鄧新娜，吳海江，高 飛，范曉燕，趙 靜，閆永龍，楊 濤，蔡建輝

(1. 河北省人民醫(yī)院，河北 石家莊 050051；2. 河北醫(yī)科大學(xué)，河北 石家莊 050017)

DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合中藥治療晚期非小細(xì)胞肺癌的研究

鄧新娜1，吳海江2，高 飛1，范曉燕1，趙 靜1，閆永龍1，楊 濤1，蔡建輝1

(1. 河北省人民醫(yī)院，河北 石家莊 050051；2. 河北醫(yī)科大學(xué)，河北 石家莊 050017)

目的探討DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合康萊特注射液治療對晚期非小細(xì)胞肺癌患者免疫功能及生活質(zhì)量的影響。方法將50例晚期非小細(xì)胞肺癌患者隨機分為2組，對照組22例給予單純對癥支持治療，治療組28例在對照組治療基礎(chǔ)上給予DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合康萊特注射液治療。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量和比例，采用RECIST實體瘤療效評價標(biāo)準(zhǔn)評估治療效果，采用Karnofsky評分標(biāo)準(zhǔn)和體質(zhì)量評價評估生存質(zhì)量改善情況。結(jié)果對照組治療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和CD4+CD25+Treg比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)；治療組治療后外周血T淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+及CD4+CD25+Treg均較治療前及對照組明顯改善(P均<0.05)，CD4+/CD8+、CD8+與治療前及對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。2組治療有效率及疾病控制率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。治療組KPS評分、體質(zhì)量改善情況均明顯優(yōu)于對照組(P均<0.05)。治療組中有10例出現(xiàn)發(fā)熱癥狀，對癥處理后恢復(fù)正常，無其他不良反應(yīng)。結(jié)論DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合康萊特注射液治療能夠明顯改善晚期非小細(xì)胞肺癌患者的免疫功能及生存質(zhì)量。

樹突狀細(xì)胞；DC-CIK細(xì)胞；康萊特注射液；晚期非小細(xì)胞肺癌

非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lung cancer, NSCLC)是最常見的惡性腫瘤之一,約占肺癌發(fā)病總數(shù)的80%，其發(fā)生率逐年升高[1]。盡管治療方法不斷改進，但晚期NSCLC患者經(jīng)過手術(shù)、多程化療、放療等治療后常出現(xiàn)不良反應(yīng)和藥物耐受，加之患者體質(zhì)狀況一般較差,治療效果多不理想。近年來，樹突狀細(xì)胞(dendritic cell,DC)聯(lián)合細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine-induced killer cell,CIK)療法已經(jīng)逐漸被應(yīng)用到腫瘤治療領(lǐng)域。DC是能力最強的抗原提呈細(xì)胞(APC)，成熟的DC能夠攝取、加工、提呈抗原，激活并活化T細(xì)胞，進而啟動抗原特異性免疫應(yīng)答。在腫瘤治療方面，DC能夠有效抵制腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。CIK細(xì)胞是一類體外增殖能力較強的廣譜抗瘤免疫活性細(xì)胞，將其和DC共培養(yǎng)能夠顯著提高其細(xì)胞毒活性，具有更廣的殺瘤譜和更高的殺瘤活性[2]。2011年7月—2014年5月，河北省人民醫(yī)院應(yīng)用DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合康萊特注射液治療晚期非小細(xì)胞肺癌患者28例，療效較好，現(xiàn)報道如下。

1 臨床資料

1.1一般資料 選擇上述時期入住河北省人民醫(yī)院的Ⅲ～Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌患者50例，均為不能手術(shù)、不能耐受或拒絕放化療的晚期者，經(jīng)病理學(xué)檢查確診，預(yù)計生存期≥3 個月，KPS評分≥60 分；血常規(guī)、肝腎功能和心電圖基本正常。將50例患者隨機分為2組：對照組22例，男13例，女9例；平均年齡64歲; 腺癌14例，鱗癌7例，其他1例。治療組28例，男18例，女10例；平均年齡64歲; 腺癌18例，鱗癌8例，其他2例。2組性別、年齡、病理分型比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。治療組患者均簽署細(xì)胞免疫治療知情同意書。

