李容，蔣玉婷，羅莉婭，謝曾義，陳鳳英，鄭航，萬麗

·炮制制劑·

大孔吸附樹脂純化黃芩4種黃酮類成分的工藝研究

李容，蔣玉婷，羅莉婭，謝曾義，陳鳳英，鄭航，萬麗

目的：篩選純化黃芩4種黃酮類成分的最佳樹脂型號并優(yōu)化其工藝條件。方法：以黃芩中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素4種成分含量為指標，通過對大孔吸附樹脂吸附性能和解吸附性能考察，確定黃芩4種黃酮類成分的最佳純化工藝。結(jié)果：D101型大孔吸附樹脂對黃芩4種黃酮類成分純化效果最好，其純化的最佳工藝條件為：上樣濃度40 mg（生藥）/mL，上樣流速2 BV/h，徑高比為1:10，最大上樣量為6 BV；洗脫劑75%乙醇，洗脫流速3 BV/h，洗脫劑用量為7 BV。結(jié)論：D101型大孔吸附樹脂純化工藝穩(wěn)定，簡單可行，適用于工業(yè)生產(chǎn)。

大孔吸附樹脂；黃芩；工藝研究

黃芩始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[1]，為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi 的干燥根[2]，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎之效，是臨床常用大宗中藥之一。研究表明黃芩及其有效成分黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素，具有顯著的抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒及抗腫瘤等藥理活性[3-6]。大孔吸附樹脂是一種高分子材料，具有多孔性和較大的比表面積，主要通過物理作用從溶液中有選擇的吸附有機物質(zhì)，近年來廣泛應用于中草藥化學成分的富集和純化[7-10]。本實驗在前期優(yōu)選黃芩最佳提取工藝基礎上，以黃芩中4種黃酮類成分含量為指標，優(yōu)化黃芩純化工藝參數(shù)，為工業(yè)生產(chǎn)提供參考。

1 材料

Agilent 1200 series高效液相色譜儀（G1311A四元泵，G1322A真空脫氣機，G1316A柱溫箱，G1315D DAD紫外檢測器），Agilent Technologies 色譜工作站，恒溫水浴鍋（北京國華醫(yī)療器械廠），BS124S（萬分之一）、BP211D（十萬分之一）型電子天平（德國Sartorius 公司）。大孔吸附樹脂型號有：D101，AB-8，D140，X-5購自安徽三星樹脂科技有限公司，HPD100，HPD300，DA201-C，LSA-20購自鄭州勤實科技有限公司。

黃芩苷（中國食品藥品檢定研究院，批號：110715-200815），漢黃芩苷（成都曼斯特生物科技有限公司，MUST-13052312），黃芩素（成都

曼斯特生物科技有限公司，MUST-13082206），漢黃芩素（成都曼斯特生物科技有限公司，MUST-13092303）；黃芩藥材采于山西省大同市渾源縣，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學標本館盧先明教授鑒定為黃芩Scutellaria baicalensis Georgi 的根；水為超純水，乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取液制備

取黃芩粉末適量，加12倍量54%乙醇，回流提取2次，每次135 min，合并兩次提取液，回收乙醇至無醇味，加水稀釋至一定體積，得100 mg（生藥）/ mL提取液，備用。

2.2 大孔吸附樹脂預處理

取大孔吸附樹脂適量，95%乙醇浸泡24 h，裝柱，采用95%乙醇洗脫至乙醇:水（1:5）不變渾濁，再用蒸餾水洗至無醇味，抽濾至不滴水為準，備用。

2.3 靜態(tài)吸附法

取預處理后的8種樹脂各2 g，置150 mL錐形瓶，平行2份，精密加入50 mL黃芩提取液，時時振搖，放置24 h后，測定藥液濃度，計算樹脂吸附量[11]。吸附后用蒸餾水沖洗大孔樹脂表面，至水洗液無色，取樹脂約1 g，加70%乙醇50 mL，時時振搖，放置24 h，測定解吸液濃度，計算樹脂的解吸率，結(jié)果見表1。

表1 各樹脂靜態(tài)吸附量和解吸率

從吸附量看D101，HPD100，LSA-20和DA201-C對4種成分均有良好的吸附作用；從解吸率看HPD100，D101，HPD300和X-5對4種成分均有良好解吸附作用，綜合吸附和解吸附作用，同時考慮實驗成本，本實驗選擇D101型大孔吸附樹脂對黃芩進行純化工藝考察。

