李慧艷葛 鵬周博宇

（1.吉林大學(xué),吉林長春 130012；2.天津藥物研究院新藥評(píng)價(jià)有限公司,天津 300193）

多西環(huán)素治療兔實(shí)驗(yàn)性骨關(guān)節(jié)炎的效果及作用機(jī)制探討

李慧艷1葛 鵬2周博宇2

（1.吉林大學(xué),吉林長春 130012；2.天津藥物研究院新藥評(píng)價(jià)有限公司,天津 300193）

目的:探究兔實(shí)驗(yàn)性骨關(guān)節(jié)炎采用多西環(huán)素的治療效果和作用機(jī)制。方法:在實(shí)驗(yàn)中對(duì)30只家兔的右膝關(guān)節(jié)給予0.3ml1.6%木瓜蛋白酶溶液的注射，建立兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型的建立，所有家兔給予清理霉素的治療，對(duì)照組有15例正常的家兔。結(jié)果:兩個(gè)多西環(huán)素組一氧化氮的釋放量和總一氧化氮合酶活性明顯比模型對(duì)照組低，差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。且兩組多西環(huán)素組的評(píng)分明顯低于模型對(duì)照組，差異顯著（P＜0.05）；模型對(duì)照組的評(píng)分明顯比正常對(duì)照組高，差異顯著（P＜0.05）。結(jié)論:兔骨關(guān)節(jié)炎采用多西環(huán)素的關(guān)節(jié)腔內(nèi)給藥治療，可使癥狀得到明顯緩解，作用機(jī)制和一氧化氮合酶的活性以及軟骨細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-13的表達(dá)有關(guān)系。

兔實(shí)驗(yàn)性骨關(guān)節(jié)炎 多西環(huán)素 作用機(jī)制

骨關(guān)節(jié)炎為局灶關(guān)節(jié)軟骨出現(xiàn)骨丟失、退行性變、關(guān)節(jié)邊緣骨贅為特征的一種慢性關(guān)節(jié)疾病[1]。在研究中發(fā)現(xiàn)骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病是因?yàn)樯?、力學(xué)、酶、化學(xué)等不同因素的發(fā)病機(jī)制造成的，重要特征為進(jìn)行性的軟骨破壞，通過多年的探究，四環(huán)素抗生素得到深入的研究，多西環(huán)素就是半合成四環(huán)素類的抗生素。本文主要對(duì)兔骨關(guān)節(jié)炎給予多西環(huán)素的關(guān)節(jié)內(nèi)治療，觀察治療效果，并探討作用機(jī)制，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料和方法

1.1 建立動(dòng)物模型

共選擇45只健康成年的大耳白兔，雌雄不限，體重為2kg左右，其中隨機(jī)選擇30只兔子在實(shí)驗(yàn)的第一天和第四天在右膝關(guān)節(jié)中注入0.3ml1.6%的木瓜蛋白酶，2周之后會(huì)形成穩(wěn)定骨關(guān)節(jié)炎的模型。

1.2 使用試劑

一氧化氮合酶的試劑盒，生產(chǎn)商為：南京建成生物工程有限公司，木瓜蛋白酶粉劑的生產(chǎn)商為：Merck公司；基質(zhì)金屬蛋白酶-13單抗的生產(chǎn)商為：NeoMarker公司，

1.3 動(dòng)物分組

將30只兔子隨機(jī)分三組，A組在右膝關(guān)節(jié)中，每日注射生理鹽水，劑量為0.3ml；B組給予大劑量的多西環(huán)素，將0.3ml濃度為1.33%多西環(huán)素注射到關(guān)節(jié)中，C組給予小劑量的多西環(huán)素，將0.3ml濃度為0.67%多西環(huán)素注射到關(guān)節(jié)中。另外15只兔子為對(duì)照組，并采取任何干預(yù)措施。

