王斌梁 李小波 孔一名 張蓉映

溫州醫(yī)科大學(xué)附屬黃巖醫(yī)院浙江省臺(tái)州市第一人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，浙江臺(tái)州318020

真核細(xì)胞起始因子-4E表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌預(yù)后的相關(guān)性

王斌梁 李小波 孔一名 張蓉映

溫州醫(yī)科大學(xué)附屬黃巖醫(yī)院浙江省臺(tái)州市第一人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，浙江臺(tái)州318020

目的探討真核細(xì)胞起始因子-4E（eIF-4E）在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織中的表達(dá)情況及其與預(yù)后的關(guān)系。方法選擇2009年1月～2010年12月溫州醫(yī)科大學(xué)附屬黃巖醫(yī)院外科手術(shù)切除的NSCLC組織60例以及30例癌旁正常組織樣本作為對(duì)照，采用免疫組化法檢測(cè)NSCLC組織以及癌旁正常肺組織中elF4E的表達(dá)。NSCLC患者術(shù)后均接受2周以上的欖香烯聯(lián)合順鉑化療，對(duì)所有患者均進(jìn)行系統(tǒng)地隨訪評(píng)價(jià)，分析eIF-4E的表達(dá)與無瘤生存期（DFS）和總生存時(shí)間（OS）的關(guān)系。結(jié)果eIF-4E在NSCLC癌組織中的表達(dá)率為80.00%，顯著高于正常癌旁組織（33.33%），差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。年齡≥60歲及TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期患者的eIF-4E高表達(dá)率明顯高于年齡＜60歲及分期為Ⅰ～Ⅱ期的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。eIF-4E低表達(dá)患者的DFS和OS均顯著高于高表達(dá)者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論eIF-4E基因在NSCLC組織中呈高水平表達(dá)，欖香烯聯(lián)合順鉑化療后eIF-4E低表達(dá)患者的DFS和OS明顯延長(zhǎng)。eIF-4E高表達(dá)水平可作為NSCLC不良預(yù)后的預(yù)測(cè)因子。

eIF-4E基因；表達(dá)；非小細(xì)胞肺癌；預(yù)后

目前，肺癌是發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤，其引起的死亡在各種癌癥導(dǎo)致的死亡中居首位，這與其腫瘤細(xì)胞侵襲性和轉(zhuǎn)移性的生物學(xué)特征密切相關(guān)［1］。非小細(xì)胞肺癌（non-small cell cancer，NSCLS）約占肺癌的80%，大部分患者發(fā)現(xiàn)患有非小細(xì)胞肺癌時(shí)已屬于晚期，因此化療是治療非小細(xì)胞肺癌的主要方法［2］。真核細(xì)胞翻譯起始因子-4E（eukaryotic initiation factor-4E，eIF-4E）是相對(duì)分子質(zhì)量25 000、堿基序列＞50 kb、包括7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子的多膚［3］，在許多腫瘤中過度表達(dá)，并且與多種惡性腫瘤的發(fā)生、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。eIF-4E在諸如甲狀腺癌、食管癌、前列腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、肺癌、白血病以及膽管癌等惡性腫瘤和腫瘤旁組織中過度表達(dá)并與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力呈正相關(guān)。eIF-4E基因科是肺癌演進(jìn)過程中重要的標(biāo)志物，可指導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌的生物治療并為其臨床分期和預(yù)后判斷提供參考價(jià)值，在肺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移方面有著重要的意義。本研究EIF4E基因在NSCLC的表達(dá)及其與療效及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2009年1月～2010年12月于溫州醫(yī)科大學(xué)附屬黃巖醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）進(jìn)行外科手術(shù)切除的60例非小細(xì)胞肺癌組織樣本，同時(shí)收集30例癌旁正常組織（距離癌組織大于5 cm以上的組織）作為對(duì)照。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行過化療或者靶向治療。根據(jù)2002年美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)和國(guó)際抗癌聯(lián)盟制訂的TNM分期，Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期33例，根據(jù)2002年WHO分類標(biāo)準(zhǔn)，60例非小細(xì)胞肺癌組織中鱗癌29例，腺癌31例，低分化36例，中高分化24例。60例非小細(xì)胞肺癌組織中男31例，年齡35～83歲，平均（56.47±18.85）歲，女29例，年齡32～86歲，平均（58.75± 19.23）歲。30例癌旁正常組織中男18例，年齡34～85歲，平均（58.94±19.62）歲，女12例，年齡33～81歲，平均（55.84±18.52）歲。非小細(xì)胞肺癌組織和癌旁正常組織性別、年齡等基本資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)通過，患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 治療方法60例患者均在術(shù)后接受2～4周期的欖香烯（大連金港制藥公司，生產(chǎn)批號(hào)：0705131）聯(lián)合順鉑（山東德州制藥廠，生產(chǎn)批號(hào)：9050212DC）化療：欖香烯：125 mg/m2，d1、d8；順鉑；30 mg/m2，d1～d3。藥物均靜脈滴注給藥，所有患者均接受至少2周的化療，對(duì)于耐受良好患者進(jìn)行3～4周期的化療。

