王兵鐘東湯為學(xué)曾月成石爽張福安唐文淵

·論 著·

Syntenin基因促進(jìn)膠質(zhì)瘤侵襲和遷移的分子機(jī)制☆

王兵*鐘東*湯為學(xué)*曾月成*石爽*張福安*唐文淵＊

目的探討多配體聚糖結(jié)合蛋白（Syntenin）基因表達(dá)水平對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響以及可能的分子機(jī)制。方法采用慢病毒RNA干擾技術(shù)敲低膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株U-87中Syntenin基因表達(dá)水平；qPCR檢測(cè)Syntenin mRNA表達(dá)水平，篩選最佳干擾序列；Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的侵襲和遷移能力變化；粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的粘附能力變化；Western-Blot（WB）檢測(cè)Syntenin、AKT、p-AKT和MMP-9的表達(dá)水平。結(jié)果qPCR結(jié)果顯示，干擾組Syntenin mRNA表達(dá)水平顯著低于空載組（P＜0.01），空載組與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異(P＞0.05)。侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，干擾組細(xì)胞的侵襲和遷移能力顯著低于空載組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；空載組與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異(P＞0.05)。粘附實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在各時(shí)間點(diǎn)，干擾組細(xì)胞的同種粘附率明顯高于空載組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；異種粘附率均明顯低于空載組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。WB結(jié)果顯示，干擾組Syntenin、p-AKT和MMP-9的表達(dá)水平顯著低于空載組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），空載組與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異(P＞0.05)；AKT表達(dá)水平在各組之間均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。結(jié)論在膠質(zhì)瘤中，Syntenin可能通過(guò)上調(diào)AKT的磷酸化水平，經(jīng)過(guò)相應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上調(diào)MMP-9表達(dá)水平，從而促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲和遷移。

膠質(zhì)瘤 Syntenin侵襲 遷移

膠質(zhì)瘤的高度侵襲和遷移性是影響患者預(yù)后重要因素，對(duì)其侵襲和遷移相關(guān)分子機(jī)制研究已成為人們了解和治療膠質(zhì)瘤的前提[1]。Syntenin是從黑色素瘤中分離出來(lái)的含有2個(gè)PDZ結(jié)構(gòu)域的支架蛋白。研究[2]發(fā)現(xiàn)，其表達(dá)水平與多種腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)。課題組前期研究[3]發(fā)現(xiàn)，Syntenin在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)水平升高，其表達(dá)水平與腫瘤的病理級(jí)別成正相關(guān)。在此基礎(chǔ)上，本研究進(jìn)一步探討Syntenin促進(jìn)膠質(zhì)瘤侵襲和遷移的分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象膠質(zhì)瘤U-87細(xì)胞（購(gòu)自上海生博公司）采用含10%FBS血清（Hyclone）的DMEM培養(yǎng)基，按1:100的比例常規(guī)加入青霉素-鏈霉素混合液，于37℃、5%CO2的孵箱中培養(yǎng)。HUVEC采用含10%FBS血清（Gibco）的1640培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件同上。載體與主要試劑：攜帶Syntenin基因RAN干擾序列慢病毒4株（用于篩選最佳干擾株），空載病毒1株（上海生博公司）；RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增試劑盒（Takara公司，日本）；Syntenin引物（Takara公司，中國(guó)大連）；兔抗人 Syntenin、MMP-9單克隆抗體（Abcam公司，美國(guó)）；兔抗人AKT、p-AKT（S473）單克隆抗體（CST公司，美國(guó)）；總蛋白提取試劑盒（上海碧云天公司）。

