黃俊波 莊曉波 鄭躍東
(廣東省揭西縣人民醫(yī)院泌尿外科,揭西縣 515400,E-mail:306669335@qq.com)
隨著人口老齡化和居民飲食結(jié)構(gòu)變化,前列腺癌的發(fā)病率和死亡率逐年上升。惡性腫瘤的生物學(xué)特性多變,其生長(zhǎng)和侵襲、轉(zhuǎn)移是一個(gè)多因素、多步驟的復(fù)雜過(guò)程[1]。運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)調(diào)控基因及其表達(dá)的蛋白進(jìn)行檢測(cè),可更好地了解惡性腫瘤的生物學(xué)行為,并有助于尋找治療的新靶點(diǎn)[2]。細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子CD147是新發(fā)現(xiàn)的腫瘤細(xì)胞膜相關(guān)抗原,在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的多個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)扮演著重要角色[3]。但目前CD147在前列腺癌中作用的報(bào)告較少。本研究運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)CD147蛋白在人前列腺癌的表達(dá)情況,旨在探討其在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用,現(xiàn)報(bào)告如下。
1.1 臨床資料 2008年1月至2012年12月我院收治前列腺癌患者56例(前列腺癌組),年齡(58.6±4.2)歲。同期在我院就診良性前列腺增生患者56例(前列腺增生組),年齡(56.9 ±5.4)歲,高分化8 例,中分化16例,低分化36例。兩組均經(jīng)病理確診。排除合并嚴(yán)重臟器損傷者、嚴(yán)重精神性疾病者等。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn),兩組患者或家屬均知情同意。
1.2 主要試劑 CD147單克隆抗體(稀釋濃度1∶50)、鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶試劑盒及二氨基聯(lián)苯胺染色顯色試劑盒均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。
1.3.1 收集臨床資料及標(biāo)本:記錄前列腺癌組患者的詳細(xì)臨床資料,包括年齡、病理分級(jí)、臨床分期、Gleason評(píng)分[4]、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、生存情況、分化程度等。Gleason評(píng)分<5分為分化程度好;Gleason評(píng)分5~7分為分化程度中;Gleason評(píng)分>7分為分化程度差或未分化。記錄前列腺增生組的年齡、病情等。于我院病理科取兩組患者的病灶石蠟標(biāo)本,標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋,制作5 μm連續(xù)切片備用。
1.3.2 免疫組織化學(xué)染色:將組織蠟塊制成厚約5 μm的切片,按照鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶試劑盒說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格操作。使用已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照,磷酸鹽緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。
1.3.3 結(jié)果判讀:光鏡(德國(guó)徠卡公司,DM1000型)下進(jìn)行觀察,陽(yáng)性表達(dá)位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜,出現(xiàn)淺黃色、黃色或棕黃色顆粒時(shí)為陽(yáng)性反應(yīng),出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)的細(xì)胞即為陽(yáng)性細(xì)胞。依據(jù)染色深淺與視野內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)定陽(yáng)性反應(yīng)的強(qiáng)度。觀察時(shí)每張切片選取5個(gè)高倍視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞,按照觀察視野中陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比例進(jìn)行評(píng)分:≤5%時(shí)為0分,5% ~25%為1分,25% ~50%為2分,50% ~75%為3分,>75%為4分。按照染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分:0分 為陰性,1分為弱陽(yáng)性,2分為中等陽(yáng)性,3分為強(qiáng)陽(yáng)性。兩者相乘得分≥3分時(shí)為陽(yáng)性表達(dá),<3分時(shí)為陰性表達(dá)。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn),各病理特征與臨床預(yù)后的關(guān)系采用Cox回歸分析法,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 兩組CD147表達(dá)情況比較 前列腺癌組CD147表達(dá)陽(yáng)性率為100.0%(56/56),明顯高于前列腺增生組的 14.3%(8/56)(χ2=84.000,P <0.001)。
CD147的表達(dá)與Gleason評(píng)分、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有明顯關(guān)系(P<0.05),與患者的年齡和腫瘤分化程度無(wú)關(guān)(P >0.05),見(jiàn)表1。
