陶元清

(青海省地方病防治研究所，西寧　811602)

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野生白化喜馬拉雅旱獺體內(nèi)寄生蟲檢測與控制

陶元清

(青海省地方病防治研究所，西寧811602)

【摘要】目的調(diào)查白化旱獺重要病原體的自然感染狀況，為建立白化旱獺寄生蟲學(xué)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。 方法對21只野生的白化旱獺和30只正常毛色旱獺采用糞便檢查法和血清學(xué)方法檢測了蠕蟲、弓形體、棘球蚴等體內(nèi)寄生蟲感染情況。 結(jié)果 51只野生白化喜馬拉雅旱獺和正常毛色旱獺檢出蠕蟲1種，弓形體和棘球蚴抗體檢測結(jié)果均為陰性。應(yīng)用阿苯達唑片劑和伊維菌素注射液進行了旱獺體內(nèi)寄生蟲驅(qū)蟲和凈化，效果良好。 結(jié)論 監(jiān)測結(jié)果初步表明白化旱獺寄生蟲學(xué)質(zhì)量符合種群動物的寄生蟲要求。

【關(guān)鍵詞】喜馬拉雅旱獺；白化；蛔蟲；弓形蟲；棘球蚴；控制

喜馬拉雅旱獺(Marmotahimalayana)屬嚙齒目(Rodentia)松鼠科(Sciuridae)旱獺屬(Marmota)的大型地棲性嚙齒動物，為青藏高原特有種。近年來該動物在生物醫(yī)學(xué)研究中應(yīng)用制作人類疾病的動物模型的研究越來越深入[1]。2014年5月在青海海北門源縣發(fā)現(xiàn)了白化旱獺家族，活套法共捕捉21只白化旱獺和30只正常毛色旱獺，作者開始了白化旱獺的實驗動物化研究工作。根據(jù)野生動物實驗動物化的質(zhì)量控制要求[2]，對該地區(qū)的白化和正常毛色旱獺進行了一系列的檢疫、質(zhì)量檢測和控制工作。實驗動物的寄生蟲學(xué)質(zhì)量作為實驗動物質(zhì)量控制的重要內(nèi)容[3]，為建立白化旱獺寄生蟲學(xué)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，作者根據(jù)《實驗動物 寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測》(GB14922.1-2001)、《實驗動物 蠕蟲檢測方法》(GB/T18448.6-2001)、《實驗動物 弓形體檢測方法》(GB/T18448.-2008)規(guī)定，參照家畜寄生蟲檢查和防治方法[4]以及旱獺感染寄生蟲的相關(guān)文獻[5-6]，進行了寄生蟲檢測和控制工作，報道如下。

1材料和方法

1.1研究地點

研究地點位于青海省海北自治州門源縣仙米林區(qū) (東徑102°05′～102°12′,北緯37°03′～37°10′),屬大陸性寒濕、半濕潤氣候帶。海拔2500～3400 m。主要河流是討拉河。年平均氣溫0℃以上,其中七月份最熱,平均氣溫2℃,一月份最冷,平均氣溫在—12.6℃左右,0℃以下有五個月。年降雨量570 mm ,約90% 集中在4～9月份,其中七月份最多,占年降雨量30%左右。夏秋濕潤,平均相對濕度70%以上,冬季較干燥,平均相對濕度為52%。6月中旬至8月中旬為無霜期。該地區(qū)土壤陰坡以山地淋溶褐色土、山地型褐色土及山地碳酸鹽褐色土為主。植被有蘚類、草莓、寥類、蕨類等；陽坡以山地森林草原土、山地草甸草原土和山地典型褐色土為主,植被主要是苔草、寥科類和禾本科植物。

1.2研究對象

本研究所有動物圈套法活體捕自研究地點-青海省海北州門源縣仙米地區(qū)討拉大溝內(nèi)，數(shù)量總計51只，由白化旱獺21只(12雌9雄)和白化旱獺原產(chǎn)地混合居住的正常毛色旱獺30只(14雌16雄)組成，旱獺年齡為1～4周歲。

1.3試驗藥物和試劑

伊維菌素注射液，西鄉(xiāng)長江動物藥品有限責(zé)任公司生產(chǎn)，[批號]獸藥字(2007)270151126，生產(chǎn)批號120301，主要成分為伊維菌素B1(B1a+B1b)；阿苯達唑片劑，寧夏啟元國藥有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字：H64020110，產(chǎn)品批號120829，每片含阿苯達唑0.2 g。

