李容，蔣玉婷，羅莉婭，謝曾義，陳鳳英，鄭航，萬(wàn)麗

·炮制制劑·

大孔吸附樹脂純化黃芩4種黃酮類成分的工藝研究

李容，蔣玉婷，羅莉婭，謝曾義，陳鳳英，鄭航，萬(wàn)麗

目的：篩選純化黃芩4種黃酮類成分的最佳樹脂型號(hào)并優(yōu)化其工藝條件。方法：以黃芩中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素4種成分含量為指標(biāo)，通過(guò)對(duì)大孔吸附樹脂吸附性能和解吸附性能考察，確定黃芩4種黃酮類成分的最佳純化工藝。結(jié)果：D101型大孔吸附樹脂對(duì)黃芩4種黃酮類成分純化效果最好，其純化的最佳工藝條件為：上樣濃度40 mg（生藥）/mL，上樣流速2 BV/h，徑高比為1:10，最大上樣量為6 BV；洗脫劑75%乙醇，洗脫流速3 BV/h，洗脫劑用量為7 BV。結(jié)論：D101型大孔吸附樹脂純化工藝穩(wěn)定，簡(jiǎn)單可行，適用于工業(yè)生產(chǎn)。

大孔吸附樹脂；黃芩；工藝研究

黃芩始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[1]，為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi 的干燥根[2]，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎之效，是臨床常用大宗中藥之一。研究表明黃芩及其有效成分黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素，具有顯著的抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒及抗腫瘤等藥理活性[3-6]。大孔吸附樹脂是一種高分子材料，具有多孔性和較大的比表面積，主要通過(guò)物理作用從溶液中有選擇的吸附有機(jī)物質(zhì)，近年來(lái)廣泛應(yīng)用于中草藥化學(xué)成分的富集和純化[7-10]。本實(shí)驗(yàn)在前期優(yōu)選黃芩最佳提取工藝基礎(chǔ)上，以黃芩中4種黃酮類成分含量為指標(biāo)，優(yōu)化黃芩純化工藝參數(shù)，為工業(yè)生產(chǎn)提供參考。

1 材料

Agilent 1200 series高效液相色譜儀（G1311A四元泵，G1322A真空脫氣機(jī)，G1316A柱溫箱，G1315D DAD紫外檢測(cè)器），Agilent Technologies 色譜工作站，恒溫水浴鍋（北京國(guó)華醫(yī)療器械廠），BS124S（萬(wàn)分之一）、BP211D（十萬(wàn)分之一）型電子天平（德國(guó)Sartorius 公司）。大孔吸附樹脂型號(hào)有：D101，AB-8，D140，X-5購(gòu)自安徽三星樹脂科技有限公司，HPD100，HPD300，DA201-C，LSA-20購(gòu)自鄭州勤實(shí)科技有限公司。

黃芩苷（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110715-200815），漢黃芩苷（成都曼斯特生物科技有限公司，MUST-13052312），黃芩素（成都

曼斯特生物科技有限公司，MUST-13082206），漢黃芩素（成都曼斯特生物科技有限公司，MUST-13092303）；黃芩藥材采于山西省大同市渾源縣，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)標(biāo)本館盧先明教授鑒定為黃芩Scutellaria baicalensis Georgi 的根；水為超純水，乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取液制備

取黃芩粉末適量，加12倍量54%乙醇，回流提取2次，每次135 min，合并兩次提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，加水稀釋至一定體積，得100 mg（生藥）/ mL提取液，備用。

2.2 大孔吸附樹脂預(yù)處理

取大孔吸附樹脂適量，95%乙醇浸泡24 h，裝柱，采用95%乙醇洗脫至乙醇:水（1:5）不變渾濁，再用蒸餾水洗至無(wú)醇味，抽濾至不滴水為準(zhǔn)，備用。

2.3 靜態(tài)吸附法

取預(yù)處理后的8種樹脂各2 g，置150 mL錐形瓶，平行2份，精密加入50 mL黃芩提取液，時(shí)時(shí)振搖，放置24 h后，測(cè)定藥液濃度，計(jì)算樹脂吸附量[11]。吸附后用蒸餾水沖洗大孔樹脂表面，至水洗液無(wú)色，取樹脂約1 g，加70%乙醇50 mL，時(shí)時(shí)振搖，放置24 h，測(cè)定解吸液濃度，計(jì)算樹脂的解吸率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各樹脂靜態(tài)吸附量和解吸率