1.2.2 檢測(cè)方法將獲得標(biāo)本制成3μm厚的石蠟切片，常規(guī)脫蠟后使用蘇木精染色和DAB顯色（北京中杉金橋生物科技有限公司），脫水后二甲苯透明并以中性樹脂封固后置于顯微鏡下觀察。

1.2.3 結(jié)果判讀方法以細(xì)胞中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。免疫組化標(biāo)準(zhǔn)［5］：每例標(biāo)本均在400倍視野下選取500～1500個(gè)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度的觀察并計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。按陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度：無著色為0分；黃色為1分；棕黃色為2分；深棕色或棕褐色為3分。按陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)：0%～10%為0分，＞10%～25%為1分，＞25%～50%為2分，＞50%～100%為 3分。以按陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度得分和按陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)得分之和為最終結(jié)果。0～1分：陰性（-），2～3分：弱陽(yáng)性（+），4～5分：中陽(yáng)性（++），6分：強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。-～+為低表達(dá)，++～+++為高表達(dá)。

1.2.4 預(yù)后評(píng)價(jià)方法無瘤生存期（DFS）［4］：從開始化療至轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)或死亡之間的時(shí)間?？偵鏁r(shí)間（OS）［4］：從開始化療至死亡或者最后1次隨訪之間的時(shí)間，最后1次隨訪時(shí)間為2014年3月20日。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 真核細(xì)胞翻譯起始因子-4E在癌組織以及正常肺組織中的表達(dá)

非小細(xì)胞肺癌組織中eIF-4E基因的陽(yáng)性表達(dá)率為80.00%（48/60），顯著高于癌旁正常組織的33.33%（10/60），差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.38，P＜0.01）。見圖1（封四）。

2.2 真核細(xì)胞翻譯起始因子-4E的表達(dá)與患者臨床特征的關(guān)系

非小細(xì)胞肺癌組織中eIF-4E表達(dá)與患者的性別、病理類型和分化程度無關(guān)（P＞0.05），年齡≥60歲及TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期患者的eIF-4E高表達(dá)率明顯高于年齡＜60歲及分期為Ⅰ～Ⅱ期的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。提示IF-4E表達(dá)與患者的年齡及臨床病理分期有關(guān)。見表1。

2.3 真核細(xì)胞翻譯起始因子-4E的表達(dá)與患者的無瘤生存期和總生存時(shí)間關(guān)系分析

與eIF-4E基因高表達(dá)患者比較，eIF-4E基因低表達(dá)患者的DFS和OS均延長(zhǎng)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖2、3。