1.2 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的構(gòu)建及最佳干擾序列的篩選取指數(shù)生長(zhǎng)期U-87細(xì)胞接種6孔板，按MOI=30的比例加病毒液，培養(yǎng)48h后，用含有1μg/mL嘌呤霉素的篩選培養(yǎng)基篩選4d。按照說(shuō)明書提取總RNA，測(cè)濃度后逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，-20℃冰箱中保存?zhèn)溆?。qPCR擴(kuò)增按說(shuō)明書進(jìn)行，反應(yīng)體系為25μL。引物為：Syntenin-F：5′-GTGGCTCCTGTA?ACTGGTAATGATG-3′；Syntenin-R：5′-CCAACCAATGAGGCTGGAGAAT-3′；β-actin-F：5′-CCAC?GAAACTACCTTCAACTCC-3′；β-actin-R：5′-GT?GATCTCCTTCTGCATCCTGT-3′。擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性30s后，95℃變性5s，58℃退火30s，完成約40個(gè)循環(huán)后，逐漸升高溫度，獲取溶解曲線。分析Syntenin RNA/β-actin mRNA的相對(duì)表達(dá)水平，其中表達(dá)水平最低的細(xì)胞株對(duì)應(yīng)的shRNA序列即為最佳干擾序列。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。選取攜帶Syn?tenin shRNA最佳干擾序列的病毒轉(zhuǎn)染U-87細(xì)胞建立的穩(wěn)定株進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為干擾組，空載組和對(duì)照組。

1.3 Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞的侵襲和遷移能力在孔徑為8μm的小室內(nèi)鋪用無(wú)血清DMEM稀釋的基質(zhì)膠（V基質(zhì)膠：VDMEN溶液=1:5）；取指數(shù)生長(zhǎng)期的各組細(xì)胞，將濃度為1.25×105個(gè)/mL的細(xì)胞懸液400μL細(xì)胞種入上室，下室加入含10%血清DMEM 600μL；培養(yǎng)20h后，取出小室，PBS洗滌，棉簽拭去小室上層未穿出細(xì)胞和基質(zhì)膠，固定并染色。遷移實(shí)驗(yàn)與侵襲實(shí)驗(yàn)方法和步驟基本相同，差別在于上室不鋪基質(zhì)膠，上室種入細(xì)胞后常規(guī)培養(yǎng)7h。觀察照相，按每組不少于5個(gè)隨機(jī)視野計(jì)數(shù)穿出細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.4 MTT法檢測(cè)細(xì)胞同種及異種粘附率變化取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的對(duì)照組U-87和HUVEC細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度至5×105個(gè)/mL，按每孔100μL種入96孔板；其中第1、7、12列不種，其余各列對(duì)應(yīng)的A、B、C、D各行種入U(xiǎn)-87細(xì)胞，對(duì)應(yīng)的E、F、G、H各行種入HUVEC細(xì)胞。過(guò)夜培養(yǎng)，第2天取干擾組、空載組細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度至3×105個(gè)/mL，按每孔100μL加入96孔板；其中第1、2列不加，3、4、5、6、7列加入干擾組細(xì)胞，8、9、10、11、12列加入空載組細(xì)胞。每隔30min吸去孔板3、8，4、9，5、10，6、11列孔內(nèi)培養(yǎng)基，PBS 100μL洗滌兩次并加入無(wú)血清DMEM 100μL；最后兩列處理后，離心孔板，吸去2、7、12列培養(yǎng)基，加入100μL無(wú)血清DMEM；除去D、E行，MTT法檢測(cè)各孔吸光度（A值），計(jì)算粘附率。熒光顯微鏡下觀察D、E列細(xì)胞粘附水平并照相。粘附率計(jì)算公式=（實(shí)驗(yàn)孔A值均數(shù)-下層細(xì)胞A值均數(shù)）/上層所種細(xì)胞A值均數(shù)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.5 Western-blot檢測(cè)Syntenin、AKT、p-AKT和MMP-9表達(dá)水平按照說(shuō)明書提取總蛋白，測(cè)濃度后保存在-20℃?zhèn)溆谩⒌鞍讟悠飞蠘佑?0% SDS-PAGE電泳膠；電泳完成后，將蛋白轉(zhuǎn)至PVDF膜；5%脫脂奶粉封閉2h；孵育一抗過(guò)夜，一抗稀釋的比例如下：抗Syntenin-Ab（1:2000），抗AKT-Ab（1:1000），抗 p-AKT（1:1000），抗MMP-9-Ab（1:250），β-actin（1:2000）；TBST洗滌后孵育二抗2h；TBST洗滌后，采用ECL法顯影，并分析條帶灰度值，計(jì)算目的/內(nèi)參灰度值之比。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以（x±s）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，采用SPSS 20進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，兩組數(shù)據(jù)均數(shù)的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組數(shù)據(jù)均數(shù)的比較采用單因素方差分析，兩組數(shù)據(jù)均數(shù)的多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)。檢測(cè)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 qPCR檢測(cè)Syntenin mRNA表達(dá)水平 Syn?tenin mRNA表達(dá)水平分別為：干擾組0.15±0.04，空載組0.96±0.04，對(duì)照組0.87±0.10，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=130.52，P＜0.01）。多重比較顯示，干擾組Syntenin mRNA表達(dá)水平顯著低于空載組（P＜0.01），空載組與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異(P＞0.05)。Syntenin mRNA最低表達(dá)水平組對(duì)應(yīng)的shRNA序列為：5′-CCGGCCTATCCCTCACGATG?GAAATCTCGAGATTTCCATCGTGAGGGATAGGTTTTTG-3′；該序列即為最佳干擾序列（其他序列對(duì)應(yīng)的數(shù)據(jù)未予顯示）。