弓形蟲特異性IgM抗體檢測試劑盒為北京貝爾生物工程有限公司生產(chǎn)，批號為20130901；弓形蟲特異性IgG抗體檢測試劑盒為北京貝爾生物工程有限公司生產(chǎn)，批號為20130901；包蟲IgG抗體診斷試劑盒，深圳康百得生物科技有限公司生產(chǎn)，批號為20130501。

酶標(biāo)儀為華東電子集團醫(yī)療裝備有限責(zé)任公司生產(chǎn)，型號為DG5031。

1.4調(diào)查方法

于2014年5月1日至5月27日，在調(diào)查地區(qū)圈套法捕捉白化旱獺21只，正常毛色旱獺30只。對每只旱獺施以氯氨酮麻醉劑量為0.6 mg/kg體重后，采集直腸糞便100 mg；后肢靜脈采集促凝血5 mL分離血清。采用改良加藤法檢測腸道寄生蟲、ELISA法檢測弓形蟲IgM和IgG抗體；參照《包蟲病診斷標(biāo)準(zhǔn)》(WS257-2006)ELISA法檢測包蟲IgG抗體。

1.5驅(qū)蟲試驗方法

捕獲的野生喜馬拉雅旱獺現(xiàn)場麻醉后，每只旱獺后肢皮下按體重0.02 mL/kg注射伊維菌素注射液；動物飼養(yǎng)于飼養(yǎng)籠具中，在24 h內(nèi)，供給混有阿苯達唑片劑的飲水20 mL(阿苯達唑片劑研磨成粉狀按100 mg/100 mL濃度混入飲水)，在動物將水飲完前不另外供給水，確保動物通過飲水?dāng)z入足量的阿苯達唑。然后于第14天、第21天和第35天重復(fù)驅(qū)蟲3次，方法同第一次驅(qū)蟲方法，檢查收集蟲體和蟲卵，分類計數(shù)。同時觀察動物飲食、飲水情況和其它異常行為。在動物捕捉、檢疫隔離、轉(zhuǎn)運、人工飼養(yǎng)等各個環(huán)節(jié)，采取綜合防蟲措施，如消滅設(shè)施周圍環(huán)境的野鼠、昆蟲，特別做好運輸工具、飼養(yǎng)籠具、飼料、飲水和墊料的管理，旱獺和設(shè)備實行全進全出制，避免交叉污染。

1.6數(shù)據(jù)分析

檢測結(jié)果按照毛色分組，確切概率法檢驗法進行獨立樣本的差異性分析。

2檢測結(jié)果和驅(qū)蟲效果

本次研究中，改良加藤法共檢測51只野生喜馬拉雅旱獺(21只白化旱獺，30只正常旱獺)直腸糞便，15只白化旱獺糞便檢出旱獺蛔蟲(A.tarbagan)蟲卵，自然感染率為71.4%(15/21)，平均感染強度為3047±210枚/g；20只正常毛色旱獺檢出旱獺蛔蟲卵，自然感染率為66.7%(20/30)，平均感染強度為2870±170枚/g；確切概率法檢驗兩者的感染率，無顯著性差異；據(jù)文獻報道[7-8]旱獺能被矛形雙腔吸蟲(D.lanceatum)、蘭尼毛首線蟲(T.lani)、瞪羚毛首線蟲(T.gazellae)和蟯蟲(C.schulzi)等感染，本次檢測吸蟲、線蟲和蟯蟲的過程中，均沒有檢出；51只旱獺血清檢查弓形蟲和包蟲病抗體，檢測結(jié)果均為陰性。

在研究期間先后進行了4次驅(qū)蟲，每次驅(qū)蟲前對動物施以麻醉后，活體采集直腸糞便檢測動物腸道寄生蟲蟲體和蟲卵，分類計數(shù)，計算陽性檢出率，并對每次驅(qū)蟲前后的陽性檢出率進行了比較；結(jié)合寄生蟲綜合防治技術(shù)，第35天后，51只旱獺糞便中均未檢出蛔蟲成蟲和蟲卵，動物的健康狀況良好，采食和飲水正常，體征、精神狀態(tài)和行為均正常，表明藥物控制措施得當(dāng)有效。

