王春麗，郝佳潔，吳李飛，潘蓓青，徐昕，蔡巖，王明榮，賈雪梅

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IGHMBP2過表達(dá)促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞的侵襲和遷移

王春麗1，郝佳潔2，吳李飛3，潘蓓青2，徐昕2，蔡巖2，王明榮2，賈雪梅1

1. 安徽醫(yī)科大學(xué)組織胚胎學(xué)教研室，合肥 230032；2. 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所，分子腫瘤學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100021；3. 安徽醫(yī)科大學(xué)安慶市立醫(yī)院消化內(nèi)科，安慶 246000

(Immunoglobulin mu binding protein 2)基因編碼一種解旋酶，參與DNA的復(fù)制和修復(fù)，并且作為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子在基因轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮重要作用。基因定位于11q13.2，該染色體區(qū)段在食管鱗癌中擴(kuò)增頻率較高。為了探討基因在食管鱗癌中的擴(kuò)增情況及其在食管鱗癌中的作用，文章對(duì)本實(shí)驗(yàn)室前期報(bào)道的59例食管鱗癌原發(fā)腫瘤array-CGH數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示基因擴(kuò)增頻率為28.9%(17/59)。進(jìn)一步利用熒光原位雜交(FISH)和Western blot技術(shù)，發(fā)現(xiàn)食管鱗癌細(xì)胞系KYSE30、KYSE180、KYSE510和KYSE150中存在基因擴(kuò)增/增益以及蛋白高表達(dá)。敲降IGHMBP2后，KYSE30和KYSE150細(xì)胞的侵襲遷移能力明顯降低(<0.001)，侵襲遷移相關(guān)蛋白E-cadherin的表達(dá)水平升高；敲降后轉(zhuǎn)染IGHMBP2質(zhì)粒，回復(fù)其蛋白表達(dá)后，細(xì)胞的侵襲遷移能力又得以恢復(fù)(<0.01)。上述結(jié)果表明，IGHMBP2過表達(dá)可能通過降低E-cadherin的表達(dá)從而增強(qiáng)食管鱗癌細(xì)胞的侵襲遷移能力。

IGHMBP2；食管鱗癌；擴(kuò)增；侵襲；遷移

食管鱗癌是人類常見的惡性腫瘤之一。盡管術(shù)前分期充分，可手術(shù)原發(fā)性食管鱗癌患者的術(shù)后5年生存率仍未超過40%[1]。近年來(lái)，手術(shù)方式和放化療技術(shù)取得很大改進(jìn)，但食管鱗癌仍然具有較差預(yù)后[2]。因此，研究食管鱗癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，將有助于了解腫瘤形成原因，為建立新的治療方法提供可能。

基因擴(kuò)增是惡性腫瘤常見的遺傳學(xué)改變之一[3~5]，也是癌基因激活的機(jī)制之一[6]。擴(kuò)增引起的DNA拷貝數(shù)增加可能通過上調(diào)凋亡抑制蛋白表達(dá)等機(jī)制，導(dǎo)致癌變細(xì)胞逃避凋亡，從而產(chǎn)生耐藥[7,8]。因此基因擴(kuò)增有可能作為腫瘤治療的分子靶點(diǎn)[9]。

Ying等[10]利用比較基因組雜交鑒定出3q26-q27、8p22-p24、11q13及13q21-q31等染色體區(qū)段的擴(kuò)增。位于11q13區(qū)段的和等癌基因的擴(kuò)增可能在食管鱗癌中發(fā)揮重要作用，其中擴(kuò)增與位于中上段食管腫瘤的低分化顯著相關(guān)，而食管鱗癌中擴(kuò)增及蛋白過表達(dá)可能與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)[11,12]。Shi等[13]發(fā)現(xiàn)11q13.3染色體區(qū)段內(nèi)基因在mRNA及其編碼的蛋白ANO1水平均高表達(dá)，且mRNA水平和拷貝數(shù)增加相關(guān)，蛋白過表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床進(jìn)展期相關(guān)。11q13.1-q13.4、3q24-q29等是最常見的拷貝數(shù)改變的區(qū)域，研究發(fā)現(xiàn)在食管鱗癌病人中長(zhǎng)生存組和短生存組均檢測(cè)到位于11q13.2的兩個(gè)基因(和)的拷貝數(shù)改變[14,15]。因此推測(cè)11q13.2可能存在對(duì)食管鱗癌發(fā)生發(fā)展起重要作用的基因。

