鄭怡娟 余雪平 蘇智軍 (福建醫(yī)科大學附屬泉州第一醫(yī)院感染科，泉州 362000)

淋巴細胞的活化依賴于雙信號的共同刺激，其中第一信號由抗原特異性受體T 細胞受體(TCR)或B 細胞受體(BCR)與抗原結合產生;第二信號由共刺激分子或共抑制分子介導產生。共刺激分子和共抑制分子統(tǒng)稱為共信號分子，分別行使正向激發(fā)作用和負向調節(jié)功能，兩者發(fā)揮協(xié)同作用，共同維持機體的平衡［1］。共信號分子按照結構可分為兩大家族:一類是免疫球蛋白(Ig)超家族(或稱B7/CD28 超家族)，包括CD28、ICOS、CTLA-4、PD-1 和BTLA(B and T lymphocyte attenuator);一類是腫瘤壞死家族(TNF)/TNF 受體(TNFR)超家族［2］，包括4-1BB、CD27、CD30、HVEM 和OX40。BTLA 是繼PD-1、CTLA-4 后發(fā)現(xiàn)的第三個CD28 家族新成員［3］，其配體并非B7 家族成員，而是TNF 家族的HVEM(Herpesvirus entry mediator)，打破了同種家族受體只與同一家族配體結合的觀點。研究表明，與PD-1、CTLA-4 一樣，BTLA 同樣具有抑制T 細胞反應及細胞因子產生的作用。在對乙肝病毒(HBV)感染的研究中也發(fā)現(xiàn)BTLA 在病毒特異性T細胞上高表達，對T 細胞增殖活性、分泌細胞因子功能等均具有強烈的抑制作用。現(xiàn)就BTLA 及其配體的生物學特性及其在慢性HBV 感染中的作用進行綜述。

1 BTLA 的結構、分布與配體

1.1 BTLA 的生物學特性 BTLA 是2003 年由Watanabe 等［4］在基因篩選的研究中發(fā)現(xiàn)的一個在Th1細胞上表達的具有抑制功能的CD28 家族新成員，即CD272。Hansen 等［5］研究證明，鼠類的BTLA 基因定位于16 號染色體B3-5，其蛋白結構與CTLA-4和PD-1 相似，包括胞外區(qū)域、跨膜區(qū)和1 個胞質區(qū)。而人類的BTLA 基因則位于3 號染色體3q13 上，是一種由289 個氨基酸組成的I 型跨膜糖蛋白，人類與鼠類BTLA 的同源性為48%。BTLA 的胞質區(qū)包含三個高度保守的酪氨酸基序［6］，一個蛋白生長因子受體結合蛋白2(Grb2)潛在結合位點，一個免疫受體酪氨酸抑制基序(ITIM)和一個免疫受體酪氨酸轉換基序(ITSM)。當BTLA 與配體結合磷酸化后，ITIM 序列便可募集酪氨酸磷酸酶SHP-1 和SHP-2，從而介導免疫抑制功能［7］。BTLA 在脾臟、胸腺和淋巴結中大量表達，而在肝、腎、肺、心、腦等器官中表達較少，甚至檢測不到。與CTLA-4、PD-1一樣，BTLA 不僅表達于CD4+T 細胞、B 細胞，還表達于DC、巨噬細胞和NK 細胞等［8，9］。

1.2 BTLA 的配體-HVEM 的生物學特性 BTLA 的配體HVEM 屬于TNFR 表面分子家族，不僅表達于外周血T 細胞和B 細胞(在靜止T 細胞、未成熟B細胞和記憶B 細胞中高表達，在活化的T、B 細胞中表達下調)，而且還廣泛表達于單核細胞、未成熟樹突狀細胞、調節(jié)性T 細胞(Treg)、中性粒細胞以及NK 細胞［10，11］。HVEM 可與TNF 家族成員(LIGHT和LT-α)和Ig 相關膜蛋白家族成員(BTLA、HSVgD)結合而發(fā)揮不同的免疫調節(jié)作用。HVEM 與LIGHT 或LT-α 結合發(fā)揮正向激發(fā)的作用，不僅刺激T 細胞和B 細胞的增殖與活化，而且具有誘導炎癥反應和為T 細胞活化提供第二刺激信號的作用［12］;HVEM 與BTLA 結合則產生負向調節(jié)功能，抑制淋巴細胞的活化與增殖;HVEM 與HSV-gD 的結合可促進HSV 感染靶細胞［13］?？偠灾?，HVEM與不同配體結合后，提供抑制信號或活化信號，雙向調節(jié)宿主免疫功能。

