劉燦，寧宜寶，徐鑌蕊

（1.中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京100081；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京100193）

豬繁殖與呼吸綜合征疫苗的研究進(jìn)展

劉燦1，2，寧宜寶1?，徐鑌蕊2?

（1.中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京100081；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京100193）

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的嚴(yán)重危害世界養(yǎng)豬業(yè)的一種傳染病，該病可造成豬的繁殖障礙、呼吸系統(tǒng)病癥與生長(zhǎng)受阻。本文著眼于PRRSV疫苗的免疫原性、保護(hù)效力和安全性，涉及市場(chǎng)上現(xiàn)有的商品化疫苗與已報(bào)道的處于試驗(yàn)階段的相關(guān)疫苗研究成果，以期為PRRSV的防控與疫苗研發(fā)提供有益的參考。

豬繁殖與呼吸綜合征；疫苗；疫病防控

豬繁殖與呼吸綜合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是一種由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的重大動(dòng)物傳染性疾?。?］。從1980年代末在北美被發(fā)現(xiàn)至今，該病在世界范圍內(nèi)的流行與數(shù)次暴發(fā)導(dǎo)致了世界各地養(yǎng)豬業(yè)的巨大經(jīng)濟(jì)損失。PRRSV屬于動(dòng)脈炎病毒科，為有囊膜的單股正鏈RNA病毒，基因組大小約為15 kb，包含至少10個(gè)開放閱讀框（ORF），依據(jù)基因特征分為北美型與歐洲型兩個(gè)亞型，兩型之間的同源性大約為60%［2-4］，并且兩種亞型的PRRSV基因序列的進(jìn)化率的變異率（10-2／位／年）明顯高于其它RNA病毒（10-3～-5／位／年），由此帶來了更為復(fù)雜的疫苗研發(fā)難題［5］。

常用的PRRSV疫苗包含滅活疫苗與弱毒疫苗，滅活疫苗的安全性與弱毒疫苗更為優(yōu)秀的臨床效果是兩者各自的突出優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)滅活疫苗的交叉保護(hù)性差和弱毒疫苗的毒力返強(qiáng)與基因重組風(fēng)險(xiǎn)也制約著世界范圍內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)對(duì)PRRSV的防控與將來的凈化。此外，日趨成為研究熱點(diǎn)的多種基因工程疫苗也逐漸為畜牧獸醫(yī)從業(yè)人員所熟知［6-8］。筆者就目前市場(chǎng)上現(xiàn)有商品化疫苗與國(guó)內(nèi)外疫苗研究進(jìn)展作一綜述。

1 滅活疫苗

PRRSV滅活疫苗具有安全、不返強(qiáng)、不干擾母源抗體和易貯存與運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn)，其缺點(diǎn)則為單次免疫劑量大，需多次免疫且對(duì)異源毒株免疫效果不理想。現(xiàn)有商品化的滅活疫苗在歐洲市場(chǎng)得到了大量應(yīng)用，包括應(yīng)用于母豬與仔豬的德國(guó)勃林格公司的Ingelvac?PRRS（P120株）疫苗、西班牙海博萊公司的Suipravac-PRRS（5710株）疫苗、法國(guó)梅里亞公司的Progressis?疫苗，以及可同時(shí)應(yīng)用于種公豬、母豬與仔豬的捷克Dyntec公司的Suivac PRRS-IN（VD-E1／E2與VD-A1株）疫苗；在美國(guó)市場(chǎng)則僅短暫出現(xiàn)過荷蘭英特威公司的PRRomiSeTM疫苗；亞洲市場(chǎng)的韓國(guó)主要使用其本土企業(yè)生產(chǎn)的SuiShot?PRRS疫苗，中國(guó)常見的PRRSV滅活疫苗除了幾個(gè)歐洲品牌之外，還有山東齊魯生產(chǎn)的PRRSV-SD1滅活疫苗、中牧與廣東永順生產(chǎn)的NVDC-JXA1株滅活疫苗。

