屈中玉 (南陽市中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科一病區(qū)，河南 南陽 473009)

結(jié)腸腺癌患者術(shù)后組織中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表達及意義

屈中玉 (南陽市中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科一病區(qū)，河南 南陽 473009)

目的 應(yīng)用免疫組化方法檢測結(jié)腸腺癌中NADPH:醌氧化還原酶(NQO)-1、組織蛋白酶(Cath)-D和Ki-67增殖指數(shù)(Ki-67)的表達，分析其關(guān)系及臨床意義。方法 經(jīng)病理確診的124例結(jié)腸腺癌術(shù)后組織及臨床資料作為觀察組，80例上皮內(nèi)瘤變的結(jié)腸黏膜組織作為對照組，80例正常結(jié)腸黏膜組織作為正常對照組，應(yīng)用免疫組化方法檢測三組中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表達。結(jié)果 三組中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達的陽性率差別有統(tǒng)計學(xué)意義，觀察組中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表達與腫瘤的分化程度、浸潤深度、TNM分期、脈管浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。相關(guān)性分析顯示NQO-1和Ki-67、Cath-D和Ki-67的表達均具有正相關(guān)性。結(jié)論 結(jié)腸腺癌術(shù)后組織中NQO-1、Cath-D和Ki-67均高表達，NQO-1和Cath-D均與Ki-67的表達具有協(xié)同作用，對促進腫瘤的發(fā)生、進展和增殖有一定作用。

結(jié)腸腺癌;NQO-1;Cath-D;Ki-67;免疫組化

結(jié)腸腺癌病變形成及發(fā)展過程中多種蛋白表達失調(diào)，并對腫瘤的微環(huán)境有重要影響。NADPH:醌氧化還原酶(NQO)-1是一種黃素酶，在多種腫瘤中高表達，也是促進腫瘤進展的重要蛋白〔1，2〕。組織蛋白酶(Cath)-D是與腫瘤生長、增殖和侵襲相關(guān)的蛋白，在多種腫瘤中高表達，可以加速腫瘤惡變和浸潤，同時參與胚胎發(fā)育、腫瘤形成及血管生成過程〔3，4〕。Ki-67增殖指數(shù)與腫瘤細胞增殖狀態(tài)相關(guān)，標(biāo)記腫瘤細胞增殖的特異性強〔5〕。本文應(yīng)用免疫組化方法檢測結(jié)腸腺癌術(shù)后組織中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表達，探討其關(guān)系及臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年1月至2012年12月在我院行結(jié)腸腺癌根治的手術(shù)患者共124例作為觀察組，統(tǒng)計患者臨床資料并留取術(shù)后的蠟塊組織。完全符合WHO中的具體診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中男70例，女54例;年齡54～78歲，平均67.6歲。高分化60例，中分化30例，低分化34例。術(shù)前均未進行放、化療。80例上皮內(nèi)瘤變的結(jié)腸黏膜組織作為對照組，其中男40例，女40例，年齡56～77歲，平均66.8歲。選取觀察組中距離腫瘤邊緣＞3 cm的正常結(jié)腸黏膜組織80例作為對照組，其中男41例，女39例;年齡55～76歲，平均66.5歲。三組一般資料無明顯差別。

1.2 NQO-1、Cath-D和 Ki-67表達的檢測 NQO-1、Cath-D和Ki-67抗體均為濃縮液，依不同比例進行稀釋后應(yīng)用免疫組化SP法、DAB染色進行預(yù)實驗，并設(shè)陽性對照和陰性對照。選擇最理想的配比濃度進行正式實驗。正式實驗應(yīng)用免疫組化SP法。嚴(yán)格按說明書操作，嚴(yán)格質(zhì)控。

1.3 NQO-1、Cath-D和Ki-67陽性的判定方法 NQO-1、Cath-D的陽性表達均位于細胞質(zhì)中(少數(shù)表達于細胞核中的均不計數(shù))，Ki-67陽性表達均位于細胞核中，以染成棕黃色顆粒為陽性細胞，計數(shù)10個400倍視野，取陽性細胞的平均值，NQO-1、Cath-D以陽性率≥5%為陽性，以陽性率＜5%為陰性。Ki-67以陽性率≥25%為陽性，以陽性率＜25%為陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12軟件進行χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 3 組中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達陽性率的比較 正常對照組、對照組和觀察組中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達的陽性率有增高趨勢。見表1。