2.2 Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞侵襲和遷移能力侵襲實(shí)驗(yàn)穿出細(xì)胞計(jì)數(shù)，干擾組61±8，空載組228± 26，對(duì)照組242±34；遷移實(shí)驗(yàn)穿出細(xì)胞計(jì)數(shù)，干擾組109±12，空載組224±22，對(duì)照組206±14。單因素方差分析顯示，穿出細(xì)胞計(jì)數(shù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=81.08，P＜0.01；F=68.37，P＜0.01）。多重比較顯示，兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中，干擾組穿出細(xì)胞計(jì)數(shù)均低于空載組（P均＜0.01），空載組與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異（P均＞0.05）。侵襲和遷移細(xì)胞照片見(jiàn)圖1。

2.3 MTT法檢測(cè)細(xì)胞同種及異種粘附率變化在各時(shí)間點(diǎn)，干擾組細(xì)胞的同種粘附率明顯高于空載組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t值分別為3.33、3.79、3.64、4.50，P均＜0.05）；而異種粘附率均明顯低于空載組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t值分別為6.83、6.06、5.63、5.82，P均＜0.05）。各實(shí)驗(yàn)組MTT吸光值見(jiàn)表1，在90min時(shí)粘附細(xì)胞熒光照片見(jiàn)（圖2）。

2.4 WB檢測(cè)Syntenin、AKT、p-AKT和MMP-9表達(dá)水平目的蛋白與內(nèi)參β-actin灰度值之比見(jiàn)表2。單因素方差分析，Syntenin（F=77.35，P＜0.01）、p-AKT（F=8.80，P=0.02）和MMP-9（F=5.59，P=0.04）表達(dá)水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；AKT表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.69，P＞0.05）。多重比較顯示，干擾組Syntenin、p-AKT和MMP-9的表達(dá)水平顯著低于空載組（P均＜0.05），空載組和對(duì)照組相比均無(wú)明顯差異（P＞0.05）；AKT表達(dá)水平在各組間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。WB照片見(jiàn)圖3。

3 討論

圖1 敲低Syntenin對(duì)U-87細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響（×100）