1.2治療方案 對照組采用最佳對癥支持治療，治療期間不給予提高免疫力藥物治療。治療組在對癥支持治療的基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用DC-CIK細(xì)胞與康萊特注射液治療：患者經(jīng)骨髓動員使外周血白細(xì)胞≥8.0×109L-1后，采用COBE Spectra血液成分分離機(購自美國Gambro BCT公司)循環(huán)采集外周血單個核細(xì)胞，采血后給予康萊特注射液200 mL靜點，1次/d，連用2周；根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)情況于單采后第11—12天開始給予細(xì)胞回輸， 2次/d，每次回輸細(xì)胞數(shù)均在1×109個以上，回輸前30 min給予抗過敏藥物，每周期連輸3 d，每30 d為1個周期，共治療2個周期。

1.3DC-CIK細(xì)胞的培養(yǎng)和擴增方法 于實驗室采用密度梯度離心法純化分離機采外周血單個核細(xì)胞，取1 mL送流式術(shù)檢測細(xì)胞亞群(流式細(xì)胞儀及T淋巴細(xì)胞亞群檢測所需熒光抗體均購自美國Beckman Coulter公司，F(xiàn)icoll淋巴細(xì)胞分離液購自美國Sigma公司)，其余置于培養(yǎng)瓶中37 ℃培養(yǎng)2 h，貼壁細(xì)胞為DC，懸浮細(xì)胞為淋巴細(xì)胞。DC的培養(yǎng)：將懸浮細(xì)胞移出，將貼壁細(xì)胞以1×109L-1接種于6孔板中，使用含1 000 IU/mL的粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)和1 000 IU/mL的白細(xì)胞介-4(IL-4)及10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，培養(yǎng)條件為5%CO2、37 ℃，第3天換液1次，第6天加入相關(guān)細(xì)胞因子的同時加入腫瘤壞死因子α(TNF-α)誘導(dǎo)DC成熟。CIK細(xì)胞的培養(yǎng): 將上述懸浮細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶中，使用含1 000 IU/mL的IFN-γ及10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，培養(yǎng)條件為5%CO2、37 ℃，第2天加入含25 ng/mL CD3單克隆抗體、300 IU/mL IL-2及10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，每2～3 d換液1次。DC-CIK共培養(yǎng): 將培養(yǎng)7 d的DC和CIK細(xì)胞按照1∶10比例混合，在含300 IU/mL IL-2及10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每2 d換液1次，共培養(yǎng)4～5 d。

1.4觀察項目 ①觀察2組治療前和治療后細(xì)胞亞群及細(xì)胞因子水平變化情況。分別于患者進行首次治療前和第2周期治療結(jié)束后1周采血送檢，除了常規(guī)檢測肝腎功能、血常規(guī)外，采用流式細(xì)胞儀檢測淋巴細(xì)胞免疫分型(T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+Treg、CD4+/CD8+)。②觀察2組臨床療效及生存質(zhì)量、體質(zhì)量改善情況及不良反應(yīng)發(fā)生情況。

1.5臨床療效評價標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)RECIST實體瘤療效評價標(biāo)準(zhǔn)分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、病情穩(wěn)定(SD)、疾病進展(PD)。以(CR+PR)/n×100%為治療有效率(RR)，以(CR+PR+SD)/n×100%為疾病控制率(DCR)。

1.6生存質(zhì)量和體質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn) 生存質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)以Karnofsky評分為依據(jù): 治療后評分增加≥10分為改善，下降≥10分為下降，變化幅度在10分以內(nèi)為穩(wěn)定。體質(zhì)量評價：與治療前相比，治療后體質(zhì)量增加1 kg以上為增加，變化幅度≤1 kg為穩(wěn)定，減少1 kg以上為下降。

1.7統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 18.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料比較采用2檢驗，計量資料比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1治療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群測定結(jié)果比較 對照組治療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和CD4+CD25+Treg比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)；治療組治療后外周血T淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+及CD4+CD25+Treg均較治療前及對照組明顯改善(P均<0.05)，CD4+/CD8+、CD8+與治療前及對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。見表1。

表1 2組治療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群測定結(jié)果比較

注：①與治療前比較，P<0.05；②與對照組比較，P<0.05。

2.2臨床療效比較 2組治療有效率及疾病控制率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。見表2。