本文對(duì)59例食管鱗癌原發(fā)腫瘤比較基因組雜交微陣列(Array-CGH)數(shù)據(jù)進(jìn)行了分析，并在8個(gè)食管鱗癌細(xì)胞系中檢測(cè)了(Immunoglobulin mu binding protein 2)基因的擴(kuò)增和表達(dá)情況，初步探討了其在食管鱗癌細(xì)胞中的作用。

1 材料和方法

1.1 食管鱗癌細(xì)胞系

KYSE30、KYSE70、KYSE150、KYSE180、KYSE410、KYSE450、KYSE510和Colo680N食管鱗癌細(xì)胞系由日本東京大學(xué)Shimada教授惠贈(zèng)。細(xì)胞培養(yǎng)條件：含10%胎牛血清(康源生物)的RPMI 1640培養(yǎng)基(BIOROC)，在37℃含5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2 熒光原位雜交(FISH)及結(jié)果評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

基因BAC探針(NONSC29F5)和11號(hào)染色體著絲粒探針(Centromere enumeration probe，CEP)11分別用Cyanine 3 (Cy3)-dUTP和Fluorescein (FITC)-dUTP通過隨機(jī)引物法標(biāo)記。

熒光原位雜交步驟及圖像采集參照本實(shí)驗(yàn)室之前報(bào)道的方法[16]。

FISH結(jié)果評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)為：計(jì)算細(xì)胞核內(nèi)紅色的熒光信號(hào)和綠色熒光信號(hào)的數(shù)目比值，若紅色和綠色熒光信號(hào)的數(shù)目大于3而且比值大于或等于1.5視為陽(yáng)性擴(kuò)增；若紅色和綠色熒光信號(hào)的數(shù)目等于3而且比值等于1視為增益；若紅色和綠色熒光信號(hào)的數(shù)目等于2則視為未擴(kuò)增。

1.3 Western blot

培養(yǎng)細(xì)胞至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)收獲，用預(yù)冷PBS洗兩次，加入適量PBS，用細(xì)胞刮刮取細(xì)胞收集于1.5 mL離心管中，1 000 r/min離心10 min后棄上清，加入細(xì)胞裂解液，冰上裂解30 min，4℃、12 000 r/min離心15 min，取上清移至新的離心管中。蛋白定量后取50 μg蛋白樣品，加入上樣緩沖液，沸水浴中變性10 min，離心，經(jīng)10% SDS-PAGE在80 V電泳30 min，然后100 V電泳2 h；采用半干式電轉(zhuǎn)儀(12 V，2 h)將蛋白從分離膠轉(zhuǎn)移至PVDF膜，5%牛奶封閉，分別加入一抗4℃孵育過夜，一抗分別為抗IGHMBP2(Proteintech)、E-cadherin(BD)、β-catenin (Cell signaling Technology)和GAPDH(Proteintech)。TBST洗3次，每次6 min，以辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗兔IgG和羊抗鼠IgG(Applygen)為二抗常溫孵育1 h，加入化學(xué)發(fā)光劑(Applygen)，在X片膠上顯影。

1.4 siRNA轉(zhuǎn)染

siRNA靶序列分別為5￠-GCUUUACUUCUGG-U-GAUAUTT-3￠和5￠-GGACACCUCCCAGAAAGA-ATT--3￠，由吉瑪基因公司設(shè)計(jì)。Non-silencing siRNA序列為5￠-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3￠。siRNA溶于125 μL DEPC水后，4℃溶解過夜。將對(duì)數(shù)期細(xì)胞接種到6孔板，待細(xì)胞長(zhǎng)到30%~50%時(shí)，用LipofectamineTM2000 (Invitrogen)轉(zhuǎn)染。5 μL siRNA 和LipofectamineTM2000分別溶于250 μL Opti- MEM(Gibco)，放置5 min混勻，室溫放置20 min。6孔板中細(xì)胞用PBS洗2次后，用少量無(wú)血清無(wú)抗生素RPMI 1640洗一次，加入2 mL RPMI 1640。將上述混合液加入6孔板中，混勻，37℃含5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4~6 h，換成含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)24~48 h。