支架蛋白是一類本身不具備激酶和轉(zhuǎn)錄因子活性的蛋白質(zhì)分子，其通過(guò)特殊的結(jié)構(gòu)域連接兩個(gè)或多個(gè)不能直接發(fā)生相互作用的信號(hào)分子，使信號(hào)得以特異而有序的轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而在細(xì)胞分裂、蛋白質(zhì)運(yùn)輸及降解、基因表達(dá)等多種體內(nèi)重要的生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[4，5]。Syntenin是從黑色素瘤中分離出來(lái)的含有兩個(gè)PDZ結(jié)構(gòu)域的支架蛋白[2]。研究顯示，Syntenin在黑色素瘤、乳腺癌，以及尿道上皮細(xì)胞癌中均呈過(guò)度表達(dá)，其表達(dá)水平與腫瘤的惡性程度及臨床進(jìn)展密切相關(guān)[2,6，7]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，Syntenin在膠質(zhì)瘤中表達(dá)水平升高，并與膠質(zhì)瘤的病理級(jí)別成正相關(guān)[3]。然而，Syntenin促進(jìn)膠質(zhì)瘤侵襲和遷移的分子機(jī)制尚不清楚。

膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲和遷移是一個(gè)涉及多個(gè)步驟的復(fù)雜過(guò)程，包括腫瘤細(xì)胞的分離、細(xì)胞外基質(zhì)的降解、細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)以及侵入其他組織[1,8]。本研究顯示，敲低膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中Syntenin的表達(dá)水平，伴隨MMP-9表達(dá)水平下降，細(xì)胞的侵襲和遷移能力顯著降低。研究顯示，MMP-9能夠裂解整合素、CD44等腫瘤細(xì)胞表面重要的粘附分子，降解膠原蛋白、明膠蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)，從而促進(jìn)膠質(zhì)瘤的侵襲和遷移[1,9，10]。因此，Syntenin可能通過(guò)上調(diào)MMP-9的表達(dá)水平，促進(jìn)細(xì)胞表面粘附分子的裂解和細(xì)胞外基質(zhì)的降解，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移。

圖2 90min時(shí)粘附細(xì)胞熒光照片（×100）

圖3 敲低Syntenin對(duì)AKT、p-AKT和MMP-9表達(dá)水平的影響

表1 敲低Syntenin對(duì)各實(shí)驗(yàn)組的影響（MTT法，x±s）

表2 Syntenin、AKT、p-AKT和MMP-9在各組的表達(dá)水平（x±s）

本研究發(fā)現(xiàn)，敲低Syntenin表達(dá)水平后，AKT表達(dá)水平無(wú)明顯變化，而AKT（S473）磷酸化水平顯著降低，MMP-9表達(dá)水平顯著降低，提示Syntenin能夠通過(guò)上調(diào)AKT（S473）磷酸化水平，從而促進(jìn)MMP-9的表達(dá)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，在低級(jí)別膠質(zhì)瘤CHG-5細(xì)胞中轉(zhuǎn)染表達(dá)人源性Syntenin的質(zhì)粒后，伴隨p-AKT水平升高，細(xì)胞的侵襲和遷移能力增強(qiáng)[11]。最近的研究顯示，p-AKT能夠激活I(lǐng)KK/IκB/NF-κB信號(hào)通路[12-14]，活化的NF-κB能夠與MMP-9基因的啟動(dòng)子結(jié)合，上調(diào)MMP-9的表達(dá)水平[15，16]。因此，在膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)，Syntenin可能通過(guò)上調(diào)AKT的磷酸化水平，激活I(lǐng)KK/IκB/ NF-κB信號(hào)通路，促進(jìn)MMP-9的表達(dá)，從而促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲和遷移。

雖然膠質(zhì)瘤具有較強(qiáng)的侵襲和遷移能力，但是膠質(zhì)瘤轉(zhuǎn)移至腦外的發(fā)生率僅有0.4%～2%[1],而血管和淋巴管是膠質(zhì)瘤發(fā)生腦外轉(zhuǎn)移的必要途徑，其中腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要環(huán)節(jié)[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，敲低Syntenin基因表達(dá)水平后，腫瘤細(xì)胞的同種粘附（干擾組、空載組細(xì)胞分別與對(duì)照組細(xì)胞粘附）能力顯著增強(qiáng)，異種粘附（干擾組、空載組分別與HUVEC細(xì)胞粘附）能力顯著降低。以上結(jié)果提示，Syntenin能夠促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的解離，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附能力。因此，Syntenin在膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生腦外轉(zhuǎn)移的過(guò)程中也發(fā)揮重要作用。

