盧海霞 王鈞 邵文

縮泉丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究分析

盧海霞 王鈞 邵文

目的修訂完善縮泉丸原標(biāo)準(zhǔn)中鑒別及含量測(cè)定方法。方法采用薄層色譜法鑒別益智仁、烏藥及高效液相色譜法測(cè)定烏藥中烏藥醚內(nèi)酯的量。結(jié)果益智仁、烏藥薄層斑點(diǎn)清晰；烏藥醚內(nèi)酯在0.0791~0.6328 μg(r=0.9999)內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好, 平均回收率分別為101.7%(RSD為2.6%)。結(jié)論實(shí)驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確, 可用于本品的質(zhì)量控制。

縮泉丸；薄層色譜；高效液相色譜；烏藥醚內(nèi)酯

縮泉丸處方來(lái)源于《婦人良方》［1］, 由山藥、益智仁、烏藥三味中藥組成。益智仁溫腎納氣；烏藥溫散下焦虛冷,固澀小便；山藥健脾補(bǔ)腎。用于腎虛所致小便頻數(shù), 夜臥遺尿?？s泉丸現(xiàn)代臨床被單獨(dú)或與其他藥物聯(lián)合使用, 治療小兒遺尿、老年尿失禁、夜尿癥、神經(jīng)性尿頻、慢性腎小球腎炎、腎病綜合征、尿道綜合征等［2-4］?，F(xiàn)代研究表明, 縮泉丸能降低D-半乳糖誘導(dǎo)亞急性衰老模型大鼠與尿液生成相關(guān)的水通道蛋白(AQP2)、神經(jīng)內(nèi)分泌激素醛固酮(ALD)和抗利尿激素(ADH)的含量, 升高衰老膀胱膀胱漏尿點(diǎn)壓(BLPP)、腹壓漏尿點(diǎn)壓(ALPP)、最大膀胱排尿壓(MVP)［5］。提高老年大鼠腎上腺系數(shù)及血清中皮質(zhì)醇(Cort)、血清三碘甲狀腺原氨酸(T3)、血清甲狀腺素(T4)含量［6］?？s泉丸原標(biāo)準(zhǔn)中收載了顯微鑒別和理化鑒別。為更好控制產(chǎn)品的質(zhì)量, 以烏藥中烏藥醚內(nèi)酯為指標(biāo)成分, 采用反相高效液相色譜含量測(cè)定烏藥中烏藥醚內(nèi)酯的含量。并對(duì)烏藥、益智仁進(jìn)行了薄層色譜鑒別。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200 高效液相色譜儀, 硅膠G薄層板(青島海洋化工有限公司, G板批號(hào)：20100219);硅膠GF254薄層板(青島海洋化工有限公司, GF254板批號(hào)：20091210)。

1.2 試藥 烏藥醚內(nèi)酯對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,含量測(cè)定用, 批號(hào)：1568-200201)；烏藥對(duì)照藥材(批號(hào)：121096-200803, 供鑒別用)、益智對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所, 批號(hào)：121029-200503, 供鑒別用)；縮泉丸(生產(chǎn)企業(yè)A提供, 批號(hào)：20080701、20080702、20080703；生產(chǎn)企業(yè)B提供, 批號(hào)：0809101、0809102、0809103)

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 烏藥的鑒別 取本品6 g, 研細(xì), 置具塞錐形瓶中, 加石油醚(30~60℃)30 ml, 密塞, 搖勻, 浸泡過(guò)夜, 濾過(guò), 濾液揮發(fā)至約1 ml, 作為供試品溶液。按本品的處方、制法制備缺烏藥的樣品, 同法制備陰性對(duì)照溶液。取烏藥對(duì)照藥材1 g,同法制成對(duì)照藥材溶液［7］。取上述三種溶液各5 μl, 點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上, 以甲苯-乙酸乙酯(15：1) 為展開(kāi)劑, 展開(kāi), 取出, 晾干, 置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上, 顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.1.2 益智仁鑒別 取烏藥鑒別項(xiàng)下的供試品溶液作為供試品溶液。另取益智仁對(duì)照藥材1 g, 同法制成對(duì)照藥材溶液。取上述兩種溶液各5 μl, 分別點(diǎn)于同一用硅膠GF254薄層板上, 以環(huán)己烷-乙酸乙酯(9：1)為展開(kāi)劑［8］, 展開(kāi), 取出, 晾干,置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中, 在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上, 顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.2 含量測(cè)定［9,10］