1.5 載體構(gòu)建

以食管正常上皮組織cDNA為模板，擴(kuò)增基因CDS全長(zhǎng)。上游引物為5￠-TAAAAG-CTTCGATGGCCTCGGCAGCTG-3￠，下游引物為 5￠-TGCTCTAGACGTCCCCCTCTCCTTCCT-3￠。PCR擴(kuò)增體系如下：模板1 μL，2×GC buffer 10 μL，dNTP (2.5 mmol/L)1.6 μL，引物(10 μmol/L)1 μL，PrimeStar (2.5 U/μL)0.2 μL，ddH2O 6.2 μL。PCR擴(kuò)增程序如下：98℃預(yù)變性5 min；98℃ 15 s，60℃ 5 s，72℃ 3 min，30次循環(huán)；最后再72℃延伸7 min。將PCR片段和空載體pcDNA3.1于37℃雙酶切6 h(體系為：PCR片段900 ng，空載體900 ng，d Ⅲ 1 μL，Ⅰ 1 μL，10×M 2 μL，Nonclease-free water補(bǔ)足至20 μL體系)，載體酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳后切膠純化回收，PCR片段酶切產(chǎn)物直接回收，回收產(chǎn)物載體和模板以1:3 pmol的比例，16℃在Solution I(TaKaRa)作用下進(jìn)行連接16 h。將連接產(chǎn)物pcDNA3.1-IGHMBP2轉(zhuǎn)化入Trans5α感受態(tài)細(xì)胞(TransGen Biotech)，經(jīng)菌液PCR鑒定，選取陽(yáng)性克隆測(cè)序驗(yàn)證。

1.6 細(xì)胞侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)

敲降或正轉(zhuǎn)質(zhì)粒的細(xì)胞消化收集后，用不含血清的RPMI 1640懸浮細(xì)胞并計(jì)數(shù)。在細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)中，Transwell小室內(nèi)加入200 μL含1×105個(gè)細(xì)胞的懸液，對(duì)應(yīng)24孔板中加入700 μL含20%血清的RPMI 1640，將加好的Transwell板置于5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(KYSE30培養(yǎng)24 h，KYSE150培養(yǎng)36 h)，取出培養(yǎng)板，使用PBS將小室洗2次，置于固定液中(甲醇:丙酮=1:1)固定20 min，0.5%結(jié)晶紫染色30 min，水洗2~3次。將膜置于載玻片上，滴加中性快干膠后用蓋玻片封片，鏡下拍照計(jì)數(shù)。細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)需提前將Matrigel膠置于4℃解凍，用無(wú)血清的RPMI 1640稀釋至終濃度300 ng/μL，加50 μL于Transwell 小室，室溫晾至1 h，吸出后用RPMI 1640洗2次，然后加入200 μL含1×105個(gè)細(xì)胞的懸液，對(duì)應(yīng)24孔板中加入700 μL含20%血清的RPMI 1640，于5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(KYSE30培養(yǎng)24 h，KYSE150培養(yǎng)36 h)，取出培養(yǎng)板，使用PBS清洗2次，固定、染色及封片步驟同細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)。

1.7 細(xì)胞增殖檢測(cè)

敲降處理48 h后，消化收集細(xì)胞，進(jìn)行計(jì)數(shù)。96孔板內(nèi)每孔加入含1000~2000個(gè)細(xì)胞的200 μL懸液。每組至少設(shè)3個(gè)平行孔和空白對(duì)照孔，共接種7板，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天取出一塊96孔板進(jìn)行檢測(cè)。CCK-8用RPMI 1640按1:10稀釋，每孔加入100 μL的CCK-8稀釋液，37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)1 h，酶標(biāo)儀(BioTek)測(cè)定450 nm(450)吸光值。以不同處理組的450為縱坐標(biāo)，培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。