研究顯示，在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，Syntenin基于整合素信號(hào)通路，通過(guò)促進(jìn)Src磷酸化，上調(diào)P38磷酸化水平，引起NF-κB活化，升高M(jìn)MP2表達(dá)水平，從而促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲和遷移[18]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，在纖維連接蛋白（FN）的誘導(dǎo)下，Syntenin基于整合素信號(hào)通路，通過(guò)促進(jìn)FAK和c-Src的活化，進(jìn)而激活PI3K/AKT信號(hào)通路，從而促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移[11]。然而本研究顯示，在無(wú)纖維連接蛋白（FN）誘導(dǎo)的條件下，敲低Syn?tenin基因表達(dá)水平，伴隨AKT（S473）磷酸化水平降低，細(xì)胞的侵襲和遷移能力顯著降低，提示在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，Syntenin可能通過(guò)依賴整合素以外的信號(hào)通路，上調(diào)AKT（S473）磷酸化水平，從而促進(jìn)細(xì)胞的侵襲和遷移。研究顯示，在尿道上皮細(xì)胞癌中，過(guò)度表達(dá)的Syntenin能夠激活c-Src，進(jìn)而活化EGFR（Tyr845），從而激活PI3K/AKT信號(hào)通路[7]。因此，在膠質(zhì)瘤中，Syntenin也可能通過(guò)激活EGFR信號(hào)通路，促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲和遷移。

綜上所述，Syntenin在膠質(zhì)瘤侵襲、遷移和發(fā)生腦外轉(zhuǎn)移的多個(gè)病理環(huán)節(jié)中均發(fā)揮重要作用，有望成為膠質(zhì)瘤新的治療靶點(diǎn)。然而，有關(guān)Syn?tenin在膠質(zhì)瘤進(jìn)展中的研究報(bào)道并不多見(jiàn)。因此，Syntenin在膠質(zhì)瘤侵襲、遷移和發(fā)生腦外轉(zhuǎn)移過(guò)程中的具體分子機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

[1]Cuddapah VA,Robel S,Watkins S,et al.A neurocentric per?spective on glioma invasion[J].Nat Rev Neurosci,2014,15(7): 455-465.

[2]Swadesh KD,Bhutia SK,Kegelman TP,et al.MDA-9syntenin a positive gatekeeper of melanoma metastasis[J].Frontiers in Bio?science,2012,17:1-15.

[3]王兵,鐘東，冉建華，等.Syntenin異常表達(dá)促進(jìn)膠質(zhì)瘤侵襲和遷移的研究[J].中華神經(jīng)外科雜志,2014,30(3):305-308.

[4]Seya T,Shime H,Ebihara T,et al.Pattern recognition receptors of innate immunity and their application to tumor immunothera?py.Cancer Sci,2010,101(2):313-320.

[5]Fraser CC.G protein-coupled receptor connectivity to NF-kap?paB in inflammation and cancer.Int Rev Immunol,2008,27(5): 320-350.

[6]Li XQ,Li YQ,Yu B,et al.Syndecan binding protein(SDCBP) is overexpressed in estrogen receptor negative breast cancers, and is a potential promoter for tumor proliferation[J].PLoS One,2013,8(3):e60046.

[7]Dasgupta S,Menezes ME,Das SK,et al.Novel Role of MDA-9/ Syntenin in Regulating Urothelial Cell Proliferation by Modulat?ing EGFR Signaling[J].Clin Cancer Res,2013,19(17): 4621-4633.

[8]Kessenbrock K,Plaks V,Werb Z,et al.Matrix metalloproteinas?es:regulators of the tumor microenvironment[J].Cell,2010,141 (1):52-67.

[9]Bauvois B.New facets of matrix metalloproteinases MMP-2 and MMP-9 as cell surface transducers:outside-in signaling and re?lationship to tumor progression[J].Biochim Biophys Acta, 2012,1825(1):29-36.

