張 瑩

(天津市藥品檢驗所，天津 300070)

?

藥品快速分析的研究進展

張 瑩

(天津市藥品檢驗所，天津 300070)

藥品快速分析技術的開展，以其全面、科學、簡便快捷的分析方法已在藥品分析領域得到越來越廣泛的應用。本文闡述了近幾年應用于藥品快速檢驗分析比較常用的光譜法、色譜與質譜方法、微生物檢查法以及酶聯(lián)免疫檢查法，并對這些分析方法的發(fā)展做了展望。

藥品，快速分析，光譜法，色譜與質譜法，微生物檢驗法，酶聯(lián)免疫檢測法

當前，藥品領域不斷出現(xiàn)制假售假事件，手段不斷翻新,已給百姓的身體健康帶來了嚴重的危害。傳統(tǒng)的藥品鑒別及含量測定方法對于現(xiàn)場抽檢、藥品快速定性和定量分析，有一定局限性。因此藥品快速分析技術也越來越得到重視，檢測檢驗機構及儀器生產廠商紛紛緊跟形勢，檢測技術也是不斷創(chuàng)新?？焖俜治龅膬?yōu)勢在于簡單、迅速、經濟、環(huán)保，便于現(xiàn)場檢測和突發(fā)事件的快速處理。其作為一個現(xiàn)場篩查的手段并非是最終結果判定的仲裁方法，但可以提高監(jiān)督抽驗的假劣藥品的命中率，更好地發(fā)揮藥品檢驗機構監(jiān)督作用。以下本文就藥品快速分析的研究進展做一綜述。

1 光譜法快速分析

1.1 近紅外光譜的應用 近紅外光譜(NIR)分析是利用有機化合物在近紅外譜區(qū)的光學特性，快速測定物質化學組成和分子結構的光譜技術，光譜范圍介于可見光譜區(qū)與中紅外光譜區(qū)之間，波數(shù)范圍為12 800～4 000 cm-1。該法簡單、快速、高效、環(huán)保，可直接分析固體樣品，目前已廣泛應用于藥品質量控制和在線分析。

王海波等[1]對國內多家生產企業(yè)的頭孢克肟膠囊進行分析，實驗采用光纖探頭測定近紅外漫反射光譜，定量模型的預處理方法是一階導數(shù)同矢量歸一化，波數(shù)范圍：11 995.2～7 498 cm-1和6 101.7～5 773.9 cm-1，采用偏最小二乘回歸算法(PLSR) 對頭孢克肟膠囊進行快速、無損定量分析。定性方面能夠將頭孢克肟膠囊與其他頭孢菌素類膠囊相區(qū)別，以此作為鑒別。鄭方曄等[2]采用近紅外光譜手段快速定性及定量分析呋喃妥因腸溶片，實驗選用第二和第三因子建立不同品種定性鑒別模型，用以消除其他干擾因素的影響。定量模型建立的關鍵是找到特定譜段，選擇最合適的光譜預處理方法，消除輔料的干擾，顯示出正確的活性成分。本方法測定結果準確、操作簡便，適合于藥品快速檢驗。侯少瑞等[3]采用近紅外光譜法快速分析注射用頭孢曲松鈉的含量及其水分。

李家春等[4]建立近紅外光譜技術快速測定白芍藥材芍藥苷的方法，實驗以高效液相色譜法測定樣品中芍藥苷的含量，使用偏最小二乘(PLS)法建立白芍藥材中芍藥苷含量與其近紅外光譜之間的多元校正模型，可以對未知樣品預測含量。結果表明，該方法為白芍藥材質量的快速評價和在線檢測提供了依據(jù)，可用于白芍藥材中芍藥苷含量的快速分析。同樣，肖浩等[5]利用近紅外光譜法能夠準確地區(qū)分廣升麻藥材與其混用品。戴涌等[6]運用近紅外光譜法對呋喃妥因腸溶片進行一致性檢驗。

