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        桑寄生質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

        2015-01-31 06:03:38商麗麗孫秋白楊
        關(guān)鍵詞:槲寄生桑寄生混用

        商麗麗,孫秋,白楊

        白城市食品藥品檢驗(yàn)所,吉林白城 137000

        桑寄生為桑寄生科植物桑寄生Taxi11us chinensis(DC.)Danse的干燥帶葉莖枝。冬季至次春采割,除去粗莖,切段,干燥,或蒸后干燥[1]。桑寄生入藥始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,名“桑上寄生”,列入上品?!睹t(yī)別錄》云:“一名蔦,生弘農(nóng)川谷桑樹上,三月三日采莖葉,陰干?!薄缎滦薇静荨份d:“此多生槲、櫸、柳、水楊、楓等樹上,子黃,大如小棗子。惟虢州有桑上者,子汁甚粘,核大似小豆;葉無陰陽,如細(xì)柳葉而厚;晚莖粗短。江南人相承用為續(xù)斷,殊不相關(guān)。且寄生實(shí)九月始熟而黃。”《蜀本草》云:“按諸樹多有寄生,莖葉并相似?!庇衷疲骸叭~如橘而厚軟,莖如槐而肥脆,今處處有。方家惟須桑上者,然非自采即難以別,可斷莖而視之,以色深黃者為驗(yàn)。《圖經(jīng)本草》葉似龍膽而厚闊,莖短似雞腳,作樹形。三月、四月花,黃赤色,六月、七月結(jié)子黃綠色,如小豆,以汁稠粘者良也。”綜上所述,古代所用的桑寄生,系來源于桑寄生科不同屬的數(shù)種植物,除現(xiàn)作桑寄生入藥的鈍果寄生屬、梨果寄生屬外,尚包括槲寄生屬植物。

        歷史上,槲寄生和桑寄生用名較為混亂,且由于二者功效相似及用藥習(xí)慣的沿襲,臨床上二者一直是混用的。從《名醫(yī)別錄》到《本草綱目》的一些本草著作,關(guān)于桑上寄生一項(xiàng)大都指槲寄生,直至近代?!吨参飳W(xué)大辭典》1918年將Lorantheceae譯為槲寄生,于是“槲寄生”一詞在藥學(xué)界廣為應(yīng)用了。到1977年版《中華人民共和國(guó)藥典》已將槲寄生與桑寄生分別列為兩種中藥,它們分屬桑寄生科的桑寄生屬和槲寄生屬[2]?,F(xiàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]中不含含量測(cè)定項(xiàng)槲皮素,為了控制桑寄生的質(zhì)量,更好的區(qū)別桑寄生與槲寄生,特研究設(shè)立了高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定桑寄生中槲皮素的含量[3],此方法操作很簡(jiǎn)單,數(shù)據(jù)比較穩(wěn)定,結(jié)果很準(zhǔn)確。

        1 材料與儀器

        1.1 材料

        圖1 HPLC色譜圖

        中藥材桑寄生批號(hào):20151012、20151013、20151014、20151032、21051033、20151034、20151035、20151036、20151047、20151048;槲寄生陰性對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所)批號(hào):121038-201014;桑寄生陽性對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所)批號(hào):121075-200402對(duì)照品:槲皮素(中國(guó)藥品生物制品檢定所)批號(hào):100081-200406;含量測(cè)定所用的甲醇為青島試劑廠生產(chǎn)的色譜純,其他試劑均為分析純。

        1.2 使用的儀器

        Agi1ent高效液相色譜儀;檢測(cè)器為ΜV-2450型紫外-可見分光;工作站為Sepμ 3000色譜。

        2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

        2.1 色譜條件

        色譜柱:Agi1ent SB-C18 色譜柱(4.6×250 mm,5μm);柱溫30℃。流速:1.0 mL/min、流動(dòng)相:甲醇:0.5%磷酸溶液(47:53);檢測(cè)波長(zhǎng):360 nm。理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算不得低于2500[4]。

        2.2 對(duì)照品溶液的配置

        精密稱取對(duì)照品槲皮素10 mg,置100 mL量瓶中,適量加80%甲醇使溶解并稀釋至刻度,搖勻。精密量取10 mL,至50 mL量瓶中,加80%甲醇稀釋至刻度,制成每1 mL含20 μg的槲皮素對(duì)照品溶液。

        2.3 供試品溶液的配置

        取10批桑寄生樣品粉末(過4號(hào)篩)各約2 g,精密稱定,置錐形瓶中,精密加入甲醇-鹽酸(23-2)50 mL,稱定重量,加熱回流2 h,取出,放冷,用甲醇補(bǔ)足減失重量,搖勻,濾過,棄去初濾液,取續(xù)濾液即得[6]。

        2.4 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

        紫外-可見分光光度法,采用的儀器為北京普析TI-1901,以槲皮素對(duì)照品溶液的溶劑甲醇為空白對(duì)照,掃描200~400的紫外光區(qū),測(cè)的槲皮素的最大吸收為260 nm,即為檢測(cè)波長(zhǎng)。

        2.5 陰性對(duì)照溶液制備

        取槲寄生對(duì)照藥材粉末約1 g,精密稱定,置錐形瓶中,精密加入甲醇-鹽酸(23-2)50 mL,稱定重量,加熱回流2 h,取出,放冷,用甲醇補(bǔ)足減失重量,搖勻,濾過,棄去初濾液,取續(xù)濾液即得陰性對(duì)照溶液。

