潘文軍，范文靜，韓　單，李　維，朱宇凝，姜志勝，屈順林△(南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，湖南衡陽400;湖南省職業(yè)病防治院，湖南長沙40007;南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院，湖南衡陽400)

胞紅蛋白對巨噬細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用*

潘文軍1，2，范文靜1，3，韓單1，李維1，朱宇凝1，姜志勝1，屈順林1△
(1南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，湖南衡陽421001;2湖南省職業(yè)病防治院，湖南長沙410007;3南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院，湖南衡陽421001)

目的:本文探討巨噬細(xì)胞氧化應(yīng)激過程中胞紅蛋白(CYGB)表達(dá)模式;研究CYGB在巨噬細(xì)胞氧化應(yīng)激過程中的作用。方法: (1) Western blot檢測RAW264. 7細(xì)胞在H2O2刺激不同時間CYGB的蛋白表達(dá)水平;檢測RAW264. 7細(xì)胞在不同濃度H2O2刺激12 h時CYGB蛋白的表達(dá)水平。(2)構(gòu)建CYGB過表達(dá)/低表達(dá)巨噬細(xì)胞模型，將RAW264. 7細(xì)胞分為4組:對照組、0. 5 mmol/L H2O2處理組、0. 5 mmol/L H2O2+ CYGB過表達(dá)組及0. 5 mmol/L H2O2+ CYGB低表達(dá)組。12 h后，檢測CYGB蛋白水平、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脫氫酶(LDH)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶(SOD) ;熒光定量PCR檢測CYGB和NF-κB在細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果: (1) Western blot結(jié)果顯示: H2O2處理6、12和24 h組CYGB表達(dá)水平高于對照組，并且在12 h組CYGB表達(dá)水平最高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0. 05)。0. 25 mmol/L H2O2、0. 5 mmol/L H2O2和1 mmol/H2O2處理巨噬細(xì)胞12 h后CYGB表達(dá)水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0. 05)。(2) Western blot結(jié)果顯示: 0. 5 mmol/L H2O2處理組、0. 5 mmol/L H2O2+ CYGB過表達(dá)組及0. 5 mmol/L H2O2+ CYGB低表達(dá)組CYGB蛋白表達(dá)水平均高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0. 05)。0. 5 mmol/L H2O2+ CYGB過表達(dá)組的CYGB表達(dá)最高(P＜0. 05)，0. 5 mmol/L H2O2+ CYGB低表達(dá)組的CYGB表達(dá)較0. 5 mmol/L H2O2處理組低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0. 05)。酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)和ROS檢測結(jié)果顯示:與0. 5 mmol/L H2O2相比，0. 5 mmol/L H2O2+ CYGB過表達(dá)組中GSH-Px、SOD升高，LDH、MDA和ROS下降;與0. 5 mmol/L H2O2組相比，0. 5 mmol/L H2O2+ CYGB低表達(dá)組中GSH-Px和SOD下降，LDH、MDA和ROS升高。熒光定量PCR檢測顯示:與正常對照組比較，H2O2處理組CYGB和NF-κB表達(dá)均上調(diào)(P＜0. 05)。與H2O2對照組比較，CYGB過表達(dá)組CYGB表達(dá)較高，NF-κB表達(dá)較低(P＜0. 05) ; CYGB低表達(dá)組CYGB表達(dá)較低，NF-κB表達(dá)較高(P＜0. 05)。結(jié)論: CYGB在巨噬細(xì)胞中表達(dá)，在H2O2刺激時表達(dá)水平增加; CYGB在巨噬細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷過程中具有細(xì)胞保護(hù)作用。

國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81100212) ;中國博士點(diǎn)基金新教師類聯(lián)合項目(No.20114324120004) ;中國博士后科學(xué)基金資助項目(No.2012M511383) ;湖南省科技廳項目(No.2014FJ3014) ;湖南省教育廳課題(No.11C1094) ;南華大學(xué)高層次人才科研啟動項目(No.2011XQD24)

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