商麗麗，孫秋，白楊

白城市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林白城 137000

桑寄生為桑寄生科植物桑寄生Taxi11us chinensis(DC.)Danse的干燥帶葉莖枝。冬季至次春采割，除去粗莖，切段，干燥，或蒸后干燥[1]。桑寄生入藥始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，名“桑上寄生”，列入上品。《名醫(yī)別錄》云：“一名蔦，生弘農(nóng)川谷桑樹上，三月三日采莖葉，陰干。”《新修本草》載：“此多生槲、櫸、柳、水楊、楓等樹上，子黃，大如小棗子。惟虢州有桑上者，子汁甚粘，核大似小豆；葉無(wú)陰陽(yáng)，如細(xì)柳葉而厚；晚莖粗短。江南人相承用為續(xù)斷，殊不相關(guān)。且寄生實(shí)九月始熟而黃?！薄妒癖静荨吩疲骸鞍粗T樹多有寄生，莖葉并相似?！庇衷疲骸叭~如橘而厚軟，莖如槐而肥脆，今處處有。方家惟須桑上者，然非自采即難以別，可斷莖而視之，以色深黃者為驗(yàn)?！秷D經(jīng)本草》葉似龍膽而厚闊，莖短似雞腳，作樹形。三月、四月花，黃赤色，六月、七月結(jié)子黃綠色，如小豆，以汁稠粘者良也?！本C上所述，古代所用的桑寄生，系來源于桑寄生科不同屬的數(shù)種植物，除現(xiàn)作桑寄生入藥的鈍果寄生屬、梨果寄生屬外，尚包括槲寄生屬植物。

歷史上，槲寄生和桑寄生用名較為混亂，且由于二者功效相似及用藥習(xí)慣的沿襲，臨床上二者一直是混用的。從《名醫(yī)別錄》到《本草綱目》的一些本草著作，關(guān)于桑上寄生一項(xiàng)大都指槲寄生，直至近代?！吨参飳W(xué)大辭典》1918年將Lorantheceae譯為槲寄生，于是“槲寄生”一詞在藥學(xué)界廣為應(yīng)用了。到1977年版《中華人民共和國(guó)藥典》已將槲寄生與桑寄生分別列為兩種中藥，它們分屬桑寄生科的桑寄生屬和槲寄生屬[2]?，F(xiàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]中不含含量測(cè)定項(xiàng)槲皮素，為了控制桑寄生的質(zhì)量，更好的區(qū)別桑寄生與槲寄生，特研究設(shè)立了高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定桑寄生中槲皮素的含量[3]，此方法操作很簡(jiǎn)單，數(shù)據(jù)比較穩(wěn)定，結(jié)果很準(zhǔn)確。

1 材料與儀器

1.1 材料

圖1 HPLC色譜圖

中藥材桑寄生批號(hào)：20151012、20151013、20151014、20151032、21051033、20151034、20151035、20151036、20151047、20151048；槲寄生陰性對(duì)照藥材（中國(guó)藥品生物制品檢定所）批號(hào)：121038-201014；桑寄生陽(yáng)性對(duì)照藥材（中國(guó)藥品生物制品檢定所）批號(hào)：121075-200402對(duì)照品：槲皮素（中國(guó)藥品生物制品檢定所）批號(hào)：100081-200406；含量測(cè)定所用的甲醇為青島試劑廠生產(chǎn)的色譜純，其他試劑均為分析純。

1.2 使用的儀器

Agi1ent高效液相色譜儀；檢測(cè)器為ΜV-2450型紫外-可見分光；工作站為Sepμ 3000色譜。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agi1ent SB-C18 色譜柱（4.6×250 mm,5μm）；柱溫30℃。流速：1.0 mL/min、流動(dòng)相：甲醇：0.5%磷酸溶液(47:53)；檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm。理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算不得低于2500[4]。

2.2 對(duì)照品溶液的配置

精密稱取對(duì)照品槲皮素10 mg，置100 mL量瓶中，適量加80%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取10 mL，至50 mL量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，制成每1 mL含20 μg的槲皮素對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的配置

取10批桑寄生樣品粉末（過4號(hào)篩）各約2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸（23-2）50 mL，稱定重量，加熱回流2 h，取出，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液即得[6]。

2.4 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

紫外-可見分光光度法，采用的儀器為北京普析TI-1901，以槲皮素對(duì)照品溶液的溶劑甲醇為空白對(duì)照，掃描200～400的紫外光區(qū)，測(cè)的槲皮素的最大吸收為260 nm，即為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.5 陰性對(duì)照溶液制備

取槲寄生對(duì)照藥材粉末約1 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸（23-2）50 mL，稱定重量，加熱回流2 h，取出，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液即得陰性對(duì)照溶液。