Dai等［9］將仙臺(tái)病毒的包膜蛋白（HVJ-E）作為免疫佐劑加入JXA1-R作為毒種產(chǎn)生的滅活疫苗比無佐劑的滅活疫苗對(duì)28日齡仔豬的免疫保護(hù)效果更好：HVJ-E為佐劑的滅活疫苗比無佐劑滅活疫苗誘導(dǎo)了更強(qiáng)的淋巴細(xì)胞增殖效果、γ干擾素與白介素2（IL-2）上調(diào)、白介素10（IL-10）下調(diào)以及更高的抗體水平，攻毒后的臨床觀察表明含HVJ-E佐劑的滅活疫苗能更大程度地減輕仔豬的臨床癥狀。Geldhof等［10］比較了三種歐洲的商品化疫苗和以07V063株、LV株為毒種的兩種自制滅活疫苗對(duì)抗07V063野毒株時(shí)對(duì)仔豬的免疫保護(hù)效果，發(fā)現(xiàn)三種商品化疫苗比兩種對(duì)照組都可將病毒血癥縮短至少1星期，而兩種自制滅活疫苗都沒有影響病毒血癥的持續(xù)時(shí)間。有趣的是：相較于三種商品化的滅活疫苗與弱毒疫苗，兩種自制滅活疫苗誘導(dǎo)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生了針對(duì)07V063的中和抗體。然后，Geldhof等又做了第二個(gè)試驗(yàn)，比較了08V194株、LV株與07V064株為毒種的滅活疫苗與商品化弱毒疫苗Porcilis?PRRS對(duì)抗08V194野毒株的免疫保護(hù)效果，發(fā)現(xiàn)LV株、07V064株為毒種的滅活疫苗對(duì)病毒血癥持續(xù)時(shí)間無明顯影響，針對(duì)08V194株的特異性中和抗體在所有免疫的動(dòng)物體中都有檢測(cè)到，其中弱毒疫苗誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體的速度更快。綜合上述兩個(gè)試驗(yàn)結(jié)果分析，提示當(dāng)田間流行的變異毒株躲避了現(xiàn)有弱毒疫苗提供的免疫之后，同型的滅活疫苗或許能提供一定的保護(hù)。Karniychuk等［11］同樣利用PRRSV-07V063株為毒種制備滅活疫苗，在懷孕母豬孕期的第27天、55天與83天依次進(jìn)行了三次免疫，然后在第90天使用07V063株進(jìn)行攻毒，結(jié)果表明該滅活疫苗不能對(duì)母豬與胎豬提供完全保護(hù)，但能夠輕微地減弱母豬的病毒血癥，其中值得注意的是，它能通過減少PRRSV從子宮內(nèi)膜轉(zhuǎn)移到胎盤的數(shù)量以提高胎豬的成活率。Dwivedi等［12］應(yīng)用可生物降解的納米顆粒聚乳酸-羥基乙酸共聚物（Poly（D，Llactideco-glycolide），PLGA）包裹的VR2332毒株滅活疫苗滴鼻免疫3到4周齡仔豬后的第21天進(jìn)行攻毒，發(fā)現(xiàn)經(jīng)納米顆粒滅活疫苗免疫的仔豬的病毒血癥持續(xù)時(shí)間縮短到兩周，肺臟勻漿中γ干擾素上調(diào)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β下調(diào)，且肺臟勻漿做中和試驗(yàn)的滴度明顯高于對(duì)照組與普通滅活疫苗組，表明納米顆粒PLGA包裹滅活疫苗以滴鼻途徑免疫仔豬可以作為有效的免疫途徑快速清除病毒血癥并對(duì)抗PRRSV感染。