2.2 觀察組不同臨床特征中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達陽性率的比較 觀察組中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表達與腫瘤的分化程度、浸潤深度、TNM分期、脈管浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。見表2。

表1NQO-1、Cath-D和Ki-67在3組中表達的比較〔n(%)〕

表2 觀察組不同臨床特征中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達陽性率的比較〔n(%)〕

2.3 觀察組中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達的相關(guān)性 觀察組中 NQO-1和 Ki-67(r=0.49，P=0.011 3)、Cath-D 和 Ki-67(r=0.48，P=0.020 9)的表達具有正相關(guān)性，而NQO-1和Cath-D的表達未見明顯相關(guān)性(P＞0.05)。

3 討論

結(jié)腸腺癌是一種上皮性腫瘤，居男性腫瘤的第四位，女性腫瘤的第三位，其發(fā)病涉及多種因素，如遺傳易感性、基因突變、增生失調(diào)等。多種腫瘤相關(guān)基因異常表達是促進腫瘤進展的重要因素。NQO-1蛋白是一種胞質(zhì)黃素酶，其基因定位于16q22染色體，在正常組織中有微量表達〔6，7〕。有研究認(rèn)為不同NQO-1基因亞型編碼的酶類呈現(xiàn)不同的活性〔8〕。如由TT純合子誘導(dǎo)的NQO-1活性失調(diào)，可以引起肝細胞對外源性致腫瘤物質(zhì)的解毒功能下降〔9〕。也有研究則認(rèn)為NQO-1可以作為一個氧化應(yīng)激反應(yīng)調(diào)節(jié)因子，對惡性腫瘤的進展起一定的調(diào)節(jié)作用〔8〕。李琰等〔10〕認(rèn)為 NQO-1的表達變化，可以使機體對環(huán)境致癌因素的解毒功能降低，使細胞易受到氧化損傷，增加對化學(xué)致癌物引起腫瘤的易感性。Cath-D是一種溶酶體天冬氨酸蛋白酶，參與腫瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移〔11，12〕，Cath-D還可以作為雌激素調(diào)節(jié)的溶酶體蛋白酶〔13〕，調(diào)節(jié)腫瘤細胞的增殖和細胞間的黏附作用〔14，15〕。NQO-1、Cath-D 均可能對腫瘤的惡變有一定影響。

本實驗結(jié)果提示NQO-1、Cath-D、Ki-67三種蛋白在腫瘤發(fā)生過程中起重要的促進作用，NQO-1、Cath-D可能通過促進Ki67增殖發(fā)揮重要的促進腫瘤進展作用。三種蛋白參與腫瘤由幼稚到成熟的內(nèi)在過程，也顯示出三種蛋白在細胞惡變起始過程中起的作用。三種蛋白參與腫瘤的生長及侵襲全過程，即當(dāng)NQO-1、Cath-D和KI-67高表達時，引起腫瘤細胞呈蟹足樣生長，對周圍的破壞能力增強，對局部微環(huán)境的影響大。三種蛋白參與腫瘤的進展，尤其是參與腫瘤的淋巴道播散和遠處播散的過程中。TNM分期是臨床判斷腫瘤生物學(xué)行為和預(yù)后的重要指標(biāo)，因此聯(lián)合檢測NQO-1、Cath-D和Ki-67高表達可能預(yù)示著腫瘤的不良預(yù)后，后續(xù)實驗將關(guān)注患者生存，以證實此觀點。NQO-1、Cath-D在對腫瘤影響過程中，全程參與了細胞的增殖過程，尤其是失控性增殖反應(yīng)過程〔16，17〕。近來也有研究顯示NQO-1激活后，凋亡信號傳導(dǎo)受到影響，正常細胞的不斷增生繁殖，而凋亡受到阻滯，細胞逐漸惡變〔18〕。因此NQO-1也可能是調(diào)節(jié)凋亡的重要因子。有學(xué)者認(rèn)為NQO-1具有癌基因的許多特征，如誘導(dǎo)非錨定依賴性細胞周期進展等生物學(xué)行為過程〔19〕。

1 Wang Y，Zhang G，Luo Y.Association between NQO1 C609T polymorphism and colorectal cancer risk〔J〕.Tumour Biol，2013;34(6):4027-32.