3 討論

肺癌是發(fā)病率和病死率增長(zhǎng)最快的惡性腫瘤，目前在世界范圍內(nèi)已成為嚴(yán)重危害人類生命和健康的主要疾病，肺癌的發(fā)病率和病死率在男性中均占第一位，在女性中，肺癌的發(fā)病率僅次于乳腺癌。腫瘤的形成是一個(gè)復(fù)雜的多階段連續(xù)過程，受多種因素的影響。目前對(duì)肺癌的治療仍缺乏有效的方法，對(duì)于失去手術(shù)機(jī)會(huì)的患者來說藥物治療的有效性緊密關(guān)聯(lián)著其生存質(zhì)量及生存期。對(duì)肺癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制、預(yù)后影響因素和藥物對(duì)肺癌細(xì)胞作用的分子機(jī)制的研究可為肺癌的藥物治療提供依據(jù)［6］。eIF-4E是真核細(xì)胞翻譯起始和調(diào)控的核心成分，它與mRNA 5'端帽子結(jié)構(gòu)結(jié)合，在蛋白質(zhì)翻譯起始過程中發(fā)揮重要作用［7］。有研究進(jìn)展表明eIF-4E是影響腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲、演進(jìn)等生物學(xué)行為的腫瘤相關(guān)因子，在許多腫瘤中過度表達(dá)且與多種惡性腫瘤的發(fā)生、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［8］，其過度表達(dá)成為腫瘤惡性改變及判斷其惡性程度的一個(gè)重要分子標(biāo)志，可為抗腫瘤治療提供新思路［9-10］。通過反義mRNA介導(dǎo)降低eIF-4E的表達(dá)可以抑制癌細(xì)胞的腫瘤特性，有研究表明，可以通過降低eIF-4E的表達(dá)抑制頭頸部惡性腫瘤細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞等多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲［11-13］。欖香烯是在中藥姜科植物溫莪術(shù)的揮發(fā)油中提取的有效成分，是由α-欖香烯、β-欖香烯、δ-欖香烯和γ-欖香烯組成的復(fù)合物，是臨床上一種被廣泛應(yīng)用并取得了治療效果的廣譜抗腫瘤藥物，β-欖香烯通過阻滯細(xì)胞周期和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來實(shí)現(xiàn)其在甲狀腺癌中的抗腫瘤效果［14］，在臨床上其不僅具有較強(qiáng)的抗腫瘤作用，而且可逆轉(zhuǎn)化療產(chǎn)生的多藥耐藥性［15］。目前關(guān)于eIF-4E基因在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)及其與欖香烯聯(lián)合順鉑治療非小細(xì)胞肺癌的效果與預(yù)后關(guān)系的研究甚少，明確eIF-4E基因在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)及其與欖香烯聯(lián)合順鉑治療非小細(xì)胞肺癌的效果與預(yù)后關(guān)系可為非小細(xì)胞肺癌的治療提供依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示，eIF-4E基因在非小細(xì)胞肺癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，提示eIF-4E基因在非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能起著重要的作用。eIF-4E的表達(dá)與患者的性別、病理類型和分化程度無關(guān)。本研究結(jié)果亦發(fā)現(xiàn)，年齡較大以及分化等級(jí)較高的非小細(xì)胞肺癌患者的eIF-4E陽(yáng)性表達(dá)水平明顯增高，提示非小細(xì)胞肺癌患者的eIF-4E基因表達(dá)與其年齡和腫瘤分化程度密切相關(guān)。欖香烯順鉑聯(lián)合化療后eIF-4E低表達(dá)患者的DFS和OS均明顯延長(zhǎng)。eIF-4E低表達(dá)患者欖香烯順鉑聯(lián)合化療效果較eIF-4E高表達(dá)患者明顯提高，提示eIF-4E低表達(dá)患者對(duì)化療更加敏感，因此eIF-4E的低表達(dá)是影響非小細(xì)胞肺癌化療效果的重要因素，eIF-4E基因的高表達(dá)可能成為非小細(xì)胞肺癌治療效果及預(yù)后不良的預(yù)測(cè)因子。欖香烯聯(lián)合順鉑化療可能通過組織有活性的eIF-4E基因的低表達(dá)抑制細(xì)胞的增長(zhǎng)，導(dǎo)致致癌細(xì)胞的自我繁殖受阻，從而控制癌細(xì)胞進(jìn)展及擴(kuò)展eIF-4E復(fù)合物的形成，起到抑制腫瘤形成、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的目的。eIF-4E基因表達(dá)在肺癌治療效果和預(yù)后中的作用可從分子學(xué)角度找到肺癌診斷和預(yù)后的分子指標(biāo)。

綜上所述，eIF-4E基因在非小細(xì)胞肺癌組織存在過表達(dá)。欖香烯聯(lián)合順鉑化療后eIF-4E低表達(dá)患者的DFS和OS均明顯延長(zhǎng)，因此eIF-4E基因的高表達(dá)可能成為非小細(xì)胞肺癌治療效果及預(yù)后不良的預(yù)測(cè)因子。

［1］張?zhí)m蘭.經(jīng)纖維支氣管鏡冷凍治療中、晚期肺癌致氣道狹窄的護(hù)理［J］.護(hù)士進(jìn)修雜志，2011，26（19）：1824-1825.

［2］趙萬，胡鈴敏，王鋮，等.XRCC1、PARP1和APE1多態(tài)性與晚期非小細(xì)胞肺癌鉑類藥物化療敏感性的關(guān)系［J］.南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2011，31（7）：1021-1026.

［3］孫陽(yáng)陽(yáng)，曹友德，劉浩，等.shRNA沉默eIF-4E基因?qū)θ橄侔㎝DA-MB-231細(xì)胞VEGF-C表達(dá)的影響［J］.中國(guó)腫瘤臨床，2011，38（4）：200-203.

［4］蘇彤，趙立軍，常文軍，等.ERCC1、XPD和BRCA1基因多態(tài)與晚期非小細(xì)胞肺癌患者鉑類藥物化療效果的相關(guān)性［J］.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，31（2）：117-122.