2.4 純化工藝參數(shù)考察

2.4.1 上樣濃度考察 取預處理后D101型大孔樹脂約6 g，裝柱（內(nèi)徑1.1 cm），徑高比1:10，上樣流速2 BV/h，準確吸取濃度為100 mg（生藥）/mL黃芩提取液50 mL，分別稀釋為100，80，60，40，20 mg．mL-1上樣液進行上樣，靜置2 h后以蒸餾水沖洗至無色，收集所有的淋洗液，測定含量，計算其吸附量，結(jié)果見表2。

表2 不同上樣濃度4種成分的吸附量

80 45.51 13.94 5.38 1.70 100 45.29 14.23 5.47 1.72

從結(jié)果看出上樣濃度為40 mg．mL-1時，D101大孔樹脂對4種黃酮類成分吸附作用均較好。

2.4.2 上樣流速考察 取預處理后D101型大孔樹脂約6 g，裝柱（內(nèi)徑1.1 cm），徑高比1:10，準確吸取濃度為40 mg．mL-1黃芩提取液125 mL，分別以1，2，

3，4 BV/h速度進行上樣，靜置2 h后以蒸餾水沖洗至無色，收集所有的淋洗液，測定含量，計算其吸附量，結(jié)果見表3。

表3 不同上樣流速4種成分的吸附量

從結(jié)果看出上樣流速為2 BV/h，D101大孔樹脂對4種黃酮類成分吸附作用均較好。

2.4.3 徑高比考察 取預處理后D101型大孔樹脂約6 g，不同規(guī)格柱子裝柱，使徑高比分別達到1:6，1:8，1:10，1:12，準確吸取濃度為40 mg．mL-1黃芩提取液125 mL，以2 BV/h速度進行上樣，靜置2 h后以蒸餾水沖洗至無色，收集所有的淋洗液，測定含量，計算其吸附量，結(jié)果見表4。

表4 不同徑高比4種成分的吸附量

從結(jié)果看出D101大孔樹脂對黃芩苷吸附作用徑高比1:10和1:12時較好，漢黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素徑高比1:8和1:10時較好，綜合考慮選擇徑高比為1:10。

2.4.4 吸附曲線繪制 取預處理后D101型大孔樹脂約6 g，裝柱（內(nèi)徑1.1 cm），徑高比1:10，準確吸取濃度為40 mg．mL-1黃芩提取液200 mL，以2 BV/h速度進行上樣，每5 mL收集一份，共40份，測定每份4種成分的濃度，繪制吸附曲線。

圖1 吸附曲線

從圖上看出，4種成分泄露點和飽和點不一樣，以泄露最快的黃芩苷計，淋洗液中黃芩苷的濃度從13份（65 mL）開始迅速增加，第25份（125 mL）時達到飽和；因此確定最大上樣量為65 mL，約6 BV。2.4.5 洗脫劑考察 按上述吸附條件進行上樣，上樣完畢靜置2 h后，用5 BV蒸餾水沖洗至無色，分別用50%，60%，70%，80%，90%（v/v）乙醇6 BV以2 BV/h速度洗脫，收集洗脫液，定容至100 mL，測定含量，計算洗脫率，結(jié)果見表5。

表5 不同體積分數(shù)乙醇對4種成分的洗脫率

70 96.84 95.21 90.30 89.92 80 92.23 92.29 95.64 95.13 90 71.88 79.89 99.36 98.44

從結(jié)果看出，70%～80%乙醇對4種成分的洗脫率均較高，達到90%左右，故選擇75%乙醇進行洗脫。

2.4.6 洗脫流速考察 按上述吸附條件進行上樣，上樣完畢靜置2 h后，用5 BV蒸餾水沖洗至無色，用75%（v/v）乙醇6 BV分別以1，2，3，4 BV/h速度洗脫，收集洗脫液，定容至100 mL，測定含量，計算洗脫率，結(jié)果見表6。

表6 不同洗脫流速對4種成分的洗脫率

從結(jié)果看出，洗脫流速為2 BV/h和3 BV/h時，4種成分的洗脫率差別不大，考慮洗脫時間，選擇3 BV/h進行洗脫。

2.4.7 洗脫曲線繪制 按上述吸附條件進行上樣，上樣完畢靜置2 h后，用5 BV蒸餾水沖洗至無色，用75%（v/v）乙醇以3 BV/h速度洗脫，收集洗脫液，每1 BV收集一份，測定每份的含量，計算洗脫率，繪制洗脫曲線。

圖2 洗脫曲線

從圖上看出，采用75%乙醇洗脫4 BV時黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素已基本洗脫完全，7 BV時漢黃芩素洗脫完全，故選擇7 BV進行洗脫。