2 BTLA 在免疫細胞中的作用

2.1 BTLA 在T 細胞中的作用

2.1.1 誘導T 淋巴細胞的耐受 早期研究發(fā)現(xiàn)，BTLA 可以作為胸腺陽性選擇的早期標志。BTLA在胸腺內主要表達于發(fā)生陽性選擇的T 細胞中，隨著野生型小鼠體內CD4-CD8-T 細胞向CD4+CD8+T 細胞轉變，BTLA 表達逐漸增高，并持續(xù)表達于CD4/CD8 單陽性T 細胞中［14］。Watanabe 等［15］研究免疫耐受誘導實驗發(fā)現(xiàn)，BTLA 基因敲除(BTLA-/-)小鼠對抗原口服耐受和高劑量雞卵白蛋白(OVA)靜脈注射誘導的免疫耐受具有抵抗性。同年，Watanabe 等［16］研究發(fā)現(xiàn)BTLA-/-小鼠能夠自發(fā)打破免疫耐受，最終導致類似自身免疫肝炎疾病和同時出現(xiàn)炎性細胞浸潤多個器官的結局。Liu等［17］研究發(fā)現(xiàn)，同樣口服抗原無法誘導BTLA-/-小鼠產生免疫耐受，與野生型OT-Ⅱ細胞相比，當用大劑量OVA 刺激時BTLA-/-的OT-Ⅱ細胞誘導產生耐受更具有抵抗性，體外實驗進一步驗證了BTLA在誘導T 細胞外周免疫耐受的過程中起重要作用。

2.1.2 抑制T 淋巴細胞的活化 最初研究表明，BTLA 可能通過與HVEM 胞膜遠側的CRD1 結合，抑制抗原特異性TCR 信號介導的T 細胞增殖以及CD25 的表達，減少IL-2、IL-4、IL-10 的產生，從而介導免疫抑制功能及調節(jié)細胞因子的產生［18］。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，用低劑量抗CD3 作用于CD4+T 細胞時，BTLA 能夠抑制T 細胞增殖，而當高劑量的抗CD3 作用時，BTLA 的抑制效應就消失了［19］。另有研究表明，BTLA 也可通過與Treg 細胞上的HVEM結合來發(fā)揮免疫抑制效應功能［20］。

在某些情況下，BTLA 與配體HVEM 結合后不僅介導免疫抑制功能，還可能向效應T 細胞傳遞正性信號來促進它們的存活［21］。Tarun 等［22］用牛痘病毒感染小鼠的實驗中發(fā)現(xiàn)，在抗病毒過程中CD8+T 細胞的BTLA-HVEM 共信號系統(tǒng)能夠顯著促進抗病毒效應T 細胞的存活及記憶細胞的產生。Suto 等［23］研究BTLA 在Tfh 細胞的作用時發(fā)現(xiàn)，與wild-type(WT)CD4+細胞相比，BTLA-/-CD4+T 細胞中的Tfh 細胞上的IL-21(介導的IgG 的表達)的數(shù)目顯著性增加，提示BTLA 可通過抑制Tfh 細胞中IL-21 的產生來抑制IgG 的表達，在T 細胞依賴性的體液免疫調節(jié)中發(fā)揮重要的作用。

2.2 BTLA 在B 細胞中的作用 目前關于BTLA 功能的研究主要集中在其對T 細胞的免疫抑制作用，而BTLA 對B 細胞的作用機制研究較少，故人們對BTLA 在B 細胞中的作用知之甚少。最近Marie-Laure 等［24］認為，BTLA 與HVEM 介導的信號途徑可抑制CG 二核苷酸(CPG)介導B 細胞的功能(包括增殖、細胞因子的產生和上調協(xié)同刺激分子)，而對BTLA 信號途徑封閉后可增強其增殖活性及細胞因子的產生，但BTLA 并不影響IL-8H 和MIP1β 的表達，表明BTLA 只是部分抑制B 細胞的功能。

Vendel 等［25］用絕對量化質譜分析法定量測量磷酸化蛋白酪氨酸激酶Syk，驗證了BTLA 與HVEM結合后能抑制B 細胞增殖，可募集酪氨酸磷酸酶Src 并減弱BCR 下游信號強度，并發(fā)現(xiàn)BCR 信號下游的分子，包括B 細胞連接蛋白(B cell linker protein)、磷脂酶ε2(Phospholipase C-gamma 2)、核轉錄因子-κB(NF-kappaB)等分別出現(xiàn)下調及核移位。以上結果表明BTLA 是BCR 信號通路上的一個抑制性受體，通過作用于BCR 下游的信號分子Syk 以及B 細胞連接蛋白發(fā)揮作用。

2.3 BTLA 在樹突狀細胞(DC)中的作用 最近研究發(fā)現(xiàn)，HVEM-BTLA 信號在維持DC 的內環(huán)境穩(wěn)態(tài)方面也發(fā)揮重要作用。Kirsten 等［26］研究發(fā)現(xiàn)，HVEM-BTLA 信號可反饋調節(jié)淋巴毒素(LT)受體信號以維持DC 內環(huán)境的穩(wěn)定。當用受體激動劑強力激活LT-βR 可驅使CD8α-DC 的擴增，但此時嚴格受到HVEM-BTLA 信號的調節(jié)，表明HVEM-BTLA信號通路可為DC 穩(wěn)態(tài)的維持提供一個抑制性信號，并且可以上調DC 中B7-1 的表達。研究者發(fā)現(xiàn)BTLA 修飾的DC 可以對大鼠移植肝臟起到免疫保護作用，經(jīng)BTLA 修飾的供體DC 細胞遷移到受體組織內，能夠抑制肝移植急性排斥反應，并延長移植肝和受體大鼠存活時間［27］。