表2 2組臨床療效比較 例(%)

2.3生存質(zhì)量比較 治療組治療后KPS評分提高16例，穩(wěn)定10例，下降2例；體質(zhì)量提高13例，穩(wěn)定11例，下降4例。對照組治療后KPS評分提高6例，穩(wěn)定8例，下降8例；體質(zhì)量提高3例，穩(wěn)定11例，下降8例。治療組KPS評分及體質(zhì)量改善情況均明顯優(yōu)于對照組(P均<0.05)。

2.4不良反應(yīng)發(fā)生情況 治療組患者在回輸DC-CIK細(xì)胞過程中，有10例出現(xiàn)發(fā)熱，體溫最高38.5 ℃，給予對癥處理后降至正常?；颊呔闯霈F(xiàn)胸悶氣短、呼吸困難、肝腎功能損害及骨髓抑制等不良反應(yīng)，血常規(guī)、肝腎功能等未見明顯異常。

3 討 論

近年來，我國肺癌的發(fā)病率和病死率均呈現(xiàn)逐年上升趨勢。有報道顯示，我國2012年肺癌新發(fā)病例和死亡病例分別為65萬和59萬，分別占全世界總數(shù)的35.8%和1/3[3]。非小細(xì)胞肺癌是最常見的肺癌類型，但由于發(fā)病機制復(fù)雜、老年患者缺乏特異性癥狀及體征等原因，很多患者發(fā)展到中晚期才被發(fā)現(xiàn)，由于體質(zhì)狀況下降，多不能耐受放化療治療，治療效果多不理想。故如何提高療效、改善患者生存質(zhì)量、減輕不良反應(yīng)具有重要意義。

DC-CIK細(xì)胞治療是一種比較成熟的生物免疫療法，已在我國多家醫(yī)院進入臨床應(yīng)用階段，并取得了較好效果[2]。DC和CIK細(xì)胞是生物免疫治療的2個組成部分：DC是人體內(nèi)功能最為強大的專職APC，該細(xì)胞具有識別病原、激活獲得性免疫系統(tǒng)的能力；CIK細(xì)胞是將人外周血單核細(xì)胞在體外培養(yǎng)后獲得的一群對腫瘤細(xì)胞有高度殺傷能力的異質(zhì)細(xì)胞，該細(xì)胞通過發(fā)揮自身細(xì)胞毒性與分泌細(xì)胞因子殺傷腫瘤細(xì)胞。DC和CIK細(xì)胞共同培養(yǎng)后，細(xì)胞增殖能力、成熟速度均明顯上升，CIK細(xì)胞的殺傷活性和抗腫瘤效應(yīng)均顯著增強[4]。此外，這兩種細(xì)胞均來源于患者自體細(xì)胞，細(xì)胞回輸不會引發(fā)排斥反應(yīng)，沒有明顯毒副作用，比放化療更為安全可靠。目前，DC-CIK細(xì)胞療法主要用于肺癌特別是非小細(xì)胞肺癌患者的治療。最新的研究發(fā)現(xiàn)，DC-CIK細(xì)胞治療能夠明顯改善晚期非小細(xì)胞肺癌患者的1年總生存率、無進展生存期和疾病控制率，同時能夠提高患者的生存質(zhì)量，減少不良反應(yīng)[5]。

中醫(yī)藥治療疾病在我國具有悠久的歷史和豐富的臨床積累，特別是在腫瘤綜合治療方面的作用已經(jīng)被臨床實踐和基礎(chǔ)實驗研究所證實。中醫(yī)學(xué)理論認(rèn)為，肺癌是在人體正氣虧虛的前提下，氣、血、津液運行變化失常和邪氣損害所致[6]。康萊特注射液是浙江中醫(yī)藥大學(xué)自行研發(fā)的天然抗癌中藥，主要成分為薏苡仁油，目前已經(jīng)獲得美國FDA認(rèn)可進入三期臨床驗證階段。該藥物具有益氣養(yǎng)陰、消癥散結(jié)功效，對中晚期腫瘤患者還具有一定的抗惡病質(zhì)和止痛作用。臨床研究表明，與單純化療相比，康萊特注射液聯(lián)合化療能夠明顯改善晚期非小細(xì)胞肺癌患者近期療效和體力狀況，并且減少患者胃腸道反應(yīng)的發(fā)生[7]。實驗研究表明，康萊特注射液能夠明顯抑制肺癌C57BL/6小鼠模型的腫瘤生長，并提高其免疫力，該作用可能與調(diào)控NF-кB/IkкB表達(dá)以及IL-2、EGFR等細(xì)胞因子有關(guān)[8]。

