侯小娜

（遼寧省大連市金州新區(qū)疾病預(yù)防控制中心，遼寧大連116000）

腹瀉患者便檢出擬態(tài)弧菌分析

侯小娜

（遼寧省大連市金州新區(qū)疾病預(yù)防控制中心，遼寧大連116000）

目的：對(duì)腹瀉患者糞便中的擬態(tài)弧菌進(jìn)行檢測(cè)分析。方法：2014年9月，我們按WS289-2008霍亂弧菌診斷標(biāo)準(zhǔn)和中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部衛(wèi)生防疫司第五版霍亂防治手冊(cè)及大連市疾控中心《腸道致病菌檢測(cè)方法》和相關(guān)資料進(jìn)行霍亂弧菌、副溶血弧菌、擬態(tài)弧菌、河湖菌、氣單胞菌、類(lèi)志賀鄰單胞菌分離鑒定。結(jié)果：從1例腹瀉患者糞便中分離出一株擬態(tài)弧菌。結(jié)論：國(guó)外關(guān)于本菌引起人類(lèi)腹瀉及其他感染的報(bào)道在逐漸增多，但國(guó)內(nèi)報(bào)道極少，本次檢出將有助于國(guó)內(nèi)感染性腹瀉的研究。

腹瀉；梗檢；擬態(tài)弧菌

2014年9月，我們從1例腹瀉患者的便中分離出一株擬態(tài)弧菌，現(xiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)進(jìn)行分析。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本：2014年9月腹瀉患者致瀉性弧菌檢測(cè)。

1.2 試劑：培養(yǎng)基均由青島高科園海博生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，所有試劑均在其有效期內(nèi)使用。

1.3 診斷學(xué)清：均由寧波天潤(rùn)生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，均在其有效期內(nèi)使用。

1.4 方法：WS271-2007感染性腹瀉診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］及大連市疾控中心《腸道致病菌檢測(cè)方法》［2］和相關(guān)資料［3］進(jìn)行檢驗(yàn)。

1.4.1 鏡檢：取患者新鮮糞便鏡檢，取3%三糖鐵培養(yǎng)基培養(yǎng)物進(jìn)行涂片染色鏡檢。

1.4.2 增菌分離培養(yǎng)：用無(wú)菌棉簽蘸取患者新鮮糞便直接涂抹于SS平板、麥康凱瓊脂平板和慶大霉素平板進(jìn)行直接分離培養(yǎng)；同時(shí)將2～5g新鮮糞便接種到10ml堿胨水管中。堿胨水管放37℃增菌8～12h；從菌液生長(zhǎng)最茂盛的的菌膜下表層取一接種環(huán)，劃線接種于TCBS、SS、慶大霉素及麥康凱瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24h。

1.4.3 生化反應(yīng)：從平板上挑取可疑菌落轉(zhuǎn)種三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基并作氧化酶、耐鹽生長(zhǎng)試驗(yàn)，并接種半固體、硝酸還原試驗(yàn)、檸檬酸鹽、靛基質(zhì)、V-P、尿素酶、L-賴(lài)氨酸、L-鳥(niǎo)氨酸、L-精氨酸、葡萄糖、乳糖、麥芽糖、D-甘露醇、蔗糖、L-阿拉伯糖、纖維二糖、水楊素、明膠酶、苯丙氨酸脫羧酶、ONPG、神奈川試驗(yàn)。

1.4.4 血清學(xué)試驗(yàn)：取可疑菌落用霍亂弧菌O1群多價(jià)及O139群診斷學(xué)清診斷。

2 結(jié)果

從1例腹瀉患者糞便中分離出一株擬態(tài)弧菌。

2.1 鏡檢：取新鮮糞便鏡檢可見(jiàn)白細(xì)胞并伴有紅細(xì)胞懸滴標(biāo)本可見(jiàn)穿梭樣運(yùn)動(dòng)，涂片染色鏡檢該菌株為革蘭陰性弧菌。氧化酶陽(yáng)性，符合弧菌科細(xì)菌，繼續(xù)進(jìn)行鑒定。

