楊海玲，胡昌江，吳珊珊

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610072；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001)

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中藥色譜指紋圖譜在中藥炮制研究中的應(yīng)用

楊海玲1,2，胡昌江1*，吳珊珊1

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610072；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001)

查閱中藥色譜指紋圖譜在中藥炮制研究中的應(yīng)用相關(guān)資料，分析整理，以期為提高炮制品質(zhì)量和臨床療效提供參考依據(jù)。其中色譜指紋圖譜中以HPLC指紋圖譜在中藥炮制研究中應(yīng)用最為廣泛，薄層色譜指紋圖譜等其他方法也有一定的應(yīng)用。

中藥色譜指紋圖譜；中藥炮制；應(yīng)用

隨著世界經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，國際經(jīng)濟(jì)全球化對中藥產(chǎn)業(yè)提出了國際化、現(xiàn)代化的要求，因此如何實(shí)現(xiàn)中藥質(zhì)量的科學(xué)化、系統(tǒng)化評(píng)價(jià)成為制約中藥現(xiàn)代化及國際化的瓶頸。中藥炮制為我國獨(dú)有的傳統(tǒng)制藥技術(shù)，也是中醫(yī)用藥特色之一,中藥飲片為中醫(yī)臨床的主要藥物形式。飲片質(zhì)量的優(yōu)劣將直接影響藥物臨床療效。中藥色譜指紋圖譜可對樣品的整體輪廓進(jìn)行較直觀觀察，不僅能較全面地反映所含成分的相對關(guān)系，還能較好體現(xiàn)中藥成分的復(fù)雜性和相關(guān)性，更好地鑒別炮制品種，評(píng)價(jià)及控制炮制品的質(zhì)量，保證中醫(yī)臨床療效，從而有利于中藥的現(xiàn)代化和國際化。

1 中藥色譜指紋圖譜概念與分類

中藥色譜指紋圖譜是指采用色譜方法及其他聯(lián)用技術(shù)，建立同種中藥材、中藥飲片或制劑共有組分群體的特征圖譜或圖像，包括TLC、HPLC、GC和高效毛細(xì)管電泳指紋圖譜[1]。中藥色譜指紋圖譜對中藥材、中藥飲片及其制劑的定性和定量研究進(jìn)行中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)和控制，也是目前公認(rèn)的中藥質(zhì)量控制模式。

2 中藥色譜指紋圖譜在中藥炮制研究中的應(yīng)用

2.1 薄層色譜(TLC)指紋圖譜

中藥材及其炮制品以其化學(xué)成分的多樣性和模糊性為特點(diǎn),以薄層色譜指紋圖譜為基礎(chǔ)進(jìn)行分析,具有快速、操作簡便、分析成本低、結(jié)果形象直觀等優(yōu)點(diǎn)。采用PCA把薄層色譜指紋圖譜作為一個(gè)整體,避免以單純某指標(biāo)或某幾個(gè)指標(biāo)分析的不確定性,反映總化學(xué)特征。TCL指紋圖譜多用于中藥飲片各種成分的定性鑒別。徐臘英等[2]采用薄層鑒別方法研究蒼術(shù)麩炒前后的化學(xué)成分變化，該法操作簡便,斑點(diǎn)明顯,分離度和重現(xiàn)性好,可用于蒼術(shù)藥材定性鑒別和輔料的研究。高曉霞等[3]運(yùn)用薄層色譜指紋圖譜方法對10份不同采集地制何首烏樣品進(jìn)行研究，該方法可快速有效鑒別制何首烏,并為其質(zhì)量評(píng)價(jià)及品種整理提供新的證據(jù)。王彥青[4]采用薄層指紋圖譜對延胡索的醋烘、醋煮、醋炙、酒炙炮制品進(jìn)行鑒別研究，為醋元胡臨床用藥安全性奠定了基礎(chǔ)。