        2.6 陽性對(duì)照溶液的制備

        取桑寄生對(duì)照藥材粉末約1 g,精密稱定,置錐形瓶中,精密加入甲醇-鹽酸(23-2)50 mL,稱定重量,加熱回流2 h,取出,放冷,用甲醇補(bǔ)足減失重量,搖勻,濾過,棄去初濾液,取續(xù)濾液即得陽性對(duì)照溶液。

        2.7 測(cè)定法

        分別精密吸取對(duì)照品溶液10μL、陰性對(duì)照溶液10 μL、陽性對(duì)照溶液10 μL和10批供試品溶液各10 μL,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。見圖1。

        2.8 線性關(guān)系考察

        實(shí)驗(yàn)對(duì)濃度為20 μg/mL的槲皮素對(duì)照品溶液進(jìn)行線性考察。 精密吸取對(duì)照品溶液 2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL 注入高效液相色譜儀(HPLC)中,按照上述條件測(cè)定吸收峰面積,計(jì)算進(jìn)樣量,以峰面積積分值橫坐標(biāo),進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)(μg),根據(jù)面積歸一化法繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到槲皮素回歸方程Y=3147.214x+268.159,r=0.9996,實(shí)驗(yàn)采用的對(duì)照品濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

        隨機(jī)抽取中藥材桑寄生供試品溶液(批號(hào):20151036),精密程定 0.5 g、1.0 g、1.5 g、2.0 g、2.5 g、2.6 g 依據(jù)供試品制備方法制備溶液,精密吸取對(duì)照品溶液及上述供試品溶液各10 μL,注入高效液相色譜儀(HPLC)中,按照上述條件測(cè)定吸收峰面積,計(jì)算進(jìn)樣量,以峰面積積分值橫坐標(biāo),進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)(μg),根據(jù)面積歸一化法繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到槲皮素回歸方程Y=3514.214x+204.197,r=0.9991,實(shí)驗(yàn)采用的供試品濃度同樣呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

        2.9 藥物穩(wěn)定性的試驗(yàn)

        精密吸取同一份供試液,依次在0 h,3 h,6 h,12 h和24 h進(jìn)行測(cè)定,共考察24 h。統(tǒng)計(jì)峰面積平均為3245.41,RSD為1.0%,說明槲皮素至少在24 h內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。

        2.10 精密度試驗(yàn)

        精密吸取同一份供試品溶液10μL,連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣9次,測(cè)定吸收峰面積,結(jié)果吸收峰面積的平均值為3 262.04,RSD 為 1.0%(n=9)。

        2.11 系統(tǒng)重復(fù)性試驗(yàn)

        取對(duì)同一批量的樣品按以上敘述含量測(cè)定方法連續(xù)進(jìn)行9次平行試驗(yàn)測(cè)定,計(jì)算其含量,結(jié)果供試品中槲皮素的平均含量為1.61mg/g,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為為0.7%(n=9)。

        2.12 方法回收率試驗(yàn)

        隨機(jī)抽取已經(jīng)知道含量的中藥材桑寄生供試品(批號(hào):20151014),精密稱取 8份,每份為 2 g,分別精密注入含槲皮素0.1012 mg/mL的對(duì)照品溶液1.0 mL,按上述試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算其回收率,結(jié)果見表1。

        表1 桑寄生中槲皮素的加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

        2.13 樣品測(cè)定結(jié)果

        按照前述方法配置供試品溶液與對(duì)照品溶液,分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10 μL,注入高效液相色譜儀,測(cè)定計(jì)算其含量,樣品測(cè)定的結(jié)果見表2。

        3 討論

        ①為加強(qiáng)對(duì)中藥材在流通領(lǐng)域中的監(jiān)督管理,我省對(duì)易混淆中藥材品種進(jìn)行了重點(diǎn)監(jiān)督抽驗(yàn),從監(jiān)督抽驗(yàn)情況看,中藥材在部分經(jīng)營(yíng)單位和醫(yī)療使用單位仍有混用現(xiàn)象,其中以桑寄生與槲寄生的混用現(xiàn)象為多。桑寄生和槲寄生歷史上就有混用的情況。桑寄生是華南、江南、西南地區(qū)藥材流通的主流產(chǎn)品。槲寄生是東北、華北、西北地區(qū)的主流品種。雖然桑寄生和槲寄生的藥理作用相近,但有效成作用機(jī)制分均不同。曾有人提議,將桑寄生、槲寄生合并用,這是沒有充足理論依據(jù)的[8-10]。

        ②該實(shí)驗(yàn)針對(duì)桑寄生和槲寄生成分的不同,對(duì)桑寄生的含量進(jìn)行測(cè)定,是對(duì)桑寄生的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步提高,原標(biāo)準(zhǔn)無含量測(cè)定,現(xiàn)選擇增加槲皮素的含量測(cè)定,可以在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)桑寄生的來源質(zhì)量進(jìn)行控制,從而達(dá)到對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量進(jìn)行更好的監(jiān)控,減少經(jīng)營(yíng)單位和醫(yī)療使用單位的混用現(xiàn)象。

        [1]桑寄生[S].中華人民共和國(guó)藥典一部,2015:299.

        [2]桑寄生[S].中華人民共和國(guó)藥典,1997.

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        [4]地錦草 [S].中華人民共和國(guó)藥典一部,2015:127.

        [5]周風(fēng)雨.桑寄生和槲寄生不宜混用 [J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2009,3(3):109.

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