吳蜀瑤，李敏，王佳黎

（1.江西中醫(yī)藥大學(xué)姚荷生研究室，南昌330004；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都611137；3.四川大學(xué)，成都610065）

黃花蒿植株不同組織中揮發(fā)油及青蒿素的含量比較

吳蜀瑤1，李敏2，王佳黎3

（1.江西中醫(yī)藥大學(xué)姚荷生研究室，南昌330004；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都611137；3.四川大學(xué)，成都610065）

青蒿為菊科植物黃花蒿的干燥地上部分，性寒，味苦、辛，主治陰虛發(fā)熱、暑熱外感、瘧疾、濕熱黃疸[1-2]。《中華本草》除青蒿外，還收錄了青蒿子與青蒿根[3]，二者來(lái)源與青蒿相同，但藥用部位不同。文獻(xiàn)報(bào)道青蒿子可治療創(chuàng)傷和癰腫[4]。但關(guān)于青蒿根及青蒿子化學(xué)成分、藥理作用等方面的系統(tǒng)研究卻未見(jiàn)報(bào)道。

青蒿素是從黃花蒿中提取的抗瘧活性成分，關(guān)于該成分提取分離、藥理作用等方面的研究層出不窮，而關(guān)于其在黃花蒿中分布規(guī)律的研究卻少有報(bào)道，且主要集中在植株不同部位的葉片上，認(rèn)為黃花蒿葉片中青蒿素含量從上至下逐漸減少，卻忽視了黃花蒿花、子等組織的研究[5-6]。除青蒿素外，黃花蒿揮發(fā)油因有多種生物活性而引起學(xué)者的重視[7]，其具有抗菌、解熱、止咳、平喘等藥理作用，可治療上呼吸道感染、神經(jīng)性皮炎及皮膚真菌病等疾病[8-9]。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)比較黃花蒿葉、花、莖、子、根中青蒿素和揮發(fā)油的含量，定量分析這兩類成分在各組織的分布情況，為更好地利用和發(fā)掘該藥材資源提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)為黃花蒿子和根的藥用價(jià)值開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料

prostar210型高效液相色譜儀（美國(guó)瓦里安有限公司），UV1100型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海天美科學(xué)儀器有限公司），BP121S型電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）。藥材采自四川省資陽(yáng)市安岳縣及成都市溫江區(qū)，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室李敏教授鑒定為菊科植物黃花蒿Artemisia annua的干燥全株；青蒿素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100202-200402），甲醇為色譜純，水為純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油含量的測(cè)定

將黃花蒿子、根、葉、花、莖分別粉粹過(guò)二號(hào)篩，精密稱取50℃恒溫干燥后的黃花蒿子、根、葉、花、莖樣品各約100 g，按2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄XD揮發(fā)油測(cè)定法中甲法進(jìn)行試驗(yàn)，計(jì)算揮發(fā)油含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 青蒿素的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) Welch Materials XB-C18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm），流動(dòng)相磷酸鹽緩沖液-甲醇（40∶60），檢測(cè)波長(zhǎng)260 nm，流速0.8 mL·min－1，柱溫25℃，進(jìn)樣量10 μL。在該條件下，青蒿素色譜峰與相鄰色譜峰達(dá)到基線分離，分離度>1.5，理論塔板數(shù)按青蒿素峰計(jì)>5000，見(jiàn)圖1。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 采取柱前衍生化法測(cè)定，通過(guò)單因素試驗(yàn)考察了衍生化反應(yīng)的溫度、NaOH質(zhì)量分?jǐn)?shù)及反應(yīng)時(shí)間，確定了對(duì)照品溶液的制備方法。精密稱取青蒿素對(duì)照品25.62 mg置于25 mL量瓶中，用95%乙醇溶解并稀釋至刻度；精密量取10 mL至100 mL量瓶中，加入0.2% NaOH溶液40 mL，于25℃恒溫水浴中反應(yīng)60 min，取出，冷卻至室溫，加0.4%乙酸溶液稀釋至刻度，搖勻，得102.48 mg·L－1對(duì)照品溶液。

