朱　珠，袁功盛，許利榮，陸　超，李曉波，孫　寧，錢睿哲(復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理與病理生理學(xué)系，上海200433)

生物鐘基因Clock通過調(diào)節(jié)前脂肪細(xì)胞增殖抑制脂肪形成的作用及機(jī)制研究

朱珠，袁功盛，許利榮，陸超，李曉波，孫寧，錢睿哲△
(復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理與病理生理學(xué)系，上海200433)

目的:探討Clock蛋白通過對前脂肪細(xì)胞3T3-L1增殖的調(diào)節(jié)來促進(jìn)細(xì)胞成脂的作用和機(jī)制。方法:利用RNAi或Clock的高表達(dá)病毒載體，分別在3T3-L1中低表達(dá)或高表達(dá)Clock基因。CCK-8檢測細(xì)胞增殖，利用RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測相關(guān)細(xì)胞周期蛋白和Clock蛋白的表達(dá)情況。利用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)檢測Clock蛋白對Wnt信號通路關(guān)鍵因子的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用。結(jié)果: Clock蛋白可以促進(jìn)3T3-L1細(xì)胞的增殖;同時(shí)在Clock基因低表達(dá)的3T3-L1細(xì)胞和ClockΔ19小鼠脂肪組織中，促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)行的關(guān)鍵調(diào)控因子細(xì)胞周期蛋白D1、c-Myc和增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)受抑制。低表達(dá)Clock基因的3T3-L1細(xì)胞中，β-連環(huán)蛋白(β-catenin)表達(dá)量降低; ChIP結(jié)果發(fā)現(xiàn)Clock蛋白可與β-catenin、Dvl2 (dishevelled 2)和c-Myc上游啟動子結(jié)合，調(diào)控其轉(zhuǎn)錄激活，Wnt信號通路抑制劑可以抑制Clock蛋白促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用。結(jié)論: Clock蛋白可以通過調(diào)控Wnt信號通路來促進(jìn)前脂肪細(xì)胞增殖，并進(jìn)一步抑制脂肪分化程序的啟動，抑制細(xì)胞成脂。

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