一項動物實驗工作能否達到比較確實可靠的結(jié)論,在于實驗前的周密考慮和擬訂出盡可能詳盡、客觀和符合實驗要求的動物實驗設(shè)計。2014年,長沙市為研究市面上不同口蹄疫疫苗對豬的保護效果及生長豬接種疫苗后免疫抗體消長過程,進行了疫苗免疫效果比較實驗。在實驗過程中,本人深感動物實驗設(shè)計至關(guān)重要,現(xiàn)就幾點粗略看法,與大家共同探討。
1 動物實驗場所的選擇方面
同一來源的動物群,其實驗結(jié)果的可比較性較為可靠。因此,盡可能選擇同一養(yǎng)殖場同欄舍待產(chǎn)母豬成為實驗考慮因素之一。在動物實驗場內(nèi),制定動物實驗的日程表,注明實驗步驟、時間、樣本采集情況、觀察數(shù)據(jù)等內(nèi)容,嚴格按照技術(shù)流程操作,確保實驗動物的安全性,避免動物的人為性損失,非常重要。同時,動物實驗場所實驗人員的責任心和專業(yè)技術(shù)能力的選擇也是確定動物實驗場所必須考慮因素之一。
2 動物實驗疫苗的選定方面
口蹄疫病毒有7個血清型,其中O型對畜牧業(yè)影響最為嚴重。目前,最有效的預(yù)防措施就是對動物進行疫苗接種,我國實行強制免疫政策,受到各級政府高度重視。本實驗根據(jù)實驗?zāi)康倪x定政府發(fā)放疫苗和市場銷售疫苗8種類型疫苗,全面覆蓋當前養(yǎng)殖業(yè)市面上口蹄疫常見疫苗,具有現(xiàn)實意義。
3 動物實驗診斷試劑盒的選擇方面
防治口蹄疫的關(guān)鍵是做出及時、準確的診斷,目前用于口蹄疫診斷的血清學技術(shù)有補體結(jié)合試驗(CFT)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、病毒中和試驗(VNT)、間接血凝試驗(IHA)等,其中ELISA由于具有特異性強、敏感度高、操作簡便、實驗快速、可靠性好等優(yōu)點,成為國際上檢測口蹄疫的最常用方法之一。ELISA又包括液相阻斷ELISA、間接ELISA、固相競爭ELISA、間接夾心ELISA、單克隆抗體ELISA、PCR-ELISA、Dot-ELISA等。液相阻斷ELISA由于主要應(yīng)用于檢測免疫抗體,評價口蹄疫疫苗免疫效力而適用于本次實驗。
4 動物實驗時間的設(shè)定方面
動物實驗設(shè)計時,必須充分預(yù)計母豬生產(chǎn)時間,必須充分考慮生長豬免疫抗體消亡波動,必須充分留出生長豬實驗間隔時間,充分估計到動物不可預(yù)料的死亡或是自然死亡可能給實驗帶來的影響。
5 動物免疫程序的制定方面
動物實驗設(shè)計時,雖然疫苗生產(chǎn)廠家在使用說明書中提供一個參考免疫程序,但由于各地疫病流行特點、飼養(yǎng)管理、母源抗體干擾以及疫苗性質(zhì)、類型和免疫途徑等各方面因素影響,目前還沒有一個免疫程序可通用。因此,有必要根據(jù)本地的實際情況,參考本地區(qū)疫病流行特點和免疫監(jiān)測結(jié)果,制定合適的動物免疫程序來進行實驗。
6 實驗動物的選擇方面
動物實驗設(shè)計時,實驗動物選擇應(yīng)充分考慮母源抗體的影響,在實驗進行前對待產(chǎn)母豬進行采血檢測,選取口蹄疫母源抗體水平基本一致的母豬所產(chǎn)臨床健康、個體差異不明顯仔豬進行實驗,確保實驗的一致性。同時,設(shè)置實驗動物對照組,“對照”是生物學實驗中最重要的概念之一,任何沒有對照組的實驗,其結(jié)果一般說都是不可靠的。對照組設(shè)置不適當?shù)膶嶒?,同樣也是不可靠的?/p>
7 動物實驗的評價方面
7.1 實驗全過程的觀察
存活率即是動物實驗全程觀察最直觀的體現(xiàn)。動物疫苗實驗主要目的是驗證疫苗效果,確保動物健康。如果不同動物疫苗之間存活率差異顯著,則說明不同動物疫苗之間免疫效果不同。
7.2 實驗動物形態(tài)學上觀察
動物醫(yī)學研究中,臨床觀察到的數(shù)據(jù)是最重要的第一手資料。在實驗過程中,動物的飼喂情況、運動方式、健康狀況、數(shù)量、個體大小、免疫副反應(yīng)狀況等信息必須記錄在案。同時,根據(jù)接種后不同臨床表現(xiàn),給予無、輕微、中度、中度、死亡五種免疫副反應(yīng)判定標準,便于直觀表述動物疫苗免疫的臨床狀況。
7.3 動物疫苗免疫后抗體水平比較