2 弱毒疫苗

目前，PRRSV弱毒疫苗在田間應(yīng)用最為廣泛，相較于滅活疫苗具有免疫力強(qiáng)、抗體產(chǎn)生速度快、可體內(nèi)復(fù)制并保持長(zhǎng)久免疫效力等優(yōu)點(diǎn)。1995年，德國(guó)勃林格公司開發(fā)出首個(gè)商品化的用于3到15周齡豬的北美型PRRSV弱毒疫苗Ingelvac?PRRSV MLV（VR-2332株，2005年進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)），該公司后期又研發(fā)出應(yīng)用于仔豬與育肥豬的北美型PRRSV弱毒疫苗Ingelvac?PRRS ATP（JA-142株）。僅應(yīng)用于歐洲市場(chǎng)的歐洲型PRRSV弱毒疫苗包括美國(guó)默克公司的應(yīng)用于母豬與后備母豬的Porcilis PRRS?（DV株）弱毒疫苗、西班牙海博萊公司的應(yīng)用于仔豬與育肥豬的Amervac-PRRS?（VP046株）弱毒疫苗與西班牙Syva公司的應(yīng)用于各階段豬只的Pyrsvac-183?（All-183株）弱毒疫苗。中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所以本土分離毒株CH-1a株為種毒研制的CH-1R弱毒疫苗于2007年正式投產(chǎn)上市。2008年，中國(guó)動(dòng)物疫控中心、哈爾濱獸醫(yī)研究所與特產(chǎn)研究所分別研制出針對(duì)高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒（HP-PRRSV）的弱毒疫苗JXA1-R株、HUN4-F112株與TJM-F92株，免疫這三種弱毒疫苗的仔豬能很好地抵抗同源與異源毒株的感染［13-15］。2009年，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)與天津瑞普公司共同研發(fā)的R98株弱毒疫苗也被批準(zhǔn)為新獸藥［16］。中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所將HP-PRRSV GD株在體外傳代致弱，獲得GDr180弱毒株在臨床試驗(yàn)中表現(xiàn)出優(yōu)良的免疫效果與安全特性。