2.5 驗證實驗

按上述的純化工藝參數(shù)進行實驗，平行3份，測定其吸附量和洗脫率，RSD均小于5%，說明工藝穩(wěn)定；將得到的洗脫液濃縮干燥為干膏，干膏率由提取液的45.30%降低為22.93%，黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素含量分別達到38.22%，8.91%，2.86%，0.89%，該工藝減低了干膏率，大大提高了4

種成分含量，適用于黃芩中4種成分的純化。

3 討論

3.1 大孔樹脂對化合物的吸附作用與藥物及大孔樹脂本身的性質(zhì)有關(guān)，D101型大孔樹脂是一種非極性樹脂，比表面積500～550 m2．g-1，平均孔徑為9～10 nm，適用于黃芩化學成分純化富集。同時大孔吸附樹脂孔徑較大，由于洗脫過程中洗脫劑比例變化，容易產(chǎn)生氣泡，會對洗脫效果造成很大影響；有研究報道[12]采用超聲波輔助能有效改善這一現(xiàn)象，但應用于工藝生產(chǎn)還需要進一步研究，同時參數(shù)也需要做相應的調(diào)整。

3.2 采用大孔樹脂純化黃芩的工藝已多有報道，但大多是以黃芩苷或者總黃酮為考察指標，而且工藝參數(shù)不詳細，本實驗以黃芩中主要的黃酮類成分黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素為指標，具有代表性，工藝穩(wěn)定可行。

[1] 李子,郝近大.黃芩本草考證[J].中藥材,2008,31(10):1584.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:282.

[3] 康輝,李強,王麗.黃芩提取物、黃芩苷抗氧化和保肝作用研究[J].中醫(yī)研究,2010,23(4):27.

[4] 楊凌,崔曉燕,張許.黃芩提取物的抗炎免疫作用研究[J].中國藥房,2007,18(24):1856.

[5] 劉通,李文華,周旋,等.黃芩提取物抑制金黃色葡萄球菌α-溶血素溶血活性的研究[J].中國預防獸醫(yī)學報,2013,35(10):809.

[6] 李世武,陳瑤.黃芩提取物及黃酮類化合物對肺癌作用機制的研究進展[J].臨床合理用藥雜志,2014,7(12):172.

[7] 許沛虎,高媛,張雪瓊,等.大孔樹脂純化黃連總生物堿的研究[J].中成藥,2009,31(3):390.

[8] 朱欣婷,劉云.大孔樹脂純化無花果葉總黃酮[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(6):13.

[9] 張若潔,徐永霞,王魯峰,等.大孔樹脂純化蘆筍總皂苷的工藝研究[J].中草藥,2012,43(6):1097.

[10] 張丹,劉有良,李鳳林.大孔樹脂純化人參莖葉提取液皂苷工藝研究[J].吉林農(nóng)業(yè)科技學院學報,2014,23(1):16.

[11] 朱中貴,蔡光明,張卓勇,等.大孔樹脂純化艾葉總黃酮的研究[J].解放軍藥學學報,2009,25(1):10.

[12] 趙麗戀,劉韶,羅杰英.大孔吸附樹脂-超聲波輔助解吸附法純化淫羊藿中的總黃酮[J].中國中藥雜志,2009,34(6):702.

(責任編輯：李蕓霞)

Purification process of four flavonoids in Huangqin by macroporous resin/

LI Rong, JIANG Yu-ting, LUO Li-ya, XIE Zeng-yi, CHEN Feng-ying, ZHENG Hang, WAN Li//(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; Key laboratory of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources in Sichuan Province—Key Laboratory Breeding Base of Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:To filter the best macroporous resin for purification of four flavonoids in Huangqin and optimize purification process conditions.Method:The contents of baicalin, wogonoside, baicalein and wogonin were used as indexes to determine the best purification process conditions by studying adsorption and desorption properties of macroporous resin.Result:D101 resin showed good purifcation for four favonoids in Huangqin. The best conditions were as following: the sample concentration was 40 mg (crude drug) / mL with the sample fow rate 2 BV/h and ratio of diameter to height 1:10. The maximum sample volume was 6 BV. And elute was 75%(v/v) ethanol with the elution fow rate of 3 BV/h. The amount of elute was 7 BV.Conclusion:Purifcation process using D101 macroporous resin is stable, simple and can be used in industrial production.

Macroporous resin; Huangqin; purifcation process

R 283.3

A

1674-926X(2015)02-013-04

成都中醫(yī)藥大學藥學院 中藥材標準化教育部重點實驗室四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用重點實驗室——省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137

李容，在讀碩士，從事中藥有效成分及質(zhì)量標準方向研究

Tel:15828534682 Email:15828534682@163.com

萬麗，教授，從事中藥有效成分及質(zhì)量標準方向研究 Email:wanli8801@163.com

2014-09-27