從吸附量看D101，HPD100，LSA-20和DA201-C對(duì)4種成分均有良好的吸附作用；從解吸率看HPD100，D101，HPD300和X-5對(duì)4種成分均有良好解吸附作用，綜合吸附和解吸附作用，同時(shí)考慮實(shí)驗(yàn)成本，本實(shí)驗(yàn)選擇D101型大孔吸附樹脂對(duì)黃芩進(jìn)行純化工藝考察。

2.4 純化工藝參數(shù)考察

2.4.1 上樣濃度考察 取預(yù)處理后D101型大孔樹脂約6 g，裝柱（內(nèi)徑1.1 cm），徑高比1:10，上樣流速2 BV/h，準(zhǔn)確吸取濃度為100 mg（生藥）/mL黃芩提取液50 mL，分別稀釋為100，80，60，40，20 mg．mL-1上樣液進(jìn)行上樣，靜置2 h后以蒸餾水沖洗至無(wú)色，收集所有的淋洗液，測(cè)定含量，計(jì)算其吸附量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同上樣濃度4種成分的吸附量

80 45.51 13.94 5.38 1.70 100 45.29 14.23 5.47 1.72

從結(jié)果看出上樣濃度為40 mg．mL-1時(shí)，D101大孔樹脂對(duì)4種黃酮類成分吸附作用均較好。

2.4.2 上樣流速考察 取預(yù)處理后D101型大孔樹脂約6 g，裝柱（內(nèi)徑1.1 cm），徑高比1:10，準(zhǔn)確吸取濃度為40 mg．mL-1黃芩提取液125 mL，分別以1，2，

3，4 BV/h速度進(jìn)行上樣，靜置2 h后以蒸餾水沖洗至無(wú)色，收集所有的淋洗液，測(cè)定含量，計(jì)算其吸附量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 不同上樣流速4種成分的吸附量

從結(jié)果看出上樣流速為2 BV/h，D101大孔樹脂對(duì)4種黃酮類成分吸附作用均較好。

2.4.3 徑高比考察 取預(yù)處理后D101型大孔樹脂約6 g，不同規(guī)格柱子裝柱，使徑高比分別達(dá)到1:6，1:8，1:10，1:12，準(zhǔn)確吸取濃度為40 mg．mL-1黃芩提取液125 mL，以2 BV/h速度進(jìn)行上樣，靜置2 h后以蒸餾水沖洗至無(wú)色，收集所有的淋洗液，測(cè)定含量，計(jì)算其吸附量，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 不同徑高比4種成分的吸附量

從結(jié)果看出D101大孔樹脂對(duì)黃芩苷吸附作用徑高比1:10和1:12時(shí)較好，漢黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素徑高比1:8和1:10時(shí)較好，綜合考慮選擇徑高比為1:10。

2.4.4 吸附曲線繪制 取預(yù)處理后D101型大孔樹脂約6 g，裝柱（內(nèi)徑1.1 cm），徑高比1:10，準(zhǔn)確吸取濃度為40 mg．mL-1黃芩提取液200 mL，以2 BV/h速度進(jìn)行上樣，每5 mL收集一份，共40份，測(cè)定每份4種成分的濃度，繪制吸附曲線。

圖1 吸附曲線

從圖上看出，4種成分泄露點(diǎn)和飽和點(diǎn)不一樣，以泄露最快的黃芩苷計(jì)，淋洗液中黃芩苷的濃度從13份（65 mL）開(kāi)始迅速增加，第25份（125 mL）時(shí)達(dá)到飽和；因此確定最大上樣量為65 mL，約6 BV。2.4.5 洗脫劑考察 按上述吸附條件進(jìn)行上樣，上樣完畢靜置2 h后，用5 BV蒸餾水沖洗至無(wú)色，分別用50%，60%，70%，80%，90%（v/v）乙醇6 BV以2 BV/h速度洗脫，收集洗脫液，定容至100 mL，測(cè)定含量，計(jì)算洗脫率，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇對(duì)4種成分的洗脫率