Martelli等［17］將Porcilis PRRS?（DV株，歐洲型）弱毒疫苗分別采用肌肉注射與無針頭注射器皮內(nèi)注射的方式免疫了4周齡仔豬，在免疫后第45天將免疫豬與對(duì)照豬一起跟有PRRSV感染史（該養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)流行PRRSV毒株為歐洲型意大利亞群，與弱毒疫苗DV株同源性為84%）的常規(guī)田間飼養(yǎng)的仔豬并圈飼養(yǎng)，觀察發(fā)現(xiàn)免疫仔豬比對(duì)照組仔豬的臨床癥狀減輕了68%～72%，呼吸系統(tǒng)癥狀減輕了72%～80%，臨床保護(hù)效果與顯著升高的細(xì)胞免疫反應(yīng)密切相關(guān)，表明以兩種不同方式注射該疫苗都可有效抵抗同源性為84%的異源毒株的感染。此外試驗(yàn)提示在影響疫苗保護(hù)效果的因素中，疫苗株誘導(dǎo)細(xì)胞免疫的強(qiáng)弱能力比其與田間流行毒株的同源關(guān)系遠(yuǎn)近更重要。Linhares等［18］為了研究弱毒疫苗在田間臨床應(yīng)用時(shí)對(duì)感染／帶毒豬只體內(nèi)PRRSV病毒的清除能力，設(shè)計(jì)試驗(yàn)將2000頭3周齡仔豬等分到兩個(gè)獨(dú)立的豬舍，待仔豬飼養(yǎng)至8周齡時(shí)，從兩個(gè)豬舍中各取100頭進(jìn)行野毒（與北美型MN184毒株同亞群的毒株）接種，接種后第8天與第36天對(duì)攻毒-免疫組使用北美型弱毒疫苗Ingelvac?PRRS ATP進(jìn)行全組的免疫，同時(shí)對(duì)攻毒-對(duì)照組進(jìn)行鹽水注射作為對(duì)照，然后選取多個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)豬只的血液、唾液、扁桃體與豬舍內(nèi)氣溶膠中的PRRSV核酸進(jìn)行了定量PCR檢測(cè)，結(jié)果表明兩組動(dòng)物的病毒血癥與扁桃體帶毒的情況無明顯差異，但值得注意的是，攻毒-免疫組相較攻毒-對(duì)照組顯示出更低的氣溶膠帶毒量與唾液帶毒量。Roca等［19］將3周齡仔豬經(jīng)歐洲型弱毒疫苗Amervac-PRRS?免疫六周后，使用分離自亞洲的北美型毒株HP-PRRS21株進(jìn)行滴鼻接毒，發(fā)現(xiàn)免疫-接毒組較未免疫-接毒組豬只表現(xiàn)出死亡率低（0／8對(duì)2／8）、發(fā)熱程度輕、卡他性肺炎頻率低、增重高（13.4 kg對(duì)6.6 kg）與病毒血癥輕的特點(diǎn)，表明歐洲型弱毒疫苗能對(duì)仔豬提供部分保護(hù)效果對(duì)抗北美型高致病PRRSV。Nan等［20］發(fā)現(xiàn)PRRSVA2MC2株（與VR-2332株及Ingelvac PRRS MLV的堿基同源性為99.8%）接種MARC-145細(xì)胞后會(huì)造成干擾素-α2蛋白的合成，并能提升干擾素刺激基因ISG15與ISG56的轉(zhuǎn)錄水平，然后再將該毒株接種PAM細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)同樣能導(dǎo)致上述兩個(gè)蛋白的上調(diào)，并且有少量細(xì)胞病變（cytopathic effect，CPE）出現(xiàn)。之后，Wang［21］等將A2MC2毒株、弱毒疫苗Ingelvac?PRRSV MLV、VR-2332株（弱毒疫苗的種毒株）及VR-2385株（中等毒力毒株）分別免疫動(dòng)物進(jìn)行了攻毒試驗(yàn)，結(jié)果顯示A2MC2株較MLV株能更早誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生中和抗體，并產(chǎn)生更高的中和抗體水平與γ干擾素水平；此外，該毒株免疫動(dòng)物后可以抵抗同型株或異型株的感染，同時(shí)造成與VR2385株類似的病理?yè)p傷，說明能以此毒株為基礎(chǔ)研發(fā)更好的疫苗。Li等［22］將15頭豬等分為3組，分別接種HP-PRRSV BB0907株、弱毒疫苗Ingelvac?PRRSV MLV與生理鹽水后放入同一豬圈飼養(yǎng)觀察，發(fā)現(xiàn)接觸感染豬在緊急免疫Ingelvac弱毒疫苗后表現(xiàn)出臨床發(fā)病率低、病毒血癥輕、發(fā)熱與肺部損傷輕以及γ干擾素分泌水平更高的特點(diǎn)，由此推測(cè)動(dòng)物接觸感染HP-PRRSV時(shí)，緊急免疫弱毒疫苗可以減輕其感染。Geldhof等［23］為了探明現(xiàn)有商品化弱毒疫苗、滅活疫苗與自家滅活疫苗對(duì)感染PRRSV流行毒株的母豬的免疫效果，從三個(gè)PRRSV病史豬場(chǎng)選取母豬，采用boost免疫策略，分別免疫商品化弱毒疫苗（Porcilis PRRS?與Ingelvac?PRRSV MLV）、滅活疫苗（Progressis?）與自家滅活疫苗（使用3個(gè)豬場(chǎng)的流行毒株07V063株、08V194株與08V204株制備）進(jìn)行促進(jìn)免疫，然后從臨床癥狀、病毒血癥與抗體反應(yīng)幾方面評(píng)價(jià)各自的免疫效果，結(jié)果表明商品化歐洲型弱毒疫苗Porcilis PRRS?與兩種自家滅活疫苗搭配免疫顯示出促進(jìn)免疫的效果，而商品化北美型弱毒疫苗Ingelvac?PRRSV MLV與三種自家滅活疫苗都無促進(jìn)免疫的效果，但是商品化歐洲型滅活疫苗與自家滅活疫苗的促進(jìn)免疫效果很顯著，表明可以將自家滅活疫苗與商品化弱毒疫苗一起免疫以促進(jìn)母豬的體液免疫效果。Wei等［24］為了闡明HP-PRRSV毒株HBR株在體外傳代125代致弱為F125弱毒株的機(jī)理，將HBR株的F5代、F10代與F125代毒株分別接種仔豬進(jìn)行感染試驗(yàn)，同時(shí)將3個(gè)毒株的基因序列進(jìn)行了比對(duì)分析，結(jié)果表明F125代毒株較F5代毒株的毒力明顯致弱，F(xiàn)125代毒株較F5代毒株出現(xiàn)了45處氨基酸突變，非結(jié)構(gòu)蛋白與結(jié)構(gòu)蛋白中分別有33個(gè)與12個(gè)氨基酸發(fā)生了突變，且其中15個(gè)突變出現(xiàn)在F5傳代至F10，剩余30個(gè)突變出現(xiàn)在F10傳代至F125，推測(cè)F10至F125期間的30個(gè)氨基酸突變可能與毒力減弱有關(guān)，且該HBR-F125株可作為弱毒疫苗的參考株。Ni等［25］利用合成致弱病毒工程（Synthetic Attenuated Virus Engineering，SAVE）技術(shù)，使用計(jì)算機(jī)分析后將PRRSV VR2385株的GP5基因逆優(yōu)化為一段保持原有功能的改造基因，然后將合成的基因片段插入感染性克隆載體中，拯救出GP5基因被逆優(yōu)化的病毒SAVE5株，通過動(dòng)物感染試驗(yàn)證明SAVE5株較原毒株VR2385株對(duì)動(dòng)物造成的病毒血癥、臨床病變與肺臟的組織病理學(xué)損傷有明顯減輕，免疫熒光試驗(yàn)、TCID50試驗(yàn)與實(shí)時(shí)定量PCR試驗(yàn)表明SAVE5株的增殖速度要慢于原毒株VR2385株，所以該研究驗(yàn)證了SAVE技術(shù)可用于病毒的快速致弱，且致弱的病毒在體內(nèi)與體外都表現(xiàn)出了被致弱的相關(guān)特征。

