李雁萍

(山西省畜牧獸醫(yī)學(xué)校,山西太原 030024)

雞新城疫免疫抗體的實驗室檢測

李雁萍

(山西省畜牧獸醫(yī)學(xué)校,山西太原 030024)

雛雞體內(nèi)母源抗體水平是不同的，統(tǒng)一接種新城疫免疫疫苗后，對接種疫苗可產(chǎn)生不同程度的干擾因素。尤其雛雞母源抗體水平偏高時，將嚴重干擾免疫接種的抗體效力，使其發(fā)揮不出應(yīng)有的免疫作用，導(dǎo)致整個雞免疫水平參差不齊。本著科學(xué)測定雞新城疫免疫抗體水平的原則，文章經(jīng)試驗測定結(jié)果分析，提出首免日齡應(yīng)綜合考慮，盡量避開雛雞體母源抗體水平的高峰值，但是又不能遲于母源抗體保護的臨界值，最佳時間安排在10日齡左右為最佳。

抗體檢測 免疫 接種

1 前言

免疫接種雞新城疫疫苗，是激發(fā)雞特異抵抗力的有效手段，更是防治雞新城疫的重要措施。但是，考慮到雛雞體內(nèi)不同的母源抗體水平，統(tǒng)一接種新城疫免疫疫苗后，對接種疫苗可產(chǎn)生不同程度的干擾因素。尤其雛雞母源抗體水平偏高時，將嚴重干擾免疫接種的抗體效力，使其發(fā)揮不出應(yīng)有的免疫作用，導(dǎo)致整個雞免疫水平參差不齊。臨床實踐中，不少接種未產(chǎn)生抗體效力的實例，導(dǎo)致雞群感染野毒，誘發(fā)雞新城疫感染病例。為有效發(fā)揮接種疫苗的效力，確保雛鳥獲得高價保護能力，雛雞母源抗體檢測應(yīng)及時進行，并根據(jù)檢測結(jié)果制定合理接種程序。

2 母源抗體概述

新生兒通過母體胎盤、初乳或卵黃等途徑從母體所獲得的特異性抗體稱為母源抗體。獲得母源抗體的新生兒母源抗體在出生后幾天或者相當(dāng)長的時間內(nèi)得到保護，使之免受某些病原體的感染。然而高水平的母源抗體也能與疫苗中的特定抗原發(fā)生中和作用，使得某些疫苗免疫后部分或者完全失效，造成免疫失敗。因此凡是出生后1-10天內(nèi)首免某種疫苗的雛雞均應(yīng)進行母源抗體的檢測，根據(jù)母源抗體的消退規(guī)律確定初免的時間。

3 雞新城疫免疫抗體的實驗室檢測

3.1 試驗材料及方法

取山西本地某孵化場提供的蛋雞用試驗材料，蛋雞要求源自開產(chǎn)90d內(nèi)的種雞群，遴選的種雞群開產(chǎn)前例行有效的免疫接種程序進行多次免疫。接種程序如下：7日首免，用新城疫傳染性氣管炎（H120）二聯(lián)弱毒苗，接種經(jīng)點眼、滴鼻；30日齡二免，用新城疫傳染性氣管炎（H120）二聯(lián)弱毒苗，接種經(jīng)點眼、滴鼻，劑量較首次加倍；60日齡三免，用雞新城疫I 系疫苗，接種經(jīng)肌肉注射；110日齡四免，用雞新城疫滅活油乳苗，接種經(jīng)肌肉注射，劑量每只1ml。同時，配合注射用I 系疫苗，較三次倍量注射；160日齡五免，用新城疫I 系疫苗，接種經(jīng)肌肉注射。自上述雞場自由選擇100只雞，自第一天開始，之后每間隔3d，隨機取5只采血，實驗室情況下進行新城疫母源抗體的檢測，觀察血凝抑制試驗抗體的動態(tài)情況。本次試驗時間，自2014年3月10日至2013年4 月10日為止。