1.8 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。兩組間均數(shù)的比較采用檢驗(yàn)兩組以上均數(shù)間的比較采用單因素方差分析。<0.05代表具有顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 IGHMBP2在食管鱗癌細(xì)胞中擴(kuò)增和過表達(dá)

本文對(duì)本實(shí)驗(yàn)室前期報(bào)道的59例食管鱗癌原發(fā)腫瘤array-CGH數(shù)據(jù)(GEO編號(hào)：GSE46452)進(jìn)行進(jìn)一步分析，結(jié)果顯示的擴(kuò)增頻率為28.9%(17/59)(圖1A)。對(duì)8個(gè)食管鱗癌細(xì)胞系進(jìn)行了FISH檢測(cè)，結(jié)果顯示在KYSE30、KYSE180和KYSE510中呈現(xiàn)擴(kuò)增，在KYSE70、KYSE150、KYSE410和KYSE450中呈現(xiàn)增益，在Colo680N中未擴(kuò)增(圖1B)。Western blot結(jié)果顯示，在未擴(kuò)增的細(xì)胞系Colo680N中，其蛋白表達(dá)水平較低；在增益的4個(gè)細(xì)胞系(KYSE70、KYSE150、KYSE410和KYSE450)中，蛋白表達(dá)量高于未擴(kuò)增的細(xì)胞系Colo680N；而在擴(kuò)增的3個(gè)細(xì)胞系(KYSE30、KYSE180和KYSE510)中，蛋白表達(dá)水平最高。

圖1 IGHMBP2基因在食管鱗癌的擴(kuò)增及蛋白表達(dá)情況

A：array-CGH分析(定位于11q13.2)在食管鱗癌原發(fā)腫瘤擴(kuò)增。每一個(gè)紅色方塊代表一個(gè)探針?？v坐標(biāo)代表基因拷貝數(shù)的log2ratio值，該值為0時(shí)代表基因無(wú)拷貝數(shù)改變，大于0為擴(kuò)增。B：FISH結(jié)果?；蛱结楴ONSC29F5(Cy3- dUTP，紅色)的信號(hào)明顯多于CEP11(FITC-dUTP，綠色)的信號(hào)，表明該基因存在擴(kuò)增；基因探針與CEP11均具有3個(gè)信號(hào)，表明存在增益；基因探針與CEP11均具有2個(gè)信號(hào)，表明未擴(kuò)增。C：Western blot結(jié)果。

2.2 IGHMBP2過表達(dá)促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力

選取IGHMBP2蛋白水平表達(dá)較高的KYSE30和KYSE150細(xì)胞，檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞的侵襲和運(yùn)動(dòng)能力的影響。結(jié)果顯示，KYSE30和KYSE150中敲降IGHMBP2后，食管鱗癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力明顯降低(<0.001)(圖2：A，B)；在敲降IGHMBP2后的KYSE30和KYSE150中，回復(fù)IGHMBP2的表達(dá)后，兩種細(xì)胞的侵襲和遷移能力均得到恢復(fù)(<0.01) (圖2：C，D)。

為了排除細(xì)胞增殖對(duì)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，本文同時(shí)檢測(cè)了IGHMBP2敲降對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響。結(jié)果顯示，敲降和未敲降IGHMBP2的KYSE30細(xì)胞增殖速度始終較為接近；對(duì)于敲降和未敲降IGHMBP2的KYSE150細(xì)胞，在48 h內(nèi)的增殖速度也較為接近(圖2E)，表明IGHMBP2 敲降對(duì)細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響與細(xì)胞增殖無(wú)關(guān)，由此可以排除細(xì)胞增殖對(duì)上述Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