嵌合病毒疫苗是弱毒活疫苗中的一種，通常采用已知特性的病毒株（受體株）作為嵌合病毒的骨架結(jié)構(gòu)，然后用具有特異性免疫原性的供體株的基因替換受體株的相關(guān)基因。Ellingson等［26］將弱毒疫苗Ingelvac?PRRSV MLV與田間流行毒株MN184株基因組的不同區(qū)域進(jìn)行置換，獲得了6個(gè)嵌合毒株，通過動(dòng)物試驗(yàn)證明了其中3株可以像傳代致弱的弱毒疫苗一樣減輕動(dòng)物肺臟肉樣病變的程度，同時(shí)表明只有特定區(qū)域置換的嵌合毒株才表現(xiàn)出毒力減弱的特征，并且不能將毒力減弱與病毒的增殖能力減弱簡(jiǎn)單相關(guān)聯(lián)。Ni等［27］通過DNA重組技術(shù)處理多個(gè)不同亞群毒株（FL-12株、JXA1株、NADC20株、S132株、VR2430株、VR2385株與MN184B株）的GP5基因與GP5-M基因，然后將重組的GP5基因與GP5-M基因插入感染性克隆載體獲取嵌合毒株DS722株與DS5M3株，通過動(dòng)物免疫攻毒試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)兩株嵌合病毒都顯示出了毒力被致弱的特征，比如體內(nèi)外的增殖能力減弱、病毒血癥程度減弱與接種動(dòng)物病理變化減輕等，其中GP5-M基因被重組的DS5M3株可以有效對(duì)抗田間流行PRRSV感染。

3 基因工程疫苗

基因工程疫苗是指使用DNA重組生物技術(shù)，把天然的或人工合成的遺傳物質(zhì)定向插入細(xì)菌、酵母菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，使之充分表達(dá)，經(jīng)純化后而制得的疫苗，包括標(biāo)記疫苗、載體疫苗、核酸疫苗與亞單位疫苗等。

標(biāo)記（Differentiating Infected from Vaccinated Animals，DIVA）疫苗是借助基因工程技術(shù)在病毒基因組中引入分子標(biāo)記，以區(qū)別于野毒株的新一代重組活疫苗，使用標(biāo)記疫苗可有效區(qū)分免疫豬與野毒感染豬，對(duì)PRRSV的防控與凈化有著至關(guān)重要的作用。Lima等［28］人工缺失了PRRSV FL12株NSP2基因中的一段B細(xì)胞線性表位基因得到特定基因缺失的FLdNSP2／44株，將FL12株與FLdNSP2／44株通過一系列體內(nèi)外試驗(yàn)證明FLdNSP2／44株仍具有與原代類似的免疫原性、增殖特性與毒力特性，此外，免疫缺失株的仔豬血清被相應(yīng)表位的ELISA檢測(cè)為陽性，表明該缺失株可用于鑒別區(qū)分免疫豬與野毒感染豬，達(dá)到了作為標(biāo)記疫苗的要求。Lin等［29］在PRRSV毒株vAPRRS株的N蛋白中插入了一段標(biāo)記基因獲得了標(biāo)記疫苗株v7APMa株，也可穩(wěn)定用以區(qū)分免疫豬與野毒感染豬。Wang等［30］將HP-PRRSV JX143株體外傳代100次得到弱毒株JXM100株，將強(qiáng)、弱毒株基因序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)弱毒株的nsp2出現(xiàn)連續(xù)的88個(gè)氨基酸缺失以及全基因組中分散的75個(gè)堿基突變，體內(nèi)、體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)可以利用JXM100株的88個(gè)氨基酸缺失這一特征，將其作為標(biāo)記疫苗用以鑒別診斷疫苗免疫豬與野毒自然感染豬。