本研究結(jié)果顯示，DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合康萊特注射液治療能夠明顯提高非小細(xì)胞肺癌患者外周血T淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+，降低CD4+CD25+Treg。外周血T淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+是機體特異性細(xì)胞免疫功能指標(biāo)，而CD4+CD25+Treg亞群對抗腫瘤免疫細(xì)胞具有抑制作用[9]。由此可見，DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合康萊特注射液治療能夠明顯改善晚期非小細(xì)胞肺癌患者細(xì)胞免疫狀態(tài)，提高機體免疫力，有利于抑制腫瘤生長和改善患者生存質(zhì)量。此外，本研究結(jié)果還顯示，治療組的有效率及疾病控制率有優(yōu)于對照組的趨勢，KPS評分、體質(zhì)量改善情況均明顯優(yōu)于對照組，而且具有很好的安全性。說明DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合康萊特注射液治療能夠抑制疾病發(fā)展、緩解癥狀、提高患者的生活質(zhì)量，具有很好的臨床療效。

綜上所述，DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合康萊特注射液治療能夠明顯提高晚期非小細(xì)胞肺癌患者的免疫功能，抑制疾病發(fā)展，改善臨床癥狀和生存質(zhì)量，且不良反應(yīng)小，值得臨床推廣應(yīng)用。但還需要進一步擴大樣本量和延長隨訪時間，從而明確此療法的遠(yuǎn)期療效。

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Study on DC-CIK cells combined with Kanglaite injection in treatment of advanced non-small-cell lung cancer

DENG Xinna1, WU Haijiang2, GAO Fei1, FAN Xiaoyan1, ZHAO Jing1, YAN Yonglong1, YANG Tao1, CAI Jianhui1

Objective It is to investigate the influence of DC-CIK cells combined with Kanglaite injection on immune function and quality of life of patients with advanced non-small-cell lung cancer (NSCLC). Methods A total of 50 patients with advanced NSCLC were randomly divided into 2 groups, 22 cases in the control group were received only appropriate supportive care, and 28 cases in the treatment group were treated by DC-CIK cells combined with Kanglaite injection plus supportive care. The percentage and absolute number of peripheral blood T lymphocyte subsets were evaluated by flow cytometry. The clinical responses were evaluated using the Response Evaluation Criteria in Solid Tumors (RECIST). The performance status was measured by the Karnofsky Performance Status (KPS) scale and body mass change. Results In the treatment group, the levels of CD3+, CD4+T lymphocyte subsets in peripheral blood were significantly increased (allP<0.05) and CD4+CD25+Treg subset were significantly lower (P<0.05) after treatment, while the level of CD8+subset and CD4+/CD8+ratio were stable. There was no significant alteration for these parameters in the control group. There was no significant differenct in the response rate and disease control rate between the both groups (allP>0.05). Compared with the control group, the KPS score and body mass change were significantly improved following the treatment of DC-CIK cells combined with Kanglaite injection (allP<0.05). Fever was observed in 10 patients in the treatment group, and the symptom was rapidly improved with supportive treatment. There was no other side effect in the treatment group. Conclusion DC-CIK cells combined with Kanglaite injection can improve immune function and quality of life in patients with advanced NSCLC.

dendritic cell; cytokine-induced killer cell; Kanglaite injection; advanced non-small-cell lung cancer

鄧新娜，女，主治醫(yī)師，在讀博士，主要從事惡性腫瘤的綜合治療。

蔡建輝，E-mail: jianhuicai@163.com

河北省中醫(yī)藥管理局資助項目(2013031)

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.36.004

R734.2

A

1008-8849(2015)36-4000-04

2015-03-12

(1. Hebei General Hospital, Shijiazhuang 050051, Hebei, China; 2.Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, Hebei, China)