2.2 培養(yǎng)特性：在3%氯化鈉堿性蛋白胨水中渾濁生長(zhǎng)，表面形成菌膜，在半固體瓊脂沿穿刺線擴(kuò)散生長(zhǎng)。菌株在SS和麥康凱瓊脂平板上形成中等大小，光滑濕潤(rùn)、無(wú)色，半透明的菌落，在慶大霉素平板上形成光滑濕潤(rùn)，邊緣整齊、中心呈灰黑色扁平菌落，酷似霍亂菌落，在血平板上菌落周?chē)纬赏该鳓氯苎h(huán)。3%氯化鈉三糖鐵培養(yǎng)基上底層產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，斜面不變，乳糖、蔗糖不分解，有動(dòng)力，不產(chǎn)硫化氫。

2.3 血清學(xué)試驗(yàn)：取可疑菌落用霍亂弧菌O1群多價(jià)及O139群診斷學(xué)清不凝集，試驗(yàn)為陰性。

2.4 生化反應(yīng)：氧化酶陽(yáng)性，賴(lài)氨酸脫羧酶陽(yáng)性，精氨酸雙水解酶陰性，鳥(niǎo)氨酸脫羧酶陽(yáng)性，液化明膠，尿素陰性，V-P陰性，硝酸鹽還原試驗(yàn)陽(yáng)性，靛基質(zhì)陽(yáng)性，檸檬酸鹽陰性，硫化氫陰性，苯丙氨酸脫羧酶陰性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，乳糖陰性，蔗糖陰性，麥芽糖陽(yáng)性，纖維二糖陰性。L-阿拉伯糖陰性，D-甘露醇陽(yáng)性，水楊素陰性，ONPG陽(yáng)性，無(wú)鹽胰胨水和3.0%胰胨水生長(zhǎng)，6.0%、8.0%、10.0%胰胨水均不生長(zhǎng)，神奈川試驗(yàn)陽(yáng)性。

結(jié)合以上形態(tài)學(xué)、血清學(xué)、生化試驗(yàn)、嗜鹽試驗(yàn)結(jié)果與擬態(tài)弧菌典型特性相符，由此確定該菌株為擬態(tài)弧菌。

3 討論

1981年從腹瀉患者糞便中檢出該菌，故由國(guó)外學(xué)者命名為“擬態(tài)弧菌”。擬態(tài)弧菌是今年新認(rèn)識(shí)的腹瀉病原菌，除美國(guó)發(fā)現(xiàn)外還曾從加拿大、墨西哥、新西蘭及一些亞洲國(guó)家發(fā)現(xiàn)。該菌廣泛存在于自然界河水、海水和海產(chǎn)品中，多呈散發(fā)或暴發(fā)，一年四季均有發(fā)病，以夏季為多。發(fā)病者多有吃生牡蠣、蝦蟹史。本例患者在發(fā)病14h前，曾進(jìn)食牡蠣，感染可能與此有關(guān)。

擬態(tài)弧菌系革蘭陰性弧菌在形態(tài)、特性與霍亂弧菌相似，實(shí)驗(yàn)室檢查應(yīng)引起注意，通過(guò)蔗糖、V-P試驗(yàn)、血清學(xué)加以鑒別。流行性腹瀉弧菌的檢測(cè)多集中在霍亂弧菌，然而非霍亂弧菌也可引起散發(fā)的病例。所以在日常工作中對(duì)于尤其對(duì)于疑似霍亂患者的診斷，當(dāng)和霍亂診斷學(xué)清不發(fā)生凝集時(shí)，就應(yīng)該考慮進(jìn)一步做其他致病性弧菌的檢測(cè)，這樣會(huì)大大提高致病菌的檢測(cè)率。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn).北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：11-12.

［2］腸道致病菌檢測(cè)方法.大連：大連市疾控中心，2013：1-4.

［3］俞樹(shù)榮.微生物學(xué)和微生物學(xué)檢驗(yàn)［M］.2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：190-191.

R442.2

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1002－2376（2015）11－0094－02

2015－08－24