3.2 血凝試驗（HA）

采用 96 孔 V 型反應(yīng)板，測定抗原效價。首先用微量移液器向反應(yīng)板的每孔加生理鹽水 50 μl。用微量移液器吸取待測抗原50 μl于第一孔中并擠壓多次混合，后吸出 50 μl至第二孔，依次倍比稀釋至第 11 孔，棄去 50 μl。微量移液器再吸取 1%紅細胞懸液依次加入各孔，每孔 50 μl。置于微量振蕩器上振蕩 1 min。室溫靜置 30 min后觀察結(jié)果。

對結(jié)果分析，反應(yīng)板經(jīng)45°傾斜，孔底紅細胞順傾斜面流動，呈線性流動為沉淀。由此，可斷定紅細胞未經(jīng)或不完全被病毒凝聚。反應(yīng)板經(jīng)45°傾斜，孔底紅細胞鋪平孔底，未呈線性流動，均勻凝聚成薄層。由此，可斷定紅細胞未完全被病毒凝聚?？乖味燃t細胞凝聚效價的確定，為紅細胞完全凝聚抗原的最高稀釋倍數(shù)。本次試驗測定第八孔紅細胞為完全凝聚，證實此抗原效價在1：256。

3.3 血凝抑制試驗（HI）

用微量移液器先加 50 μl生理鹽水于各孔中。用微量移液器吸取待檢血清 50μl置于第一孔中，然后倍比稀釋至第 11 孔，棄去 50 μl。最后一孔不稀釋，為紅細胞對照。用微量移液器吸取配制好的抗原，每孔 50 μl。置于微量振蕩器上振蕩 1 min，混合均勻，室溫靜置 20 min。用微量移液器吸取 1%雞紅細胞懸液于每孔各加 50 μl。置于微量振蕩器上振蕩 1min，混合均勻。室溫靜置 40 min后觀察結(jié)果。HI 試驗時，50 μl抗原稀釋液內(nèi)需含 4 個凝集單位，則應(yīng)將抗原作 64 倍稀釋。即取 0.1 ml抗原，加入 6.3 ml生理鹽水。

3.4 試驗結(jié)果分析

試驗雞群不同日齡的抗體檢測，經(jīng)結(jié)果分析：雛雞1日齡時，母源抗體水平平均值約在7.8log2；雛雞4日齡時，母源抗體水平開始有所降低。但是，至雛雞7日齡時，雛雞H1母源抗體效價水平開始略有上升，逐漸達到峰值。隨后，隨著雞群日齡的增加，母源抗體水平開始緩慢下降。約至22日齡，雛雞H1母源抗體水平下降低至4.2 log2。約在雛雞28日齡左右，雛雞中母源抗體水平基本消失。

4 討論分析

從雛雞H1母源抗體檢測的動態(tài)變化來看，此批雛雞出殼后的1周，母源抗體效價峰值開始出現(xiàn)。此時的抗體效價，至少比1日齡多出1個倍比滴度。而在雛雞出殼后的數(shù)天，雛雞H1母源抗體才出現(xiàn)峰值。就其原因分析，機體生長吸收卵黃囊的速度增加，機體可獲得免疫球蛋白數(shù)增加，從而導(dǎo)致雛雞體內(nèi)H1抗體效價有所提升。但是，隨后的一段時間，隨雛雞日齡的增加，雛雞體內(nèi)母源抗體效價有下降趨勢?？傮w情況而言，雛雞H1母源抗體水平為上升后下降的趨向，約在雛雞28日齡左右，雛雞中母源抗體水平基本消失。由此，今后新城疫的免疫，首免日齡應(yīng)綜合考慮，盡量避開雛雞體母源抗體水平的高峰值，但是又不能遲于母源抗體保護的臨界值，最佳時間安排在10日齡左右為最佳。

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