載體疫苗是將編碼病原體有效免疫原的基因插入載體基因組中，接種后，隨疫苗株在體內(nèi)的增殖，所需的抗原得以大量表達(dá)。桿狀病毒是近年來被廣泛用于高效表達(dá)外源蛋白的載體系統(tǒng)，Wang等［31］、Nam等［32］和Wu等［33］都利用桿狀病毒為載體表達(dá)PRRSV的GP5與M基因，經(jīng)過體內(nèi)外試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)新型疫苗與普通核酸疫苗相比在免疫原性上有較大的提升，刺激機(jī)體產(chǎn)生γ干擾素的能力與疫苗免疫劑量呈正相關(guān)。同樣，以GP5和M基因?yàn)槊庖咴?，Zheng等［34］將牛痘病毒作為載體制備了具有良好體液免疫與細(xì)胞免疫反應(yīng)的新型疫苗。Xu等［35］則成功構(gòu)建了同時(shí)表達(dá)PRRSV-GP5蛋白與豬圓環(huán)病毒2型（porcine circovirus 2，PCV2）Cap蛋白的桿狀病毒。Karuppannan等［36］在普通桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，使用白斑綜合癥病毒迅速早期1號(hào)穿梭啟動(dòng)子，構(gòu)建了表達(dá)PRRSV的ORF2a、ORF3、ORF4與ORF5蛋白的桿狀病毒，其在小鼠體內(nèi)試驗(yàn)中顯示了良好的免疫特性。此外，以PRRSV作為載體表達(dá)其它病原基因的創(chuàng)意也得到了實(shí)踐，童武等［37］以弱毒疫苗HuN4-F112株的感染性分子克隆為平臺(tái)，成功構(gòu)建了表達(dá)豬瘟病毒E2蛋白部分基因的重組毒株。

核酸疫苗是將編碼某種抗原蛋白的外源基因（DNA或RNA）直接導(dǎo)入動(dòng)物體細(xì)胞內(nèi)，并通過宿主細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)合成抗原蛋白，誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生對(duì)該抗原蛋白的免疫應(yīng)答，以達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的。Zhang等［38］將來自BALB／c小鼠的分子佐劑補(bǔ)體蛋白C3d與PRRSV的GP5蛋白串聯(lián)后進(jìn)行真核表達(dá)制備了含多重mC3d-p28基因的核酸疫苗pcDNA3.1-C3d-p28.n-GP5，與單獨(dú)表達(dá)GP5的pcDNA3.1-GP5分別接種小鼠后，發(fā)現(xiàn)ELISA可檢測(cè)的特異性GP5抗體、特異性GP5中和抗體、γ干擾素與白介素4在pcDNA3.1-C3dp28.n-GP5免疫小鼠體內(nèi)都明顯高于pcDNA3.1-GP5免疫小鼠，表明該佐劑蛋白可以有效增強(qiáng)抗原的特異免疫反應(yīng)，具體到本體動(dòng)物豬身上的免疫效果則有待驗(yàn)證。Du等［39］用VAX載體串聯(lián)了PRRSV的GP3、GP5、α干擾素和γ干擾素的基因制備核酸疫苗pVAX-α-γ-GP35，進(jìn)行了短期與長(zhǎng)期兩種免疫再攻毒的動(dòng)物試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)動(dòng)物在免疫后第2天攻毒的情況下，該疫苗與pVAX-α-γ一樣只能提供部分保護(hù)，而當(dāng)動(dòng)物在免疫pVAX-α-γ-GP35后第28天經(jīng)過二免，然后在第56天攻毒的情況下，該疫苗能提供完全的保護(hù)，與免疫不含α／γ干擾素的pVAX-GP35核酸疫苗的動(dòng)物相比，表現(xiàn)為幾乎無臨床癥狀、無肺部損傷與明顯降低的病毒血癥，同時(shí)還有顯著提高的PRRSV特異性抗體反應(yīng)、T細(xì)胞增殖水平、白介素4和γ干擾素的分泌水平，表明該DNA疫苗可以有效對(duì)抗HPPRRSV感染。

