理狀態(tài)，從而達(dá)到治療消化不良、慢性胃炎、消化性潰瘍、肝膽病癥、心腦病癥、肺病癥、氣血津液病癥和經(jīng)絡(luò)肢體病癥等諸多病癥。胃酸是由胃腺壁細(xì)胞分泌，能激活胃蛋白酶原，使之成為有活性的胃蛋白酶，并為胃蛋白酶提供適宜的酸性環(huán)境，可助消化。胃蛋白酶是由胃腺主細(xì)胞分泌，胃液中的重要消化酶，它在酸性條件下能對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行初步的消化分解，起到促消化的作用。胃酸和胃蛋白酶的分泌量反映了胃對(duì)食物的消化功能[4]。同時(shí)，不同的酶最適pH值不同，胃蛋白酶的最適pH值為1.8[5]，本實(shí)驗(yàn)與之相符。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：越鞠丸能使實(shí)驗(yàn)組大鼠胃液氫離子濃度增加（即胃液酸度增加，pH值降低）、胃蛋白酶濃度增加以及胃蛋白酶活力增加，并且低劑量組胃蛋白酶濃度和胃蛋白酶活力與高劑量組比較均有差別，低劑量組胃蛋白酶活力最高。因此，通過該實(shí)驗(yàn)，可以初步認(rèn)為越鞠丸通過提高胃液酸度、胃蛋白酶濃度及胃蛋白酶活力發(fā)揮行氣解郁的生理功效，并且與高劑量相比，低劑量使用效力相當(dāng)。

[1] 朱洪海.越鞠丸臨床應(yīng)用研究進(jìn)展述略[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志,2010,24(11):36.

[2] 潘洪峰,葉沐镕. 近十年越鞠丸的臨床研究進(jìn)展[N]. 貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,29(1):28.

[3] 張利民,盛惟,劉宏,等.酪氨酸法測(cè)定大鼠胃蛋白酶實(shí)驗(yàn)方法的探討[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn),2003,4(4):49.

[4] 蒙卡斯?fàn)朧B.醫(yī)學(xué)生理學(xué)[M].北京: 科學(xué)出版社,1990:1281.

[5] 王繼峰.生物化學(xué)[M].北京: 中國(guó)中醫(yī)藥出版社,2003:78.

（責(zé)任編輯：蔣淼）

Effect of YueJu Pill on gastric acid and pepsin in rats/

WANG Xue1, LI Wen1, TANG Dan1, LU Yong1, Liu Xia1, YU Hai-bo2// ( Chengdu University of Traditional Chinese medicine ,Chengdu 610075, Sichuan; 2. Mianyang Fulin Hospital, Mianyang 621000, Sichuan )

Objective:To observe the effect of YueJu Pill on gastric acid and pepsin in rats.Method:50 SD rats were randomly divided into normal group, control group, YueJu Pill low-dose group,YueJu Pill middle-dose group and YueJu Pill high-dose group. The contents of gastric acid, the contents of pepsin and pepsin activity of all groups were detected after the last intragastric administration.Result:Compared with normal group, the contents of gastric acid, the contents of pepsin and pepsin activity were obviously increased in experimental groups. And Signifcant differences of pepsin contents and pepsin activity was found between low-dose group and high-dose group.Conclusion:YueJu Pill plays physiological functions by increasing the gastric acid contents, pepsin contents and pepsin activity. In addition, low-dose YueJu Pill has the same effects with high-dose.

YueJu Pill; gastric acid; pepsin; pepsin activity

R 285.5

A

1674-926X(2015)02-015-02

成都中醫(yī)藥大學(xué)?；?編號(hào):ZRMS201253)

1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610075

2.綿陽市富臨中心醫(yī)院，四川 綿陽 621000

王雪(1981-)，女，醫(yī)學(xué)碩士，研究方向：消化系統(tǒng)疾病的臨床、基礎(chǔ)研究

Tel:18708142297 Email:xuezaizaixian@163.com

李文（1982-），女，碩士，研究方向：中藥藥劑學(xué) Tel:13982279194 Email:wander1210@sina.cn

2014-11-11