表1 前列腺癌組患者CD147與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系(n,%)
2.3 前列腺癌患者Cox回歸模型多因素分析 對(duì)56例前列腺癌患者進(jìn)行隨訪發(fā)現(xiàn),1年時(shí)存活51例(91.1%),2年時(shí)存活43例(76.8%)。CD147表達(dá)陽(yáng)性、Gleason評(píng)分高是前列腺癌患者的預(yù)后差的危險(xiǎn)因素(P<0.05),CD147陽(yáng)性、Gleason評(píng)分高的患者,復(fù)發(fā)和死亡的風(fēng)險(xiǎn)大。見(jiàn)表2。
表2 Cox回歸模型多因素分析結(jié)果
目前惡性腫瘤已成為我國(guó)居民首位死亡原因,腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移特性使其成為導(dǎo)致腫瘤患者死亡的主要原因和腫瘤臨床治療的主要困難。目前惡性腫瘤的發(fā)病機(jī)制及生物學(xué)行為成為生命科學(xué)中的研究熱點(diǎn)[5]。
CD147是一種新發(fā)現(xiàn)的腫瘤細(xì)胞膜相關(guān)抗原,廣泛表達(dá)于惡性腫瘤細(xì)胞表面[6]。腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵環(huán)節(jié),涉及細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的降解、腫瘤血管的形成等[7]。在這過(guò)程中,基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)幾乎能降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的所有成分,在腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用[8]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是迄今發(fā)現(xiàn)的最重要的血管生成促進(jìn)因子,已被證實(shí)是腫瘤新生血管生成的主要調(diào)節(jié)因子。VEGF通過(guò)促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂,增加血管通透性等使血管內(nèi)膠質(zhì)外滲,為血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)提供必需的基質(zhì),進(jìn)而促進(jìn)腫瘤血管形成,為腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移提供條件[9]。有研究證明CD147具有刺激腫瘤細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞分泌和活化MMPs,介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞之間、腫瘤細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的相互作用;與MMPs在腫瘤細(xì)胞表面形成復(fù)合物,形成腫瘤細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶類(lèi)-基質(zhì)成分構(gòu)成的腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的局部微環(huán)境[10-12]。因此人們廣泛認(rèn)同CD147的表達(dá)與人體某些惡性腫瘤的惡性程度、侵襲能力和轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。
本文結(jié)果顯示,前列腺癌組CD147表達(dá)陽(yáng)性率為100.0%,明顯高于前列腺增生組的 14.3%(P <0.05)。表明前列腺癌組織中CD147表達(dá)率明顯高于前列腺良性增生組織,這與相關(guān)文獻(xiàn)[13]報(bào)告一致。本文結(jié)果顯示,CD147的表達(dá)與前列腺癌Gleason評(píng)分、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05),而與患者的年齡和腫瘤分化程度無(wú)關(guān)(P>0.05)。Cox回歸模型分析結(jié)果顯示,CD147表達(dá)陽(yáng)性、Gleason評(píng)分高是前列腺癌患者的預(yù)后危險(xiǎn)因素(P<0.05),CD147陽(yáng)性、Gleason評(píng)分高的患者,復(fù)發(fā)和死亡的風(fēng)險(xiǎn)大。Gleason評(píng)分是由病理科醫(yī)生在顯微鏡下,通過(guò)對(duì)前列腺癌細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察所建立的病理學(xué)評(píng)估方法,其結(jié)果受醫(yī)生的主觀因素影響較大[14]。相對(duì)而言,CD147的檢測(cè)結(jié)果更為客觀可靠。本組研究結(jié)果表明CD147異常表達(dá)是除Gleason評(píng)分外的可用來(lái)獨(dú)立判斷前列腺癌進(jìn)展程度的臨床指標(biāo),其表達(dá)上調(diào)可作為前列腺癌預(yù)后不良的危險(xiǎn)信號(hào)。
綜上所述,前列腺癌組織CD147的高表達(dá)在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮著重要作用,可作為研究腫瘤發(fā)病機(jī)制、判斷腫瘤進(jìn)展及臨床預(yù)后的有效分子標(biāo)志。
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