圖2 IGHMBP2過表達(dá)顯著增強(qiáng)食管鱗癌細(xì)胞的侵襲遷移能力

A：KYSE30和KYSE150中敲降IGHMBP2后，聚碳酯膜下表面每個(gè)視野的細(xì)胞數(shù)在敲降組明顯低于對(duì)照組和親本組細(xì)胞數(shù)；B：3次實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果(mean ± SD，***代表<0.001)；C：KYSE30和KYSE150中敲降后聚碳酯膜下表面每個(gè)視野的細(xì)胞數(shù)減少，敲降后正轉(zhuǎn)IGHMBP2，每個(gè)視野的細(xì)胞數(shù)增多；D：3次實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果(mean ± SD，**代表<0.01)；E：敲降IGHMBP2后食管鱗癌細(xì)胞的增殖情況。2個(gè)細(xì)胞系敲降48 h內(nèi)的增殖速度與對(duì)照組比較均無(wú)顯著變化。

2.3 敲降IGHMBP2能夠上調(diào)E-cadherin蛋白表達(dá)

為了明確該基因在食管鱗癌細(xì)胞侵襲遷移惡性表型中作用，本文分析了IGHMBP2對(duì)細(xì)胞侵襲遷移相關(guān)分子的影響。結(jié)果顯示敲降IGHMBP2后，KYSE30中E-cadherin蛋白的表達(dá)水平升高，且KYSE150中E-cadherin蛋白的表達(dá)水平也略微升高，而β-catenin蛋白表達(dá)水平均未見明顯變化(圖3)。

圖3 敲降IGHMBP2后E-cadherin蛋白表達(dá)上調(diào)

3 討 論

染色體拷貝數(shù)改變和結(jié)構(gòu)異常是食管鱗癌常見的特征，可能與腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展有關(guān)。食管鱗癌中3q26、8q24、11q13等區(qū)段的擴(kuò)增和3p14、16p13、18q22等區(qū)段的丟失是常見的染色體異常[15,17,18]。位于11q13染色體的CCND1是從G1期到S期的重要調(diào)節(jié)因子，其擴(kuò)增與食管鱗癌進(jìn)展和患者預(yù)后相 關(guān)[19]。一些癌癥相關(guān)基因，如、和等均位于11q13區(qū)段，基因也位于此區(qū)段。本文在28.9%的食管鱗癌原發(fā)腫瘤中檢測(cè)到擴(kuò)增，還發(fā)現(xiàn)該基因在食管鱗癌細(xì)胞KYSE30、KYSE180和KYSE510中擴(kuò)增且高表達(dá)。該基因在KYSE150中未擴(kuò)增，但存在增益，而且其蛋白表達(dá)水平也較高。

1993年，Mizuta等[20]分離了編碼IGHMBP2蛋白的小鼠cDNA序列，其特異結(jié)合于富含G嘌呤的5￠-磷酸化的單鏈DNA，編碼蛋白屬于解旋酶超家族，參與DNA復(fù)制、重組和修復(fù)。Fukita等[21]克隆了人同源IGHMBP2蛋白的cDNA序列，發(fā)現(xiàn)其含解旋酶序列，可能參與免疫球蛋白μ鏈的轉(zhuǎn)換。Liepinsh等[22]通過核磁共振光譜學(xué)解析了人IGHMBP2的R3H結(jié)構(gòu)域的3D結(jié)構(gòu)，其能夠以序列特異性方式結(jié)合單鏈DNA或RNA。在肝癌治療中，Gemfibrozil可能促進(jìn)IGHMBP2結(jié)合病毒反應(yīng)組件，然后激活載脂蛋白I(apoA-I)啟動(dòng)子，使apoA-Ⅰ表達(dá)水平上調(diào)，從而有利于膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟代謝[23]。在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中，IGHMBP2和其截短體膠質(zhì)因子1(GF-1)能夠調(diào)節(jié)JC病毒啟動(dòng)子活性，下調(diào)JCV病毒的復(fù)制水平和上調(diào)其轉(zhuǎn)錄水平，這一過程可能參與脫髓鞘疾病進(jìn)行性多灶性腦白質(zhì)病的發(fā)病機(jī)制[24]。近期有文獻(xiàn)報(bào)道IGHMBP2可能是蛋白翻譯機(jī)制的組成成分之一，可能發(fā)揮遺傳調(diào)控作用進(jìn)而抑制運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元變性[25]。這些研究表明，IGHMBP2是一個(gè)多功能蛋白，可能影響轉(zhuǎn)錄、重組、翻譯等多種細(xì)胞功能。本文發(fā)現(xiàn)敲降IGHMBP2后，食管鱗癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力明顯減弱，轉(zhuǎn)染IGHMBP2質(zhì)粒后，食管鱗癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力又得以恢復(fù)，而且排除了增殖對(duì)侵襲和遷移能力的影響，表明該基因可能促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞的侵襲和遷移。