亞單位疫苗是指利用微生物的某種表面結(jié)構(gòu)成分（抗原）制成不含有核酸、能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗體的疫苗。Prieto等［40］將大腸桿菌表達(dá)的GP5亞單位疫苗接種仔豬后進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)免疫-接毒組比空白-接毒組表現(xiàn)出更嚴(yán)重的呼吸困難與漸進(jìn)性消瘦等臨床癥狀，表明該亞單位疫苗不僅不能提供免疫保護(hù)，反而促進(jìn)了PRRSV對(duì)仔豬的感染，其具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。Chen等［41］將熱應(yīng)激蛋白gp96的N端氨基酸位點(diǎn)22-370的基因（Gp96N）作為免疫佐劑與PRRSV的多個(gè)B細(xì)胞表位基因串聯(lián)之后制備亞單位疫苗，通過對(duì)小鼠與仔豬的接種試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)Gp96N可有效提高小鼠／仔豬體內(nèi)的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)、小鼠體內(nèi)的γ干擾素水平、仔豬體內(nèi)的α腫瘤壞死因子、γ干擾素及白介素12水平，并且白介素4水平降了一半，白介素10水平降至幾乎檢測(cè)不到，由此表明Gp96N可以有效增強(qiáng)多表位亞單位疫苗的先天性／適應(yīng)性免疫反應(yīng)。Chen等［42］又將gp96蛋白N端氨基酸22-355位點(diǎn)的基因與PRRSV的B細(xì)胞及T細(xì)胞表位基因串聯(lián)后制備亞單位疫苗并免疫仔豬后攻毒（JXwn06株），結(jié)果顯示該亞單位疫苗能明顯減輕仔豬的臨床癥狀。Yang等［43］將PRRSV的ORF1b、ORF7、M與GP5分別融合入以假單胞菌外毒素為基礎(chǔ)的載體中成功制備細(xì)胞毒性T細(xì)胞類型的亞單位疫苗，臨床試驗(yàn)顯示該亞單位疫苗可有效保護(hù)仔豬與母豬對(duì)抗PRRSV感染，減輕母豬的臨床癥狀與病毒血癥。

4 結(jié)語

由于PRRSV的高頻率變異特點(diǎn)以及目前對(duì)其免疫保護(hù)機(jī)制的不了解，給高效可靠的疫苗研發(fā)帶來重重困難，如何克服滅活疫苗的低交叉保護(hù)力，降低甚至消除弱毒疫苗返強(qiáng)與重組風(fēng)險(xiǎn)，以及研發(fā)安全且具有切實(shí)免疫效果的基因工程疫苗，都是亟待解決的問題，隨著國(guó)內(nèi)外學(xué)者持續(xù)升溫的研究關(guān)注，相信在不久的未來能盡早出現(xiàn)有效控制PRRS甚至能用以將其凈化的疫苗。

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（編輯：陳希）

Research Progress of Vaccines against Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome

LIU Can1，2，NING Yi-bao1?，XU Bin-rui2?
（1.China Institute of Veterinary Drug Control，Beijing 100081，China；2.China Agricultural University，Beijing 100193，China）

Porcine reproductive and respiratory syndrome（PRRS）is an infectious disease caused by porcine reproductive and respiratory syndrome virus which cause serious damage to the pig industry，infected pigs specifically revealed swine reproductive disorders，respiratory system disease and weight loss.We focuses on immunogenicity and protective efficacy and safety of the vaccines against PRRS，which involved commercialization of the existing vaccine on the market reported and experimental vaccine related research achievements，so as to offer benefit to the prevention and control of PRRSV and vaccine development.

porcine reproductive and respiratory syndrome；vaccine；disease prevention and control

2014-12-24

A

1002-1280（2015）03-0058-07

S852.65

劉燦，博士，從事獸醫(yī)微生物與獸醫(yī)病理學(xué)研究工作。

寧宜寶，E-mail：ningyibao＠sina.com；徐鑌蕊，E-mail：xubr＠sina.com。