1.2 光纖傳感紫外光譜的應用 近些年，新疆醫(yī)科大學在光纖傳感技術應用于藥物檢驗檢測方面做了許多工作。例如：李莉等[7]將光纖傳感紫外光譜技術應用于氫氯噻嗪片快速定量分析。該方法將傳輸信號的光導纖維、光纖探頭、光譜儀和計算機軟件數(shù)據(jù)處理功能相結合，探頭直接插入待測樣片的溶液里，很快得到待測樣品的特征圖譜，與標準圖譜庫中的標準圖譜及相關信息相比較分析并計算出樣品含量。為了消除輔料干擾，實驗采用雙波長法，該法樣品無需過濾。測定結果表明，樣品圖譜與標準圖譜特征參數(shù)相互符合；氫氯噻嗪在10～60 μg/ml濃度范圍之內，線性關系良好(r=0.999 7)，回收率為100.05%，與《中國藥典》方法(高效液相色譜法)測定結果非常接近(P>0.05)。同樣的方法，馮翠娟等[8]采用光纖傳感分析技術對鹽酸普萘洛爾片進行快速定性及定量分析。靳露等[9]結合紫外光譜建立了光纖傳感分析技術快速分析甲硝唑片的方法。李莉等[10]運用光纖傳感技術快速定量分析復方卡托普利片。

1.3 原子光譜的應用 原子吸收分光光度法(AAS)是利用氣態(tài)原子可以吸收一定波長的光輻射，使原子中外層的電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)的現(xiàn)象而建立的。由于各種原子中電子的能級不同，將選擇性吸收一定波長的輻射光，這個共振吸收波長恰好等于該原子受激發(fā)后發(fā)射光譜的波長，由此可作為元素定性的依據(jù)，而吸收輻射的強度可作為定量的依據(jù)。該法準確度高、檢出限低、選擇性好、分析速度快、應用廣，主要用于樣品微量和痕量分析中。

近些年，微波消解的制樣方法廣泛應用于中藥的痕量分析上，運行等[11]采用微波消解-原子熒光光譜法測定了宮瘤消片中砷、鎘的含量，結果砷、鎘的線性范圍為0～25.0 μg/L(r>0.999 2)，砷的最低檢出量為 5.1 μg/kg，鎘的最低檢出量為0.7 μg/kg，回收率為91.5%～97.8%,RSD<5%。表明該方法簡便、快速、準確，結果令人滿意。劉全德等[12]采用直接進樣石墨爐原子吸收分光光度法測定雙黃連口服液中的鉛含量?；w改進劑為十二烷基硫酸鈉，氬氣作為保護氣體，灰化溫度為600 ℃，原子化溫度為1 800 ℃。該方法簡便，無污染，分析范圍廣并可準確測定含量。何曉梅等[13]建立微波消解-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測定二氧化鈦中痕量砷和銻。

2 色譜與質譜法快速分析

2.1 液相色譜法 高效液相色譜法(HPLC)是藥品檢驗中最為常用的一種方法，具有分離效能高、分析速度快、選擇性強及靈敏度高等諸多優(yōu)點。超臨界流體色譜(SFC)是以超臨界流體作為流動相的一種色譜方法，兼具氣相色譜和液相色譜的特點，分析速度更快。李振宇等[14]采用超臨界流體色譜技術對吳茱萸中吲哚類生物堿進行快速分析，以Waters ACQUITY UPC2BEH為色譜柱，柱溫35 ℃，背壓為2.07×107Pa，改性劑為甲醇，多組分樣品在15 min內達到快速分析，結果令人滿意。張琳等[15]建立微波萃取高效液相色譜法快速分析牽牛子中咖啡酸，提取時間將索氏提取法的540 min縮減為5 min。結果采用微波萃取法,咖啡酸與其他雜質峰分離度較好，選擇性強。董玉等[16]建立高效液相色譜法測定蒙藥冬葵果中咖啡酸的含量。

2.2 質譜法 質譜法(MS)是用電場和磁場將運動的離子按照質荷比分離后進行檢測的方法。測得離子準確質量后確定離子的化合物組成。通過分析離子從而獲得化合物分子量、化學結構、裂解規(guī)律等相關信息。該方法微量、快速，可以準確測定相對分子質量，因此在樣品快速分析中發(fā)揮著重要作用。

陳榮等[17]利用阿莫西林的不穩(wěn)定性，對降解產物放電產生大量試劑離子，特征降解產物離子流圖與阿莫西林總離子流質譜圖進行比對與確認，用一級質譜快速分析阿莫西林抗生素類藥物。胡斌等[18]利用納升電噴霧萃取電離質譜法(NanoEESI-MS)對人參皂苷的結構進行定性分析，快速鑒別人參。該法快速且準確，有很大的應用價值。

