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2.2 京大戟及其炮制品總萜類(lèi)含量測(cè)定

2.2.1 供試品溶液制備 分別取兩種京大戟供試品粉末(過(guò)65目篩)0.2g，精密稱(chēng)定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20mL稱(chēng)重，超聲(功率250W，頻率50kHz)處理30min后再稱(chēng)重，以甲醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.2.2 吸收波長(zhǎng)確定 取對(duì)照品0.5mL和供試品0.1mL置于具塞試管中，水浴揮干溶劑，分別加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.5mL，高氯酸0.6mL，搖勻。于100 ℃水浴加熱30min，取出，流水冷卻2min，精密加入冰醋酸5mL，搖勻。分別以相應(yīng)的試劑為空白，于400～800nm處掃描，由掃描結(jié)果確定測(cè)定波長(zhǎng)為570nm，結(jié)果見(jiàn)圖2、圖3、圖4。

圖1 京大戟總萜顯色條件考察

圖2 大戟二烯醇顯色后可見(jiàn)光譜

圖3 京大戟生品顯色后可見(jiàn)光譜

圖4 京大戟醋制品顯色后可見(jiàn)光譜

2.2.3 線性關(guān)系考察 精密量取大戟二烯醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL置于具塞試管中，水浴揮干溶劑，分別加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.5mL，高氯酸0.6mL，搖勻。于100 ℃水浴加熱30min，取出，流水冷卻2min，精密加入冰醋酸5mL，搖勻。分別以相應(yīng)的試劑為空白，照分光光度法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄Ⅴ分光光度法)于570nm處測(cè)定吸收度。以吸收度為縱坐標(biāo)(Y)，對(duì)照品的量(mg)為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：y=9.949 8x-0.054 9(r=0.999 1)。大戟二烯醇在12.12～96.96μg之間與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。結(jié)果見(jiàn)表6，線性關(guān)系見(jiàn)圖5。

2.2.4 精密度實(shí)驗(yàn) 取0.5mL對(duì)照品顯色后溶液，連續(xù)測(cè)定6次，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表7，結(jié)果RSD為0.17%。表明該方法精密度良好。

表6 大戟二烯醇標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖5 大戟二烯醇標(biāo)準(zhǔn)曲線

序號(hào)吸收度A平均吸收度ARSD(%)10．67020．66930．6700．6690．1740．66950．66860．667

2.2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 以JDJ-1供試品顯色后溶液為考察對(duì)象，間隔若干時(shí)間測(cè)一次，共測(cè)7次，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表8，RSD為0.31%，結(jié)果表明供試品當(dāng)中總萜類(lèi)成分在2h內(nèi)穩(wěn)定。

表8 穩(wěn)定性考察結(jié)果

2.2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 依法處理JDJ-1供試品 6份，依上法測(cè)定。重復(fù)性結(jié)果總萜類(lèi)的平均含量為55.751mg·g-1，RSD為2.7%，結(jié)果表明該試驗(yàn)重復(fù)性較好，結(jié)果見(jiàn)表9。

表9 總萜類(lèi)成分重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.2.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取JDJ-1供試品 6份，每份0.1g，依上法制得供試品溶液，取0.1mL置于具塞試管中，并向其中加入0.2mL(0.121 2mg·mL-1)大戟二烯醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液。依法測(cè)定，并計(jì)算平均回收率以及RSD，結(jié)果見(jiàn)表10。

表10 總萜類(lèi)成分加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.8 樣品含量測(cè)定 取2份供試品，如法測(cè)定。樣品測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表11。

表11 京大戟不同炮制品含量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)果與討論

在考察顯色條件時(shí)，經(jīng)過(guò)多次對(duì)照試驗(yàn)，最終確定加入5%香草醛-冰醋酸0.5mL和高氯酸0.6mL，并放入沸水浴加熱30min反應(yīng)基本完全，尤其在進(jìn)行沸水浴加熱時(shí)間考察時(shí)，當(dāng)加熱45min紫外掃描就會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)尖峰，對(duì)后續(xù)測(cè)定造成干擾，因此最終確定加熱時(shí)間為30min。

該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，京大戟中總萜成分含量在醋制后比生品含量略低，即含量高低為：京大戟生品>京大戟醋制品，說(shuō)明醋煮對(duì)京大戟中總萜含量有一定的降低作用，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果也可以推測(cè)京大戟醋制后總萜類(lèi)成分含量的降低可能與京大戟醋制減毒有一定的相關(guān)性。

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(責(zé)任編輯：尹晨茹)