2.2.1 色譜條件 色譜柱：phenomenex C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(44：56)；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：10 μl；檢測(cè)波長(zhǎng)：235 nm；柱溫30℃。

2.2.2 溶液制備 對(duì)照品溶液取烏藥醚內(nèi)酯對(duì)照品適量,加甲醇制成20 μg/ml的溶液, 即得。

供試品溶液精密稱(chēng)取本品約3 g , 置具塞錐形瓶中, 精密加入甲醇50 ml, 密塞, 稱(chēng)定重量, 超聲處理1 h, 放冷, 再稱(chēng)定重量, 用甲醇補(bǔ)足減失的重量, 搖勻, 濾過(guò), 取續(xù)濾液, 即得。

2.2.3 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 按本品的處方工藝制成缺烏藥陰性樣品, 再按供試品溶液制法制備陰性對(duì)照溶液。精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液, 依法進(jìn)行測(cè)定, 結(jié)果供試品溶液色譜圖中在與對(duì)照品相同保留時(shí)間處有相應(yīng)色譜峰出現(xiàn), 而陰性對(duì)照液色譜圖在與對(duì)照品相同保留時(shí)間處無(wú)色譜峰。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) 取烏藥醚內(nèi)酯對(duì)照品適量, 精密稱(chēng)定, 加甲醇制成20 μg/ml的溶液。分別精密吸取2、4、6、8、10、12、16 μl, 以進(jìn)樣量(μg)、峰面積為橫、縱坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。結(jié)果表明烏藥醚內(nèi)酯在0.0791~0.6328 μg(r=0.9999)內(nèi), 線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 取供試品溶液(批號(hào)0809101), 按擬定的色譜條件, 連續(xù)測(cè)定5次。結(jié)果表明5次測(cè)定的烏藥醚內(nèi)酯峰面積平均值為158.97, RSD為0.86%。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液(批號(hào)0809101),按擬定的色譜條件, 分別于配制后0、4、8、12、16、20、24 h進(jìn)樣測(cè)定每隔一定時(shí)間測(cè)定1次, 結(jié)果烏藥醚內(nèi)酯峰面積的RSD為1.91%(n=7)。供試品溶液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品(批號(hào)：0809101), 按擬定的方法平行測(cè)定6份, 計(jì)算, 結(jié)果6份樣品測(cè)得烏藥醚內(nèi)酯含量的平均值為0.29 mg/g, RSD為1.9%。試驗(yàn)結(jié)果表明, 本法的重現(xiàn)性較好。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量樣品(批號(hào)：0809101,烏藥醚內(nèi)酯含量為0.29 mg/g)適量, 共6份, 精密稱(chēng)定, 具塞錐型瓶中, 每份分別精密加入烏藥醚內(nèi)酯對(duì)照品溶液(0.39522 mg/ml)適量, 依法測(cè)定。測(cè)得烏藥醚內(nèi)酯的平均回收率為101.7%, RSD為2.6% 。結(jié)果表明本法回收率較好, 符合定量分析的要求。

2.2.9 樣品測(cè)定 取5批樣品, 按擬定方法測(cè)定烏藥醚內(nèi)酯含量, 樣品烏藥醚內(nèi)酯含量分別為0.29、0.24、0.25、0.03、0.09 mg/g。

3 小結(jié)

對(duì)含量測(cè)定供試品溶液提取方法分別考察了乙醚回流提取, 甲醇超聲提取和氯仿超聲提取三種方法, 采用高效液相色譜法測(cè)定提取率。

從三種提取方法看乙醚提取雜質(zhì)少, 但回流時(shí)間長(zhǎng), 方法較費(fèi)時(shí)。甲醇超聲提取, 方法簡(jiǎn)單, 樣品也能很好的分離,提取率也高于乙醚提取。氯仿提取樣品成分復(fù)雜, 不好分離。因此, 確定選擇甲醇超聲提取的方法。

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.21.212

2015-07-03］

130033 吉林省藥品檢驗(yàn)所