2.3 液相色譜-質譜聯(lián)用法 液相色譜-質譜聯(lián)用(LC-MS)接口技術的研究始于上世紀70 年代初，開始的20年發(fā)展非常緩慢，直到大氣壓離子化(API)接口技術的問世，液-質聯(lián)用才得到迅猛發(fā)展，因其選擇性強、靈敏度高、可以一次完成分離與結構的確認，而廣泛應用于實驗室內分析和應用領域。馮廣衛(wèi)等[19]確立超高效液相色譜-電噴霧電離質譜(UPLC-ESI/MS)快速鑒別和分析葒草素與異葒草素、牡荊素與異牡荊素碳苷化合物的方法。實驗選用BEH C18作為固定相，以甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)為流動相，梯度洗脫，流速為0.3 ml/min,進樣量為2 μl,用三重四極桿質譜的正離子多反應監(jiān)測(MRM)結合碰撞誘導解離(CID)快速并準確地鑒別和分析兩對異構體。汪祺等[20]以生脈注射液高效液相色譜指紋圖譜為基礎，建立超高效液相色譜指紋圖譜，將時間從90 min減至25 min，利用超高效液相色譜與離子阱質譜聯(lián)用，為藥物分析提供了高效且靈敏的分析技術，同時提高藥品質量控制水平。

2.4 氣相色譜-質譜聯(lián)用法 氣相色譜-質譜聯(lián)用法(GC-MS)是當前最成熟且應用最為廣泛的技術，多用于鑒別和分離復雜組分的樣品，并具有較高的靈敏度和分辨率。張福成等[21]采用離子液體-頂空氣相色譜-質譜聯(lián)用技術快速分析百草油中揮發(fā)性成分。實驗采用HP-5MS 彈性石英毛細管氣相色譜柱；程序升溫方式，起始溫度為 100 ℃，以 4 ℃/min 升至 112 ℃，再以10 ℃/min升至182 ℃，保持10 min；分流進樣比為50∶1，結果總共檢測出百草油中的11種揮發(fā)性成分，適用于百草油中揮發(fā)性成分的快速鑒定。趙錦花等[22]采用氣流吹掃微注射器萃取同氣相色譜-質譜聯(lián)用法快速分析長白山不同區(qū)域的人參中揮發(fā)性與半揮發(fā)性成分快速分析方法，分離出45種化合物，不同區(qū)域人參中揮發(fā)性與半揮發(fā)性成分組成相近，但含量結果差異顯著。

3 其他方法

3.1 微生物檢驗法 當今，越來越多采用分子生物學和生物發(fā)光微生物檢驗技術進行快速分析。2010年版《中國藥典》[23]也提出了微生物檢驗替代方法驗證的指導原則，規(guī)定在采用新方法替代時必須做方法學驗證。王知堅等[24]用紙片法替代《中國藥典》方法對厄多司坦膠囊菌落計數(shù)，通過數(shù)據(jù)處理，分析結果表明，紙片法所有驗證參數(shù)同《中國藥典》方法非常接近，無顯著差異(P>0.05)，且該方法快速、準確，可用于厄多司坦膠囊菌落計數(shù)的快速分析。

3.2 酶聯(lián)免疫檢測法 酶聯(lián)免疫檢測法(ELISA)是采用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接，然后通過酶與底物產生顏色反應，用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原?？乖蚩贵w先結合在固相載體上，加一種抗體或抗原與酶結合成的偶聯(lián)物(標記物)，當偶聯(lián)物與固相載體上的抗原或抗體反應結合后，再加上酶的相應底物催化水解而產生顏色，其顏色與待測的抗原或抗體含量成正比。由于該法簡單、靈敏、分析迅速、特異性強，近來被越來越多地應用于抗生素殘留分析當中。劉兵等[25]運用混合酸酐法，將恩諾沙星與牛血清白蛋白和卵清蛋白分別制備免疫抗原和包被抗原，然后用背部多點皮下注射免疫日本大耳白兔，進行抗恩諾沙星特異性抗血清的制備，利用特異性抗血清，建立了監(jiān)控體內恩諾沙星濃度的酶聯(lián)免疫檢測法，結果該方法具有良好的相關性，可用于初篩及現(xiàn)場檢測，并為開發(fā)抗生素檢測試劑盒提供參考。

4 展望

綜上所述，藥品快速分析方法的應用順應了藥品安全事件頻發(fā)對藥品快速檢驗的迫切需求。伴隨著人類社會的發(fā)展，人們的環(huán)保意識日漸增強，因此評價或選擇分析方法應將操作簡單、快速、預測結果準確、影響因素少等方面作為重要指標。隨著聯(lián)用技術在藥品快速分析方面的應用越來越廣，必將對我國藥物快速分析研究起巨大推動作用。