2.2 高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜

HPLC適用于成分復(fù)雜而不易分離的分析對象，具有分離效能高、靈敏度高、 分析速度快、檢測手段多等優(yōu)點(diǎn)，因此在中藥飲片產(chǎn)地加工、凈制、切制、炮炙及炮制輔料的質(zhì)量控制方面均有廣泛運(yùn)用。仇立志[5]通過HPLC法建立不同產(chǎn)地懷牛膝飲片及最佳工藝硫磺熏蒸鮮牛膝飲片的指紋圖譜，篩選硫磺熏蒸懷牛膝最佳炮制工藝，并為懷牛膝飲片的質(zhì)量評(píng)價(jià)及安全使用提供依據(jù)。馬曉靜等[6]采用相似度計(jì)算結(jié)合聚類分析法對19批金銀花進(jìn)行比較分析,建立硫磺熏蒸前后金銀花HPLC指紋圖譜，為評(píng)價(jià)硫磺熏蒸前后金銀花樣品的質(zhì)量優(yōu)劣提供依據(jù)。王莉等[7]利用HPLC法建立凈制前后湖北貝母的指紋圖譜, 該方法可有效控制湖北貝母飲片的質(zhì)量，為進(jìn)一步研究貝母炮制機(jī)理提供參考。劉艷芳等[8]運(yùn)用多指標(biāo)定量結(jié)合指紋圖譜分析方法對遠(yuǎn)志根皮、根及木心的化學(xué)成分進(jìn)行定性和定量分析，該研究為制定遠(yuǎn)志科學(xué)炮制加工方法提供一定的參考。張洪利等[9]通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，HPLC指紋圖譜技術(shù)結(jié)合抑菌藥效試驗(yàn)優(yōu)選姜黃連飲片最佳工藝。曹建軍等[10]利用HPLC指紋圖譜技術(shù)，確定了熟地黃炮制終點(diǎn)。肖二等[11]采用HPLC-UV分別對榼藤子生品和炮制品的指紋圖譜進(jìn)行研究，該方法全面反映榼藤子炮制前后化學(xué)成分的差異,可用于控制生品和炮制品的內(nèi)在質(zhì)量。何曉燕等[12]采用HPLC指紋圖譜對檳榔炒制過程物質(zhì)基礎(chǔ)變化進(jìn)行研究，為揭示檳榔炮制原理提供依據(jù)。王榮[13]對四川、浙江、陜西三個(gè)產(chǎn)地炮制方法不同的制延胡索和鮮延胡索進(jìn)行分析,確定延胡索鮮品和炮制品指紋圖譜中有效成分種類、含量的差異。孔繁瑤等[14]采用高效液相指紋圖譜方法對豨薟草生品及炮制一至九制品進(jìn)行研究，為豨薟草炮制過程中化學(xué)成分變化規(guī)律和進(jìn)一步闡明其療效改變奠定基礎(chǔ)。耿媛媛等[15]采用HPLC法建立二神丸不同提取部位的指紋圖譜，并采用灰關(guān)聯(lián)分析法建立其譜效關(guān)系，為二神丸的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考，也為進(jìn)一步研究二神丸的炮制機(jī)制奠定基礎(chǔ)。張麗等[16]對生姜榨汁、生姜煮汁、干姜煮汁三種不同制法所得炮制輔料姜汁進(jìn)行RP-HPLC指紋圖譜比較研究，較全面反映不同制法姜汁含量的差異。

2.3 氣相色譜(GC)指紋圖譜

GC具有高效、高選擇性、進(jìn)樣量少及分析速度快等優(yōu)點(diǎn)，主要運(yùn)用于含揮發(fā)性成分中藥飲片及其制劑中揮發(fā)油的鑒別與比較。在具體應(yīng)用中，為解決圖譜中多數(shù)色譜峰的歸屬，常與質(zhì)譜檢測器(MS)聯(lián)用。劉沁[17]采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，分析炮制前后的斑蝥脂肪油并分離鑒定出10種脂肪酸成分，結(jié)果顯示炮制對斑蝥脂肪酸組成影響不大。吳國清等[18]運(yùn)用毛細(xì)管氣相色譜法對薏苡仁生品及炮制品提取物進(jìn)行分析，該研究全面反映薏苡仁揮發(fā)性化學(xué)成分，為薏苡仁生品及炮制品的質(zhì)量控制提供有效手段。耿媛媛等[19]采用GC-MS分析二神丸中補(bǔ)骨脂和肉豆蔻的炮制對其4種組合揮發(fā)性成分的影響，研究證實(shí)補(bǔ)骨脂和肉豆蔻炮制后入藥可降低毒性。王加等[20]利用GC-MS聯(lián)用技術(shù)鑒別生川烏和制川烏揮發(fā)性成分，為川烏的進(jìn)一步研究提供科學(xué)依據(jù)。戴建業(yè)等[21]通過血清代謝組學(xué)方法，運(yùn)用GC-MS技術(shù)分析大鼠體內(nèi)代謝物質(zhì)及代謝通路，從整體代謝角度觀測給藥后大鼠存在的代謝差異，評(píng)價(jià)和探討醋炙柴胡與生柴胡對于機(jī)體代謝的影響。