2.6 陽(yáng)性對(duì)照溶液的制備

取桑寄生對(duì)照藥材粉末約1 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸（23-2）50 mL，稱定重量，加熱回流2 h，取出，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液即得陽(yáng)性對(duì)照溶液。

2.7 測(cè)定法

分別精密吸取對(duì)照品溶液10μL、陰性對(duì)照溶液10 μL、陽(yáng)性對(duì)照溶液10 μL和10批供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。見圖1。

2.8 線性關(guān)系考察

實(shí)驗(yàn)對(duì)濃度為20 μg/mL的槲皮素對(duì)照品溶液進(jìn)行線性考察。 精密吸取對(duì)照品溶液 2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL 注入高效液相色譜儀（HPLC）中，按照上述條件測(cè)定吸收峰面積，計(jì)算進(jìn)樣量，以峰面積積分值橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)（μg），根據(jù)面積歸一化法繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到槲皮素回歸方程Y=3147.214x+268.159,r=0.9996，實(shí)驗(yàn)采用的對(duì)照品濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

隨機(jī)抽取中藥材桑寄生供試品溶液（批號(hào)：20151036），精密程定 0.5 g、1.0 g、1.5 g、2.0 g、2.5 g、2.6 g 依據(jù)供試品制備方法制備溶液，精密吸取對(duì)照品溶液及上述供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀（HPLC）中，按照上述條件測(cè)定吸收峰面積，計(jì)算進(jìn)樣量，以峰面積積分值橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)（μg），根據(jù)面積歸一化法繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到槲皮素回歸方程Y=3514.214x+204.197，r=0.9991，實(shí)驗(yàn)采用的供試品濃度同樣呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.9 藥物穩(wěn)定性的試驗(yàn)

精密吸取同一份供試液，依次在0 h，3 h，6 h，12 h和24 h進(jìn)行測(cè)定，共考察24 h。統(tǒng)計(jì)峰面積平均為3245.41，RSD為1.0%,說明槲皮素至少在24 h內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。

2.10 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一份供試品溶液10μL，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣9次，測(cè)定吸收峰面積，結(jié)果吸收峰面積的平均值為3 262.04，RSD 為 1.0%（n=9）。

2.11 系統(tǒng)重復(fù)性試驗(yàn)

取對(duì)同一批量的樣品按以上敘述含量測(cè)定方法連續(xù)進(jìn)行9次平行試驗(yàn)測(cè)定，計(jì)算其含量，結(jié)果供試品中槲皮素的平均含量為1.61mg/g,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為為0.7%(n=9)。

2.12 方法回收率試驗(yàn)

隨機(jī)抽取已經(jīng)知道含量的中藥材桑寄生供試品（批號(hào)：20151014），精密稱取 8份，每份為 2 g，分別精密注入含槲皮素0.1012 mg/mL的對(duì)照品溶液1.0 mL,按上述試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算其回收率，結(jié)果見表1。

表1 桑寄生中槲皮素的加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.13 樣品測(cè)定結(jié)果

按照前述方法配置供試品溶液與對(duì)照品溶液，分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定計(jì)算其含量，樣品測(cè)定的結(jié)果見表2。

3 討論

①為加強(qiáng)對(duì)中藥材在流通領(lǐng)域中的監(jiān)督管理,我省對(duì)易混淆中藥材品種進(jìn)行了重點(diǎn)監(jiān)督抽驗(yàn),從監(jiān)督抽驗(yàn)情況看,中藥材在部分經(jīng)營(yíng)單位和醫(yī)療使用單位仍有混用現(xiàn)象,其中以桑寄生與槲寄生的混用現(xiàn)象為多。桑寄生和槲寄生歷史上就有混用的情況。桑寄生是華南、江南、西南地區(qū)藥材流通的主流產(chǎn)品。槲寄生是東北、華北、西北地區(qū)的主流品種。雖然桑寄生和槲寄生的藥理作用相近，但有效成作用機(jī)制分均不同。曾有人提議，將桑寄生、槲寄生合并用，這是沒有充足理論依據(jù)的[8-10]。

②該實(shí)驗(yàn)針對(duì)桑寄生和槲寄生成分的不同，對(duì)桑寄生的含量進(jìn)行測(cè)定，是對(duì)桑寄生的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步提高，原標(biāo)準(zhǔn)無(wú)含量測(cè)定，現(xiàn)選擇增加槲皮素的含量測(cè)定，可以在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)桑寄生的來源質(zhì)量進(jìn)行控制，從而達(dá)到對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量進(jìn)行更好的監(jiān)控，減少經(jīng)營(yíng)單位和醫(yī)療使用單位的混用現(xiàn)象。

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[2]桑寄生[S].中華人民共和國(guó)藥典，1997.

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[4]地錦草 [S].中華人民共和國(guó)藥典一部，2015：127.

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