［5］趙美玲，楊海虹.Ⅱb/Ⅲa期非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤RRM1蛋白的表達(dá)意義［J］.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，37（8）：698-702.

［6］Mathieu KB，Ali H，F(xiàn)ox PS，et al.Radiation dose reduction forCT lung cancerscreeningusing ASIR and MBIR：a phantom study［J］.JAppl Clin Med Phys，2014，15（2）：4515.

［7］YaoCC，Tu YR，Jiang J，etal.β-elemene reverses thedrug resistance of lung cancerA549/DDPcellsvia themitochondrial apoptosis pathway［J］.Oncol Rep，2014，31（5）：2131-2138.

［8］Martineau Y，Azar R，Müller D，et al.Pancreatic tumours escape from translational control through 4E-BP1 loss［J］. Oncogene，2014，33（11）：2131-2138.

［9］胡愛俠，孫淼淼，陳奎生，等.乳腺癌組織中mTOR、eIF-4E、4EBPS蛋白的表達(dá)及意義［J］.中國(guó)婦幼保健，2012，27（31）：4976-4979.

［10］王曉琳.eIF-4E與腫瘤［J］.中國(guó)腫瘤生物治療雜志，2010，17（4）：473-477.

［11］Zhao Y，Pang TY，Wang Y，etal.LMP1 stimulates the transcription of eIF-4E to promote the proliferation，migration and invasion of human nasopharyngeal carcinoma［J］. The FEBSJournal，2014，281（13）：3004-3018.

［12］Ma J，Han LZ，Liang H，et al.Celastrol inhibits the HIF-1αpathway by inhibition of mTOR/p70S6K/eIF-4Eand ERK1/2 phosphorylation in human hepatoma cells［J］. Oncology Reports，2014，32（1）：235-242.

［13］Zhou S，Wang GP，Liu C，etal.Eukaryotic initiation factor 4E（eIF-4E）andangiogenesis：prognosticmarkers forbreast cancer［J］.BMC Cancer，2012，6（3）：231-232.

［14］紀(jì)春梅，甄永占，范曉禹，等.賴氨大黃酸與順鉑聯(lián)合對(duì)人肺癌A549細(xì)胞系增殖和凋亡的影響［J］.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2014，34（2）：155-159.

［15］周蕾.欖香烯聯(lián)合紫杉醇脂質(zhì)體加順鉑化療治療非小細(xì)胞肺癌的療效分析［J］.中國(guó)腫瘤臨床，2010，37（7）：411-412.

Expression of eIF-4E in non-small cell lung cancer and its correlation w ith prognosis

WANG Binliang LIXiaobo KONG Yiming ZHANG Rongying
Department of Respiratory Medicine,the Affiliated Huangyan Hospital ofWenzhou Medical University the First People's Hospital of Taizhou City,Zhejiang Province,Taizhou 318020,China

ObjectiveTo investigate eIF-4E expression in patientswith non-small cell lung cancer(NSCLC),and its correlation with prognosis.M ethodsTumor tissueswere collected from 60 NSCLC patients who underwent surgical resection from January 2009 to December 2010 in the Affiliated Huangyan Hospital ofWenzhou Medical University,and 30 adjacent normal tissues sampleswere also collected.The expression level of eIF-4E in NSCLC tissues and adjacent normal tissuesweremeasured by immunohistochemicalmethod.All the NSCLC patients after resection were subject to treatmentwith elemene plus cisplatin formore than 2 weeks.A systematic follow-up evaluation was also performed to investigate the correlation of eIF-4E expression levelwith disease-free survival(DFS)and overall survival(OS).ResultsThe expression rate of eIF-4E in the tumor tissues(80.00%)was significantly higher than that in adjacent normal tissues(33.33%),the difference was statistically significant(P＜0.01).The eIF-4E high expression rate of the patient with age≥60 years and clinical stage ofⅢ-Ⅳwas higher than whose age＜60 years and clinical stage ofⅠ-Ⅱ,the differences were statistically significant(P＜0.05).The DFS and OS values of patients with low eIF-4E expression levelwere significantly larger than those of patientswith high eIF-4E expression level,the differenceswere statistically significant(P＜0.05).ConclusioneIF-4E is highly expressed in NSCLC tissues;the DFS and OS values of patients with low eIF-4E expression level are significantly larger.High eIF-4E expression levelmay be an independent predictor of poor NSCLC prognosis.

eIF-4E gene;Expression;NSCLC;Prognosis

R734 [

]A [

]1673-7210（2015）01（a）-0012-04

2014-07-11本文編輯：任念）

浙江省臺(tái)州市黃巖區(qū)科技局基金資助項(xiàng)目（編號(hào)2012038）。