3討論

本次21只野生白化和30只正常毛色旱獺體內(nèi)寄生蟲檢測，因樣本來源困難，特別是野生白化旱獺數(shù)量稀少，本次檢測沒有采用全身蠕蟲學(xué)剖檢法，糞便檢查法只檢出旱獺蛔蟲1種蠕蟲，感染率為65%以上，感染情況與青海省其它報道一致[8-9]，說明旱獺蛔蟲是引起喜馬拉雅旱獺的主要寄生蟲源疾病之一。白化旱獺在目前尚未掌握旱獺剖腹產(chǎn)等生物凈化技術(shù)的情況下，按照感染蟲種的寄生方式、流行病學(xué)、季節(jié)動態(tài)和生活史等特點，應(yīng)用廣譜、高效、低毒、低殘留的驅(qū)蟲劑阿苯達唑片劑和伊維菌素注射液進行了多次聯(lián)合藥物驅(qū)治、預(yù)防和凈化，同時強化對旱獺環(huán)境和飼養(yǎng)設(shè)備的滅蟲、滅鼠管理，對旱獺蛔蟲控制效果良好。

本次包蟲抗體血清學(xué)檢測陰性，這與趙玉敏和邱加閩等報道的檢測結(jié)果一致[10-11]。旱獺對包蟲病不敏感的機制有待深入探討。同時也提示旱獺可作為抗包蟲病模型動物進行包蟲病相關(guān)研究。

據(jù)報道青海省喜馬拉雅旱獺弓形蟲抗體陽性率為11%以上[12-13]，本次51份旱獺血清樣本采用ELISA法檢測弓形蟲IgM和IgG抗體,結(jié)果均為陰性。本次檢測弓形蟲IgM試劑盒包被物為鼠抗人-IgM(μ鏈)，酶標(biāo)物分別為辣根過氧化物酶標(biāo)記的鼠抗人TOX-抗原；弓形蟲IgG試劑中包被物為純化TOX-抗原，酶標(biāo)物為辣根過氧化物酶標(biāo)記的鼠抗人IgG抗體。不同動物對弓形蟲免疫應(yīng)答機理不同，因此該檢測試劑對喜馬拉雅旱獺弓形蟲抗體檢測的的特異性和敏感性有待驗證。弓形蟲病是嚴(yán)重的人獸共患病，必須高度重視。我們將采用分子生物學(xué)技術(shù)和實驗感染法進一步檢測和排查弓形蟲[14]，保證生物安全和白化旱獺種群的寄生蟲學(xué)質(zhì)量。

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〔修回日期〕2015-03-30

教育與科普

調(diào)查報告

Survey on the internal parasites infection and control technique

in albinismMarmotahimalayana

TAO Yuan-qing

( Qinghai Institute for Endemic Disease Prevention and Control，Xi，ning 811602，China)

【Abstract】ObjectiveTo investigate the internal parasites infection in albino Marmota himalayan，and to provide a basis for seting up the quality standard of Marmota himalayana． Methods 21 wild albinism and 30 wild nomal Marmota himalayana from the same origin were detected by method as intestinal parasites in stool examination and serological testing, toxoplasma gondii and echinococcosis parasite infections of each animal, then detected the internal parasites and eggs under platoscope and microscope. ResultsThe natural infectious rate of the roundworm in wild albinism and nomal Marmota Himalayana were respectively 71.4%(15/21) and 66.7%(20/30), using the exact probability method of inspection, there was no significant difference in the roundworm infection rate between two groups marmota; antibody test results of Serum toxoplasma gondii and Echinoocosis were negative. Application of albendazole and Ivermectin injection drug expelling and purification, effect to be trusted. ConclusionsMonitoring results and the cure method can be used as an albino Himalayan marmot displacement experiment of animal parasite quality monitoring index and purification method．

【Key words】Marmota himalayana；Albinism；Roundworm；Toxoplasma gondii；Echinococcosis；Control

doi:10.3969.j.issn.1671.7856. 2015.005.018

【中圖分類號】R332

【文獻標(biāo)識碼】A

【文章編號】1671-7856(2015) 05-0074-03

[作者簡介]陶元清(1971-)，男，副研究員，學(xué)士。研究方向：實驗動物管理和動物質(zhì)量控制及野生動物實驗動物化。E-mail： tyq001@126.com。

[基金項目]國家自然科學(xué)地區(qū)基金(31160436)。