3 BTLA 在慢性HBV 感染中的作用

近年來，BTLA-HBVM 信號通路在自身免疫性疾病、腫瘤的發(fā)展、移植排斥和病毒感染等疾病中發(fā)揮重要的作用［28-32］。但BTLA 在慢性病毒感染性疾病，尤其是慢性HBV 感染中的研究目前仍較少。慢性HBV 感染是一個世界性的公共問題，我國HBV感染者眾多，且大多數(shù)為慢性感染，并最終可發(fā)展為肝衰竭(LF)、肝硬化(LC)和原發(fā)性肝癌(HCC)。目前認為T 淋巴細胞在抵御HBV 入侵及清除HBV感染中發(fā)揮著重要的作用。但HBV 入侵會引起T淋巴細胞功能缺陷及效應細胞數(shù)量減少，即T 淋巴細胞功能耗竭，導致HBV 持續(xù)感染。目前T 淋巴細胞耗竭機制仍不十分清楚，但已有的研究表明，機體內在的抑制性微環(huán)境在T 淋巴細胞的功能耗竭中扮演著重要的角色，其中負性共刺激分子起了舉足輕重的作用。在慢性病毒感染動物的實驗模型中表明，PD-1 的表達上調可作為T 淋巴細胞耗竭的重要標志［33］，而BTLA 在T 淋巴細胞功能耗竭中的作用及其在HBV 慢性感染中的作用目前仍鮮有報道。

最近研究發(fā)現(xiàn)，BTLA 與PD-1 共表達于慢性乙型肝炎(CHB)患者的肝組織T 淋巴細胞中，并顯著抑制T 淋巴細胞功能，而對BTLA 信號途徑封閉后可增強外周血單個核細胞(PBMC)和肝組織內T 淋巴細胞的增殖及細胞因子的分泌，使耗竭的T 淋巴細胞功能得到部分恢復［34］。另有研究表明，在HBV 感染病程進展的不同階段(CHB、LC、HCC)，CD28、ICOS、LIGHT 的表達沒有顯著性的差別，而BTLA 和PD-1 在LC 和HCC 患者中的表達顯著高于CHB 患者，表明BTLA 在在CHB 疾病進展中發(fā)揮重要的作用，為預防和治療CHB 疾病進展提供新的方向和靶點，但其具體作用機制尚須進一步探索［35］。

通過流式細胞術分析健康者、乙肝后肝硬化(HBV-LC)及HCC 患者外周血中BTLA 的表達，俞海蛟等［36］研究發(fā)現(xiàn)BTLA 在HCC 組中高表達，并與CD4+CD25+T 細胞呈正相關，提示BTLA 可能通過CD4+CD25+T 細胞的協(xié)同作用，抑制T 細胞的增殖，進而參與腫瘤免疫逃逸。通過藥物消除BTLA的活性，抑制T 細胞的免疫功能，從而“喚醒”機體免疫系統(tǒng)對腫瘤的識別，進而清除腫瘤細胞，這可能成為一種新的治療腫瘤的免疫方法。

LF 是慢性HBV 感染的不良結局，HBV 相關慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)是在急性肝衰竭中發(fā)生率、死亡率最高的疾病，所以確定更多的診斷指標對于早期診斷該病是很有必要的。Xu 等［37］通過免疫組織化學的方法分析了HBV-ACLF 患者、CHB 患者及健康者肝組織中的BTLA 的表達，發(fā)現(xiàn)BTLA 在CHB 及健康者的肝組織中未測及，而在HBV-ACLF患者的肝組織纖維白細胞素(FGL2)和纖維蛋白中大量表達與沉積;此外HBV-ACLF 患者的肝組織中可見大量CD68+細胞浸潤，而這些細胞高表達BTLA。以上結果表明BTLA 有望成為診斷HBV-ACLF的新標記物，也將為HBV-ACLF 的免疫治療帶來新的策略。

4 結語

隨著對BTLA-HVEM 信號通路研究的不斷深入，BTLA 的免疫應答作用及調控機制將日益明朗。目前大量動物實驗模型表明，BTLA 在自身免疫性疾病、腫瘤、移植、感染等疾病中發(fā)揮重要的免疫調節(jié)作用，為預防和治療疾病提供新的方法和靶點。但目前為止，BTLA 是否像CTLA-4、PD-1 一樣，參與了T 淋巴細胞功能耗竭及調節(jié)慢性HBV 感染所引發(fā)的一系列疾病還知之甚少，但可以預見以BTLA為靶點的研究將在慢性HBV 感染的免疫機制、診斷及治療方面引發(fā)一場新的革命。

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