[10]Chetty C,Vanamala SK,Gondi CS.et al.MMP-9 induces CD44 cleavage and CD44 mediated cell migration in glioblasto?ma xenograft cells[J].Cell Signal,2012,24(2):549-559. Zhong D,Ran JH,Tang WY,et al.Mda-9/syntenin Promotes

[11]Human Brain Glioma Migration through Focal Adhesion Kinase (FAK)-JNK and FAK-AKT Signaling[J].Asian Pacific Journal of Cancer Prevention,2012,13(6):2897-2901.

[12]Yang YI,Lee KT,Park HJ,et al.Tectorigenin sensitizes pacli?taxel-resistant human ovarian cancer cells through downregula?tion of the Akt and NFkappaB pathway[J].Carcinogenesis, 2012,33(12):2488-2498.

[13]Sun ZJ,Chen G,Hu X,et al.Activation of PI3K/Akt/IKK-al?pha/NF-kappaB signaling pathway is required for the apopto?sis-evasion in human salivary adenoid cystic carcinoma:its in?hibition by quercetin[J].Apoptosis,2010,15(7):850-863.

[14]李會(huì)兵，俞凱，張安玲，等.人腦膠質(zhì)瘤中IKKε的表達(dá)及其意義[J].中國(guó)神經(jīng)精神疾病雜志，2012，38（6）：321-324.

[15]Wu HT,Sie SS,Kuan TC,et al.Identifying the regulative role of NF-kappaB binding sites within promoter region of human matrix metalloproteinase 9(mmp-9)by TNF-alpha induction [J].Appl Biochem Biotechnol,2013,169(2):438-449.

[16]Jiang LL,Wu JH,Yang L,et al.Bmi-1 promotes the aggressive?ness of glioma via activating the NF-kappaB/MMP-9 signaling pathway[J].BMC Cancer,2012,12:406.

[17]Wang JH,Shiozawa Y,Wang JC,et al.The role of CXCR7/ RDC1 as a chemokine receptor for CXCL12/SDF-1 in prostate cancer[J].J Biol Chem,2008,283(7):4283-4294.

[18]Kegelman TP,Das SK,Hu B,et al.MDA-9/syntenin is a key regulator of glioma pathogenesis[J].Neuro Oncol,2014,16(1): 50-61.

The study on molecular mechanism underlying the pro-invasion and pro-migration of Syntenin in gliomacells

ObjectiveTo investigate the effect of different gene expression levels of Syntenin on invasion and mi?gration of glioma cells and the underlying molecular mechanisms.MethodsLentiviral RNA interference was used to knockdown the expression of syntenin in U-87 cells.Real-time quantitative PCR was used to detect mRNA expression levels of syntenin.Transwell assay and adhesion assay were used to examine the invasion,migration and adhesion,re?spectively.Western-blot was used to detect the protein expression levels of Syntenin,AKT,p-AKT,and MMP-9.Re?sultsThe mRNA expression level of Syntenin was greatly reduced in interference group compared with empty vector group(P＜0.01).The ability of invasion and migration was much lower in interference group than in empty vector group（P＜0.01）.However,there were no significant differences in invasion and migration between empty vector group and con?trol group.The adhesion ability of glioma U-87 cells was much higher in interference group than in empty vector group（P＜0.05）.However,when U-87 cells were seeded on 96-wells coated with HUVEC,the adhesion ability was much lower in interference group than in empty vector group（P＜0.05）.The protein expression levels of Syntenin,p-AKT,and MMP-9 in interference group were markedly decreased compared with empty vector group（P＜0.05）.There was no signif?icant difference in expression of AKT protein between interference group and empty vector group(P＞0.05).ConclusionSyntenin may enhance the invasion and migration ability of glioma though up-regulation of p-AKT,which in turn pro?motes MMP-9 expression in a corresponding signal transduction pathway.

Glioma Syntenin Invasion Migration

R739.41

A

2015-01-13）

（責(zé)任編輯:甘章平）

10.3936/j.issn.1002-0152.2015.05.008

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* 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)外科，重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院實(shí)驗(yàn)研究中心（重慶 400016）

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