薛 丹

（中國(guó)平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院，河南 平頂山 467000）

超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法分析磺芐西林鈉原料中的雜質(zhì)

薛 丹

（中國(guó)平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院，河南 平頂山 467000）

目的 利用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)磺芐西林鈉原料中的雜質(zhì)分析。方法 色譜柱選擇Acqiuty UPLC BEH C18，流動(dòng)相則選擇10 mmol/L乙酸銨溶液-甲醇，采集質(zhì)譜數(shù)據(jù)則利用電噴霧電離源負(fù)離子模式來(lái)完成。結(jié)果 通過(guò)分析得到磺芐西林、磺芐西林雜質(zhì)的色譜圖和液相色譜圖相對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜圖，總結(jié)分析譜圖，對(duì)磺芐西林樣品中的未知雜質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行推測(cè)，分別為磺芐西林噻唑酸和磺芐西林噻唑酸甲酯化產(chǎn)物。結(jié)論 利用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)磺芐西林鈉原料中的雜質(zhì)分析，具有較高的專(zhuān)屬性和靈敏性，而且快速，對(duì)生產(chǎn)磺芐西林鈉和控制其質(zhì)量具有非常重要的作用。

超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法；磺芐西林鈉原料；雜質(zhì)分析

磺芐西林鈉是一種廣譜半合成青霉素，磺芐西林鈉的抗菌譜和羧芐青霉素比較相近，但是與羧芐青霉素相比，磺芐西林鈉的抗葡萄球菌和銅綠假單胞菌的作用更好，臨床中磺芐西林鈉主要用來(lái)對(duì)銅綠假單胞菌導(dǎo)致的感染、敗血癥、呼吸系統(tǒng)感染和泌尿系統(tǒng)感染等進(jìn)行治療。在生產(chǎn)和存儲(chǔ)青霉素類(lèi)抗生素的過(guò)程中，各種雜質(zhì)很容易進(jìn)入其中，根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和要求，如果藥物中的雜質(zhì)含量超過(guò)0.1%，就需要確證其結(jié)構(gòu)[1]。本研究則利用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)磺芐西林鈉原料中的雜質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析，現(xiàn)將具體情況匯報(bào)如下。

1　資料與方法

1.1一般資料：①試藥：分析純選擇鹽酸、氫氧化鈉和乙酸銨；由我國(guó)藥品生物制品鑒定所提高的磺芐西林標(biāo)準(zhǔn)品，批號(hào)為30345-200802；湖南爾康制藥有限公司提供的磺芐西林鈉原料；將重蒸餾水作為試驗(yàn)用水。②儀器：超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)樸分析儀選擇Acquity UPLC PDA檢測(cè)器；Waters公司提供的XEvo G2 QTof MS-MS質(zhì)譜儀。

1.2方法：①色譜條件：色譜柱選擇Acqiuty UPLC BEH C18柱，流動(dòng)相則選擇10 mmol/L乙酸銨溶液-甲醇（90∶10）；流速為0.2 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm；進(jìn)樣量為3 μL；柱溫為30 ℃。②質(zhì)譜條件：質(zhì)量的掃描范圍為m/z50-600；離子化方式為ESI（-）；源溫度為120 ℃；錐孔電壓為30 V；毛細(xì)管電壓為3.5 kV，干燥氣流速為600 L/h，干燥氣溫度為150 ℃。③配制樣品溶液：選擇大約50 mg磺芐西林鈉原料，利用流動(dòng)相將其溶解成5 mg/mL的儲(chǔ)備液。選擇2 mL儲(chǔ)備液，放在10 mL的量瓶中，利用流動(dòng)相對(duì)其進(jìn)行稀釋?zhuān)u勻，將其作為樣品溶液。④配制標(biāo)準(zhǔn)品溶液：選擇大約10 mg磺芐西林標(biāo)準(zhǔn)品，利用流動(dòng)相將其溶解成1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。⑤磺芐西林鈉強(qiáng)力試驗(yàn)：選擇磺芐西林鈉儲(chǔ)備液，分別在堿性、強(qiáng)光照和酸性條件下給予降解實(shí)驗(yàn)。堿降解溶液：選擇大約2 mL儲(chǔ)備液，加入0.5 mL 0.1 mol/L氫氧化鈉溶液，放置在室溫下15 min，之后加入0.1 mol/L鹽酸溶液，中和堿液，加入流動(dòng)相將其稀釋到10 mL。光照降解溶液：選擇大約2 mL儲(chǔ)備液，將其放置在玻璃平皿中，室溫下給予3 h 3000～4000 Lx光照射，之后加入流動(dòng)相將其稀釋到10 mL。酸降解溶液：選擇大約2 mL儲(chǔ)備液，加入0.5 mL 0.1 mol/L鹽酸溶液，放置在室溫下15 min，之后加入0.1 mol/L強(qiáng)氧化鈉溶液，中和酸液，加入流動(dòng)相將其稀釋到10 mL[2]。

2　結(jié) 果

2.1磺芐西林鈉原料中的雜質(zhì)LC分析：通過(guò)分析得到磺芐西林、磺芐西林雜質(zhì)的色譜圖和液相色譜圖相對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜圖，總結(jié)分析譜圖，對(duì)磺芐西林樣品中的未知雜質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行推測(cè)，分別為磺芐西林噻唑酸和磺芐西林噻唑酸甲酯化產(chǎn)物。