2 Hamachi T，Tajima O，Uezono K，et al.CYP1A1，GSTM1，GSTT1 and NQO1 polymorphisms and colorectal adenomas in Japanese men〔J〕.World J Gastroenterol，2013;19(25):4023-30.

3 Kepka A，Waszkiewicz M，Roszkowska-Jakimiec W，et al.Lysosomal exoglycosidases and cathepsin D in colon adenocarcinoma〔J〕.Pol Arch Med Wewn，2012;122(11):551-6.

4 Nicotra G，Castino R，F(xiàn)ollo C，et al.The dilemma:does tissue expression of cathepsin D reflect tumor malignancy?The question:does the assay truly mirror cathepsin D mis-function in the tumor〔J〕?Cancer Biomark，2010;7(1):47-64.

5 李勝水，許 華，李秀清，等.原發(fā)性膽囊癌中ILK、E-cad和KI67的表達及意義〔J〕.實用醫(yī)學(xué)雜志，2013;9(19):3204-6.

6 Zhu CL，Huang Q，Liu CH，et al.NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1(NQO1)C609T gene polymorphism association with digestive tract cancer:a meta-analysis〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev，2013;14(4):2349-54.

7 Chen J，Lin Y，Zhang R，et al.Contribution of NAD(P)H quinone oxidoreductase 1(NQO1)Pro187Ser polymorphism and risk of colorectal adenoma and colorectal cancer in Caucasians:a meta-analysis〔J〕.Arch Med Res，2012;43(1):58-66.

8 桂文波，肖開銀.NQO1蛋白在家族聚集性肝癌中的表達及臨床意義〔J〕.中國癌癥防治雜志，2010;2(4):279-81.

9 Sameer AS，Shah ZA，Syeed N，et al.NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1(NQO1)Pro187Ser polymorphism and colorectal cancer predisposition in the ethnic Kashmiri population〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev，2010;11(1):209-13.

10 李 琰，張健慧，郭 煒，等.NAD(P)H:醌氧化還原酶1 C609T多態(tài)性與賁門癌發(fā)病風(fēng)險〔J〕.中華流行病學(xué)雜志，2004;25(8):731-2.

11 Dian D，Heublein S，Wiest I，et al.Significance of the tumor protease cathepsin D for the biology of breast cancer〔J〕.Histol Histopathol，2014;29(4):433-8.

12 Markicevic M，Kanjer K，Mandusic V，et al.Cathepsin D as an indicator of clinical outcome in early breast carcinoma during the first 3 years of follow-up〔J〕.Biomark Med，2013;7(5):747-58.

13 肖華亮，王 東，李增鵬，等.骨肉瘤組織蛋白酶D表達及其預(yù)后的關(guān)系〔J〕.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，1999;21(2):109-12.

14 Shin IY，Sung NY，Lee YS，et al.The expression of multiple proteins as prognostic factors in colorectal cancer:cathepsin D，p53，COX-2，epidermal growth factor receptor，C-erbB-2，and Ki-67〔J〕.Gut Liver，2014;8(1):13-23.

15 Kim YR，Kim HS，An CH，et al.Mutational and expressional analysis of cathepsin D in gastric and colorectal cancers with microsatellite instability〔J〕.APMIS，2010;118(8):617-9.

16 Szajda SD，Snarska J，Jankowska A，et al.Cathepsin D and carcino-embryonic antigen in serum，urine and tissues of colon adenocarcinoma patients〔J〕.Hepatogastroenterology，2008;55(82-83):388-93.

17 陳曉藝，張白凌，陳少杰.組織蛋白酶D與基質(zhì)金屬蛋白酶-9在口腔鱗癌的表達〔J〕.福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2006;40(6):560-1.

18 Chiu MM，Ko YJ，Tsou AP，et al.Analysis of NQO1 polymorphisms and p53 protein expression in patients with hepatocellularcarcinoma〔J〕.Histol Histopathol，2009;24(10):1223-32.

19 Awadallah NS，Dehn D，Shah RJ，et al.NQO1 expression in pancreatic cancer and its potential use as a biomarker〔J〕.Appl Immunohistochem Mol Morphol，2008;16(1):24-31.

R735.3

A

1005-9202(2015)09-2435-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.09.057

屈中玉(1972-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事惡性腫瘤基因靶向及綜合治療研究。

〔2013-11-21修回〕

(編輯 苑云杰)