侵襲遷移是食管鱗癌細(xì)胞發(fā)生遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的重要步驟，與侵襲遷移相關(guān)的一些分子，如MMPs家族是一組鋅依賴性內(nèi)肽酶，參與腫瘤的生長(zhǎng)、分化、凋亡、遷移和侵襲變化[26,27]。上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)換在癌癥侵襲遷移中發(fā)揮重要作用，主要特征表現(xiàn)為E-cadherin蛋白的功能缺失以及N-cadherin蛋白上調(diào)[28,29]。Wnt/β-catenin信號(hào)通路的異常激活在腫瘤進(jìn)展過程中的起始階段也發(fā)揮著重要作用[30,31]。本文檢測(cè)了敲降IGHMBP2后β-catenin及E-cadherin蛋白表達(dá)水平的變化，結(jié)果顯示E-cadherin的表達(dá)水平升高，β-catenin的表達(dá)未發(fā)生明顯變化。上述結(jié)果提示，IGHMBP2可能是通過調(diào)節(jié)E-cadherin的表達(dá)影響食管鱗癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，本文發(fā)現(xiàn)基因在食管鱗癌原發(fā)腫瘤中存在擴(kuò)增，在細(xì)胞系中存在擴(kuò)增和蛋白過表達(dá)，功能研究提示IGHMBP2過表達(dá)可能通過降低E-cadherin的表達(dá)，而增強(qiáng)食管鱗癌細(xì)胞的侵襲遷移能力。這些發(fā)現(xiàn)可能為進(jìn)一步闡明食管鱗癌細(xì)胞侵襲遷移的分子機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。

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(責(zé)任編委: 史慶華)

IGHMBP2 overexpression promotes cell migration and invasion in esophageal squamous carcinoma

Chunli Wang1, Jiajie Hao2, Lifei Wu3, Beiqing Pan2, Xin Xu2, Yan Cai2, Mingrong Wang2, Xuemei Jia1

Immunoglobulin mu binding protein 2 () is located in 11q13.2, which is frequently amplified in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC).encodes a helicase involved in DNA replication and repair. IGHMBP2 protein also regulates gene transcription. The present study aims to explore the amplification ofand its potential role in ESCC. A further analysis of our previously reported array-CGH data showed thatwas amplified in 28.9% of primary ESCC tumors. Fluorescencehybridization (FISH) and Western blot showed that IGHMBP2was amplified and overexpressed in KYSE30, KYSE180, KYSE510 and KYSE150 esophageal cancer cell lines. Transwell assays demonstrated that knockdown of IGHMBP2 in KYSE30 and KYSE150 inhibited cell invasion and migration, and increased the expression levels of E-cadherin. When rescue plasmids expressing IGHMBP2 were introduced, the abilities of cell invasion and migration were restored. These data suggest that IGHMBP2 overexpression may promote invasion and migration of ESCC cells through down-regulation of E-cadherin.

IGHMBP2; esophageal squamous cell carcinoma; amplification; invasion; migration

2014-10-29;

2014-12-04

國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(863計(jì)劃)(編號(hào)：SS2014AA020601)和國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號(hào)：81321091)資助

王春麗，碩士研究生，專業(yè)方向：腫瘤遺傳學(xué)。E-mail: wcl4496@126.com

王明榮，博士，研究員，研究方向：腫瘤遺傳學(xué)。E-mail: wangmr2015@126.com；賈雪梅，碩士，教授，研究方向：腫瘤遺傳學(xué)。E-mail: jiaxueme@126.com

10.16288/j.yczz.14-371

2015-1-7 8:50:11

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.1913.R.20150107.0850.001.html