2.2磺芐西林鈉強(qiáng)力試驗(yàn)結(jié)果分析：結(jié)合青霉素類(lèi)抗生素藥物的降解反應(yīng)機(jī)制，本研究選擇磺芐西林鈉儲(chǔ)備液，分別在堿性、強(qiáng)光照和酸性條件下給予降解實(shí)驗(yàn)，從而來(lái)分析樣品中相關(guān)物質(zhì)的變化情況。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在酸性和光照環(huán)境下，樣品中的相關(guān)物質(zhì)含量和類(lèi)型并沒(méi)有出現(xiàn)明顯變化。而在堿性環(huán)境下，磺芐西林的主峰降解顯著，經(jīng)過(guò)液相色譜保留時(shí)間和紫外光譜圖對(duì)比分析可知，產(chǎn)生的降解物為磺芐西林鈉原料中的1號(hào)雜質(zhì)和4號(hào)雜質(zhì)。

2.3磺芐西林鈉質(zhì)譜裂解途徑分析：通過(guò)對(duì)磺芐西林鈉的質(zhì)譜裂解途徑進(jìn)行分析，能有效推測(cè)雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)。直接將堿降解溶液和樣品溶液注入到質(zhì)樸檢測(cè)器中，利用多級(jí)質(zhì)譜來(lái)對(duì)磺芐西林鈉酸降解溶液產(chǎn)生的雜質(zhì)在離子模式下的質(zhì)譜裂解途徑進(jìn)行確認(rèn)，歸屬各個(gè)碎片峰。負(fù)離子模式下，磺芐西林產(chǎn)生的碎片離子比正離子模式多，所提高的化合物結(jié)構(gòu)信息也更加豐富，所以在UPLC/MS分析各個(gè)雜質(zhì)時(shí)應(yīng)該選擇負(fù)離子模式。

2.4主要雜質(zhì)結(jié)構(gòu)的UPLC/MS分析：青霉素類(lèi)β-內(nèi)酰胺環(huán)能形成很大的共軛體系，親核性試劑容易攻擊環(huán)內(nèi)的羰基，導(dǎo)致β-內(nèi)酰胺環(huán)被破壞。直接將堿降解溶液注入到質(zhì)樸檢測(cè)器中，分析所產(chǎn)生的雜質(zhì)，對(duì)總離子流圖進(jìn)行分析可知，3.6 min左右的主成分峰基本降解，而在5.1 min左右則出現(xiàn)了一個(gè)很大的雜質(zhì)峰。

2.51號(hào)雜質(zhì)的UPLC/MS分析：利用負(fù)離子模式對(duì)1號(hào)雜質(zhì)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)分子離子峰的質(zhì)荷比為m/z431，相對(duì)分子質(zhì)量推測(cè)為432。根據(jù)磺芐西林鈉在負(fù)離子模式下的質(zhì)譜裂解途徑和1號(hào)雜質(zhì)的二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)，對(duì)1號(hào)雜質(zhì)進(jìn)行推測(cè)可能為β-內(nèi)酰胺環(huán)開(kāi)環(huán)成噻唑酸而形成的雜質(zhì)。

2.64號(hào)雜質(zhì)的UPLC/MS分析：利用負(fù)離子模式對(duì)4號(hào)雜質(zhì)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)分子離子峰的質(zhì)荷比為m/z445，相對(duì)分子質(zhì)量推測(cè)為446。根據(jù)磺芐西林鈉在負(fù)離子模式下的質(zhì)譜裂解途徑和4號(hào)雜質(zhì)的二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)，對(duì)4號(hào)雜質(zhì)進(jìn)行推測(cè)可能為β-內(nèi)酰胺環(huán)破裂形成的噻唑酸，在堿性環(huán)境中，和流動(dòng)相例的甲醇成脂生成的雜質(zhì)。

3　討 論

本研究先利用強(qiáng)力試驗(yàn)來(lái)分析磺芐西林鈉原料中的雜質(zhì)來(lái)源，之后根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)，推測(cè)負(fù)離子模式下雜質(zhì)的質(zhì)譜裂解途徑，同時(shí)對(duì)磺芐西林鈉原理中的2個(gè)雜質(zhì)進(jìn)行初步分離，并鑒定其結(jié)構(gòu)，研究結(jié)果表明，在檢定磺芐西林鈉原料中的雜質(zhì)結(jié)構(gòu)時(shí)，利用UPLCMS/MS法能快速完成。臨床研究表明，親核性試劑很容易攻擊磺芐西林鈉β-內(nèi)酰胺環(huán)4元環(huán)中的酰胺鍵，這一結(jié)果對(duì)于分析探討β-內(nèi)酰胺環(huán)穩(wěn)定性具有非常重要的作用。另外利用多級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜能獲取比較豐富的離子結(jié)構(gòu)信息，從而來(lái)分析藥物的分子結(jié)構(gòu)[3]。

本研究中利用質(zhì)譜儀和超高效液相色譜系統(tǒng)相結(jié)合的方式，能有效縮短分析時(shí)間，而且具有較強(qiáng)的分離能力和靈敏度，能快速鑒定抗生素的雜質(zhì)結(jié)構(gòu)?？傊?，利用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)磺芐西林鈉原料中的雜質(zhì)分析，具有較高的專(zhuān)屬性和靈敏性，而且快速，對(duì)生產(chǎn)磺芐西林鈉和控制其質(zhì)量具有非常重要的作用。

[1] 杜薇,鄒巧根,孫莉莉,等.色譜及其聯(lián)用技術(shù)在藥物雜質(zhì)分析中的應(yīng)用[J].海峽藥學(xué),2013,25(5):1-5.

[2] 帥放文,章家偉,王輝,等.高效液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定注射用磺芐西林鈉中D(-)型磺芐西林鈉的含量[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2013,48 (22):1951-1954.

[3] 陳娟,吳春燕,李莉,等.超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定牛奶中磺胺的殘留量[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘,2014(10):83-84.

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1671-8194（2015）30-0037-02