2.4 高效毛細(xì)管電泳指紋圖譜

高效毛細(xì)管電泳(HPCE)具有分離效率高、靈敏、快速等特點(diǎn)，是近年來發(fā)展的一種新的分離技術(shù)，為電泳技術(shù)和層析技術(shù)結(jié)合的產(chǎn)物。目前，HPCE在中藥炮制品成分分析與比較研究中也有一定的應(yīng)用，為飲片鑒別及質(zhì)量評(píng)價(jià)提供更加全面可靠的依據(jù)。李俊松等[22]建立以9個(gè)共有峰為特征指紋信息的山茱萸飲片高效毛細(xì)管電泳指紋圖譜,可作為控制山茱萸飲片內(nèi)在質(zhì)量的有效手段。施婧妮等[23]運(yùn)用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法，建立10批生鱉甲和10批醋鱉甲有效物質(zhì)部位的指紋圖譜,并進(jìn)行比較研究，結(jié)果顯示鱉甲炮制前后化學(xué)成分及其含量發(fā)生變化,且炮制后產(chǎn)生一些新的有效成分。張英等[24]運(yùn)用高效毛細(xì)管電泳法對杜仲炮制前后綠原酸的含量進(jìn)行分析，該研究為杜仲的炮制提供參考依據(jù)。

2.5 色譜聯(lián)用技術(shù)指紋圖譜

隨著科學(xué)的不斷發(fā)展，色譜光譜聯(lián)用指紋圖譜技術(shù)也逐漸運(yùn)用于中藥炮制研究。馮慧萍等[25]運(yùn)用HPLC-DAD-MS法建立厚樸及其炮制品的色譜指紋圖譜，該方法全面反映厚樸化學(xué)成分及其炮制前后的差異。李文濤等[26]采用超高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC/Q-TOF-MS)進(jìn)行蜜炙前后槐角成分分析與比較, 通過散點(diǎn)圖(S-ploting)中的VIP值分析槐角蜜炙前后指紋圖譜的差異,得到潛在差異最明顯的化學(xué)標(biāo)記物,為從化學(xué)成分角度闡釋槐角蜜炙后增效機(jī)理提供依據(jù)。王增繪等[27]運(yùn)用超高效液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測補(bǔ)骨脂炮制前后成分變化，得到潛在的化學(xué)標(biāo)記物。該研究成果對于研究補(bǔ)骨脂鹽炙的炮制原理具有重要意義，同時(shí)也為闡明補(bǔ)骨脂鹽炙品藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供重要依據(jù)。李鳳玲等[28]采用HPLC-ESI-MS聯(lián)用技術(shù)，對多批次不同溫度炮制的山楂炭甲醇提取物進(jìn)行分析，建立山楂炭的特征圖譜，為山楂炭質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

3 結(jié)語

綜上所述，中藥色譜指紋圖譜在中藥炮制中產(chǎn)地加工、凈制、切制、炮炙的全過程及炮制輔料質(zhì)量控制方面有著廣泛的應(yīng)用，有利于從化學(xué)成分角度闡述炮制的科學(xué)性，還有利于科學(xué)化、系統(tǒng)化地控制飲片質(zhì)量，為提高和保證臨床療效提供依據(jù)。在中藥炮制研究中，應(yīng)根據(jù)藥物成分的基本性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)纳V指紋圖譜研究方法，為今后實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化及國際化發(fā)揮更重要的作用。

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(責(zé)任編輯：李嵐春)

2015-01-15

廣西高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(LX2014170)；廣西中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)博士點(diǎn)建設(shè)工程開放課題(201410-14)

楊海玲(1980-)，女，廣西中醫(yī)藥大學(xué)講師,成都中醫(yī)藥大學(xué)在職博士，研究方向?yàn)橹兴幣谥茩C(jī)理及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

胡昌江(1952-)，男，成都中醫(yī)藥大學(xué)教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幣谥茩C(jī)理及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。E-mail: hhccjj@hotmail.com

R284;O657.7

A

1673-2197(2015)10-0055-02

10.11954/ytctyy.201510023