1.4 取材

在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死的過程中，在關(guān)節(jié)腔中注入1ml的三蒸水，用注射器進(jìn)行反復(fù)的抽吸，30秒后將0.5ml吸出，在零下20攝氏度的環(huán)境下進(jìn)行保存。取材前要將脛骨內(nèi)側(cè)的平臺(tái)進(jìn)行暴露，然后給予基本觀察，然后選擇直徑為3mm的圓骨鑿給予脛骨中髁關(guān)節(jié)的定點(diǎn)取材，一直到軟骨的下骨，給予相關(guān)評(píng)分，并截取留下脛骨內(nèi)側(cè)的平臺(tái)軟骨，將其放置在10%中性的甲醛溶液中給予固定，然后給予脫水、脫鈣和石蠟包埋的處理，并垂直骨表面給予5mm的切片，給予免疫組織和病理學(xué)的化學(xué)檢查。

1.5 檢測

將冷凍關(guān)節(jié)液取出，復(fù)溫后根據(jù)說明書進(jìn)行操作，選擇化學(xué)的比色法，在550mm和530mm的波長下進(jìn)行OD值的測定，計(jì)算相應(yīng)一氧化氮的釋放量，以及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶與總一氧化氮合酶的活性。在光鏡下進(jìn)行細(xì)胞數(shù)量、軟骨組織結(jié)構(gòu)、潮線完整性、甲苯胺藍(lán)染色的觀察，給予評(píng)分。并對(duì)其余脛骨內(nèi)側(cè)的軟骨組織給予病例形態(tài)的觀察，將切片放置在10×20光鏡下采取5個(gè)視野，并將視野中細(xì)胞的陽性表達(dá)率進(jìn)行記數(shù)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)本文所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行檢驗(yàn)，所得計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，所得計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 多西環(huán)素對(duì)關(guān)節(jié)液一氧化氮釋放量，總一氧化氮合酶活性的影響

同15只健康兔子進(jìn)行對(duì)比，模型對(duì)照組關(guān)節(jié)液中一氧化氮的釋放量和總一氧化氮合酶活性得到明顯增加，差異較大，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩個(gè)多西環(huán)素組一氧化氮的釋放量和總一氧化氮合酶活性明顯比模型對(duì)照組低，差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 光鏡下軟骨組織的Mankin‘s評(píng)分

正常對(duì)照組的評(píng)分為：（0.0±0.0），基質(zhì)鍵鼠蛋白酶：（0±0）；模型對(duì)照組的評(píng)分為：（6.8±0.5），基質(zhì)鍵鼠蛋白酶：（92±4）；大劑量多西環(huán)素組的評(píng)分為：（3.7±1.1），基質(zhì)鍵鼠蛋白酶：（25±5），小劑量多西環(huán)素組的評(píng)分為：（4.7±1.0），基質(zhì)鍵鼠蛋白酶：（44±4）。兩組多西環(huán)素組的評(píng)分明顯低于模型對(duì)照組，差異顯著（P＜0.05）；模型對(duì)照組的評(píng)分明顯比正常對(duì)照組高，差異顯著（P＜0.05）。

3 討論

骨關(guān)節(jié)炎實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的制作方法為機(jī)械和藥物兩種，藥物方法就主要在關(guān)節(jié)腔中給予木瓜蛋白酶的注射，該模型能夠防止機(jī)械法因手術(shù)因素影響造成的藥物滲漏[2]。通過相關(guān)實(shí)驗(yàn)，促使局部藥物濃度的提高，減緩藥物的不良反應(yīng)。通過實(shí)驗(yàn)得出兩個(gè)多西環(huán)素組一氧化氮的釋放量和總一氧化氮合酶活性明顯比模型對(duì)照組低，差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。且兩組多西環(huán)素組的評(píng)分明顯低于模型對(duì)照組，差異顯著（P＜0.05）；模型對(duì)照組的評(píng)分明顯比正常對(duì)照組高，差異顯著（P＜0.05）。

綜上所述，骨關(guān)節(jié)炎這一疾病給予多西環(huán)素的治療，可明顯緩解骨關(guān)節(jié)炎的軟骨退變，提高治療效果。

[1] 商亮.多西環(huán)素治療兔實(shí)驗(yàn)性骨關(guān)節(jié)炎的療效及其作用機(jī)制研究[D].武漢大學(xué)，2005.

[2] 商亮，陳廖斌，鄭先念，等.多西環(huán)素治療兔實(shí)驗(yàn)性骨關(guān)節(jié)炎的療效及其作用機(jī)制的研究[J]. 中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2004，（11）：1248-1252.