70 96.84 95.21 90.30 89.92 80 92.23 92.29 95.64 95.13 90 71.88 79.89 99.36 98.44

從結(jié)果看出，70%～80%乙醇對(duì)4種成分的洗脫率均較高，達(dá)到90%左右，故選擇75%乙醇進(jìn)行洗脫。

2.4.6 洗脫流速考察 按上述吸附條件進(jìn)行上樣，上樣完畢靜置2 h后，用5 BV蒸餾水沖洗至無(wú)色，用75%（v/v）乙醇6 BV分別以1，2，3，4 BV/h速度洗脫，收集洗脫液，定容至100 mL，測(cè)定含量，計(jì)算洗脫率，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 不同洗脫流速對(duì)4種成分的洗脫率

從結(jié)果看出，洗脫流速為2 BV/h和3 BV/h時(shí)，4種成分的洗脫率差別不大，考慮洗脫時(shí)間，選擇3 BV/h進(jìn)行洗脫。

2.4.7 洗脫曲線繪制 按上述吸附條件進(jìn)行上樣，上樣完畢靜置2 h后，用5 BV蒸餾水沖洗至無(wú)色，用75%（v/v）乙醇以3 BV/h速度洗脫，收集洗脫液，每1 BV收集一份，測(cè)定每份的含量，計(jì)算洗脫率，繪制洗脫曲線。

圖2 洗脫曲線

從圖上看出，采用75%乙醇洗脫4 BV時(shí)黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素已基本洗脫完全，7 BV時(shí)漢黃芩素洗脫完全，故選擇7 BV進(jìn)行洗脫。

2.5 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

按上述的純化工藝參數(shù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，平行3份，測(cè)定其吸附量和洗脫率，RSD均小于5%，說(shuō)明工藝穩(wěn)定；將得到的洗脫液濃縮干燥為干膏，干膏率由提取液的45.30%降低為22.93%，黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素含量分別達(dá)到38.22%，8.91%，2.86%，0.89%，該工藝減低了干膏率，大大提高了4

種成分含量，適用于黃芩中4種成分的純化。

3 討論

3.1 大孔樹脂對(duì)化合物的吸附作用與藥物及大孔樹脂本身的性質(zhì)有關(guān)，D101型大孔樹脂是一種非極性樹脂，比表面積500～550 m2．g-1，平均孔徑為9～10 nm，適用于黃芩化學(xué)成分純化富集。同時(shí)大孔吸附樹脂孔徑較大，由于洗脫過(guò)程中洗脫劑比例變化，容易產(chǎn)生氣泡，會(huì)對(duì)洗脫效果造成很大影響；有研究報(bào)道[12]采用超聲波輔助能有效改善這一現(xiàn)象，但應(yīng)用于工藝生產(chǎn)還需要進(jìn)一步研究，同時(shí)參數(shù)也需要做相應(yīng)的調(diào)整。

3.2 采用大孔樹脂純化黃芩的工藝已多有報(bào)道，但大多是以黃芩苷或者總黃酮為考察指標(biāo)，而且工藝參數(shù)不詳細(xì)，本實(shí)驗(yàn)以黃芩中主要的黃酮類成分黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素為指標(biāo)，具有代表性，工藝穩(wěn)定可行。

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(責(zé)任編輯：李蕓霞)

Purification process of four flavonoids in Huangqin by macroporous resin/

LI Rong, JIANG Yu-ting, LUO Li-ya, XIE Zeng-yi, CHEN Feng-ying, ZHENG Hang, WAN Li//(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; Key laboratory of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources in Sichuan Province—Key Laboratory Breeding Base of Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:To filter the best macroporous resin for purification of four flavonoids in Huangqin and optimize purification process conditions.Method:The contents of baicalin, wogonoside, baicalein and wogonin were used as indexes to determine the best purification process conditions by studying adsorption and desorption properties of macroporous resin.Result:D101 resin showed good purifcation for four favonoids in Huangqin. The best conditions were as following: the sample concentration was 40 mg (crude drug) / mL with the sample fow rate 2 BV/h and ratio of diameter to height 1:10. The maximum sample volume was 6 BV. And elute was 75%(v/v) ethanol with the elution fow rate of 3 BV/h. The amount of elute was 7 BV.Conclusion:Purifcation process using D101 macroporous resin is stable, simple and can be used in industrial production.

Macroporous resin; Huangqin; purifcation process

R 283.3

A

1674-926X(2015)02-013-04

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開(kāi)發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室——省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 611137

李容，在讀碩士，從事中藥有效成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方向研究

Tel:15828534682 Email:15828534682@163.com

萬(wàn)麗，教授，從事中藥有效成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方向研究 Email:wanli8801@163.com

2014-09-27