1 王海波,朱健萍,鄧鳴,等.近紅外光譜法快速分析頭孢克肟膠囊的含量[J].中國抗生素雜志，2014,39(1)：45-48

2 鄭方曄,李小安,單敏,等. 近紅外光譜法在呋喃妥因腸溶片快速分析中的應用[J]. 藥物分析雜志,2014,34(4):742-746

3 侯少瑞,馮艷春,胡昌勤,等.近紅外光譜法快速分析注射用頭孢曲松鈉的含量及其水分[J].藥物分析雜志，2008,28(5)：936-936

4 李家春,蕭偉,孫蘭,等. 基于近紅外光譜的白芍藥材快速分析[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(6):57-59

5 肖浩,嚴小紅,江英橋,等. 近紅外光譜法快速分析廣升麻藥材[J].中國新藥與臨床藥理,2013,24(5):506-509

6 戴涌,李小安,劉雪峰,等. 運用近紅外光譜法對呋喃妥因腸溶片進行一致性檢驗[J]. 藥物分析雜志,2010,30(11):2153-2156

7 李莉,李思棟,孫曉偉,等. 光纖傳感技術在氫氯噻嗪片快速分析中的應用[J].新疆醫(yī)科大學學報,2013,36(6):780-784

8 馮翠娟，李莉，張春玲，等.光纖傳感技術在普萘洛爾片快速分析方法學建立[J].藥物分析雜志，2012，32(4)：701-705

9 靳露,李莉,李新霞, 等. 光纖傳感技術結合紫外光譜相似度快速分析甲硝唑片[J]. 藥學學報,2011,46(2):203-206

10 李莉,李思棟,孫穎平,等. 光纖傳感技術快速定量分析復方卡托普利片[J].中國現(xiàn)代應用藥學,2013,30(7):763-770

11 運行,安迎雪,尤海丹, 等. 微波消解-原子熒光光譜法測定宮瘤消片中的砷、鎘[J]. 藥物分析雜志,2012,32(2):289-291

12 劉全德,劉恩岐,唐仕榮，等. 直接進樣石墨爐原子吸收測定雙黃連口服液中鉛的含量 [J].藥物分析雜志, 2012,32(2):292-295

13 何曉梅,符靚,聶西度, 等. 微波消解-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測定二氧化鈦中痕量砷和銻[J].冶金分析 ,2009,29(11):54-57

14 李振宇,傅青,李奎永，等. 超臨界流體色譜對吳茱萸中吲哚類生物堿的快速分析[J].色譜,2014,32(5):506-512

15 張琳,盧彥芳,蔣曄, 等. 微波萃取-HPLC法快速分析牽牛子中的咖啡酸[J]. 華西藥學雜志,2013,28(1):92-93

16 董玉,馬強, 等. 高效液相色譜法測定蒙藥冬葵果中咖啡酸的含量[J]. 成都中醫(yī)藥大學學報,2010,33(1):76-78

17 陳榮,鄧慧宇,石俊. 熱降解輔助表面解吸常壓化學電離質譜對阿莫西林的分析[J]. 藥物分析雜志,2012,32(3):478-482

18 胡斌,越皓,黃科科, 等.納升電噴霧萃取電離質譜快速測定人參皂苷[J].高等學?；瘜W學報,2011,32(6):1289-1294

19 馮廣衛(wèi),李翠兵,廖尚高，等. 葒草素和異葒草素、牡荊素和異牡荊素2對碳苷化合物的快速檢測與鑒定[J]. 藥物分析雜志,2011,31(7):1263-1268

20 汪祺,鄭笑為,于健東，等. 生脈注射液超高效液相色譜指紋圖譜的建立及特征成分分析[J]. 藥物分析雜志,2012,32(10):1813-1817

21 張福成,倪美萍,王朝虹, 等. 離子液體-頂空GC-MS法快速分析百草油中的揮發(fā)性成分[J]. 中國藥房,2013,24(39):3705-3076

22 趙錦花,楊翠,王娟, 等. 長白山不同區(qū)域人參中揮發(fā)性、半揮發(fā)性成分的研究[J]. 延邊大學學報,2014,40(1):85-88

23 中國藥典[S].二部.2010：附錄216-219

24 王知堅,李玨. 厄多司坦膠囊菌落計數(shù)替代方法的驗證[J]. 藥物分析雜志,2011,31(11):2146-2149

25 劉兵,曾華金,楊冉, 等. 抗恩諾沙星抗血清的制備及其ELISA檢測[J]. 藥物分析雜志,2011,31(7):1283-1287

2014-10-10

R927.11

A

1006-5687(2015)02-0076-03