2.2.3 線性范圍考察 精密吸取對(duì)照品溶液0.01，0.5，1，2，5，10 mL，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得系列對(duì)照品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y = 1.957 × 107X + 2.750 × 104（r = 1.0），結(jié)果表明青蒿素在1.025 × 10－3～1.025 μg與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.2.4 供試品溶液的制備 在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，精密稱取藥材粉末（過(guò)五號(hào)篩）約5.0 g，加入石油醚（60～90℃）60 mL，回流提取2 h，提取液濃縮成浸膏，加95%乙醇溶解，過(guò)濾并轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加95%乙醇稀釋至刻度。精密量取該溶液5 mL至50 mL量瓶中，按2.2.2項(xiàng)下方法自“加入0.2% NaOH溶液20 mL”至“搖勻”操作，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取 102.48 mg·L－1青蒿素對(duì)照品溶液，按 2.2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣 6次，計(jì)算青蒿素峰面積的RSD1.3%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品，平行6份，按2.2.4項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算青蒿素平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.6192 mg·g－1，RSD 1.5%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，室溫密閉保存，分別于0，1，2，4，8，10 h按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算青蒿素峰面積的RSD 1.3%，表明供試品溶液在室溫下密閉保存10 h穩(wěn)定性良好。

2.2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的黃花蒿全株樣品粉末（過(guò)五號(hào)篩）9份，每份約1.0 g，分別精密加入102.48 mg·L－1青蒿素對(duì)照品溶液13，13，13，16，16，16，19，19，19 mL，揮干溶劑，按2.2.4項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算青蒿素的回收率95%～105%，平均回收率100.34%，RSD 2.3%，說(shuō)明該檢測(cè)方法準(zhǔn)確可行。

2.2.9 樣品測(cè)定 精密吸取青蒿素對(duì)照品溶液和黃花蒿植株不同組織（子、根、葉、花、莖）供試品溶液各10 μL，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算青蒿素含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

3 討論

由于青蒿素分子結(jié)構(gòu)內(nèi)無(wú)共軛基團(tuán)，僅在紫外區(qū)203 nm處有較弱的末端吸收。與堿反應(yīng)后，分子內(nèi)過(guò)氧橋結(jié)構(gòu)被破壞，重排形成共軛結(jié)構(gòu)，產(chǎn)物在260 nm處有最大吸收，故本文采取柱前衍生化法測(cè)定青蒿素含量。本文建立了青蒿素的HPLC含量測(cè)定方法，結(jié)果顯示該方法準(zhǔn)確度、靈敏度及穩(wěn)定性均較好，測(cè)定方法可靠，可用于黃花蒿的質(zhì)量控制，測(cè)定結(jié)果能客觀反映黃花蒿各組織中青蒿素的含量。

由表1可知，黃花蒿植株各組織揮發(fā)油含量排序?yàn)榛?葉>子>根>莖，青蒿素含量排序?yàn)榛?子>葉>根>莖，均以黃花蒿花中含量為最高，且與其他組織中揮發(fā)油和青蒿素含量差異顯著，印證了黃花蒿的最佳采收季節(jié)應(yīng)為開(kāi)花時(shí)期。

近年研究發(fā)現(xiàn)黃花蒿揮發(fā)油能用于治療神經(jīng)皮炎、真菌等疾病，能誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞發(fā)生凋亡，并具有明顯的抑菌活性和抗氧化能力；青蒿素可抗寄生蟲(chóng)，包括瘧原蟲(chóng)、血吸蟲(chóng)，而且還具有顯著的抗炎、調(diào)節(jié)免疫和抗腫瘤等藥理作用[10]。本文通過(guò)比較四川產(chǎn)黃花蒿植株不同組織中揮發(fā)油和青蒿素的含量，可為全面了解這兩類成分在黃花蒿植株中分布情況提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，同時(shí)也完善了藥材青蒿子和青蒿根的化學(xué)成分研究?jī)?nèi)容，為黃花蒿藥用資源的有效開(kāi)發(fā)和利用提供參考。

摘編自《中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志》2015年第1期：42～44頁(yè)，圖、表、參考文獻(xiàn)已省略。