許　斌，陳　純?。ńK省無錫市中醫(yī)醫(yī)院口腔科，江蘇無錫214000）

口腔扁平苔蘚角質(zhì)形成細胞與淋巴細胞的混合培養(yǎng)

許斌，陳純（江蘇省無錫市中醫(yī)醫(yī)院口腔科，江蘇無錫214000）

近年來對口腔扁平苔蘚（OLP）的研究越來越多，OLP的組織病理學(xué)表明角質(zhì)形成細胞和淋巴細胞與其發(fā)病有著重要關(guān)系，很多學(xué)者開始建立這兩種細胞的體外培養(yǎng)模型，尋找OLP的發(fā)病機制，本研究就最近幾年的研究狀況作以簡要概括，并對OLP的細胞培養(yǎng)模型提出一些研究設(shè)想．

口腔扁平苔蘚；角質(zhì)形成細胞；淋巴細胞；混合培養(yǎng)

0　引言

口腔扁平苔蘚（oral lichen planus，OLP）是發(fā)生于口腔黏膜的一種慢性炎癥性疾病，其發(fā)病率為0．1%～4%［1］，其病因和發(fā)病機制目前尚不清楚，但是有研究表明OLP是一種T細胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病［2］，其中以T淋巴細胞活化為主的細胞免疫失調(diào)是口腔發(fā)生病變的關(guān)鍵環(huán)節(jié)［3］．但具體機制仍然不明確，使得OLP缺乏有效的治療方法，為此很多學(xué)者開始體外培養(yǎng)OLP相關(guān)細胞，模擬機體局部OLP的發(fā)病環(huán)境，探尋OLP的發(fā)病機制，尋求有效治療方法．

1　細胞培養(yǎng)

1．1角質(zhì)形成細胞的培養(yǎng)角質(zhì)形成細胞的培養(yǎng)方法目前主要有：組織塊培養(yǎng)法、以3T3細胞為滋養(yǎng)層的培養(yǎng)法、以膠原為滋養(yǎng)層的培養(yǎng)法、氣?液交界面培養(yǎng)法、無血清培養(yǎng)法［4］．

張興洪等［5］證實了胰酶加dispase酶消化、限制性KC?FSM培養(yǎng)基體外培養(yǎng)是制備和培養(yǎng)人皮膚角質(zhì)形成細胞的好方法．有學(xué)者比較了酶化法和直接分離法獲得口腔黏膜角質(zhì)形成細胞的效果，結(jié)果顯示酶催化法在獲得角質(zhì)形成細胞所用的時間、細胞的數(shù)量以及細胞在體外的生存時間方面要優(yōu)于直接法［6］．

1．2淋巴細胞的培養(yǎng)從外周血分離單個核細胞（peripheral bloodmononuclear cells，PBMCs）純化培養(yǎng)T淋巴細胞常用的方法有：尼龍毛吸附法、補體細胞毒法、免疫磁珠法．前兩種方法得到的T淋巴細胞純度低且含有自然殺傷（natural killer，NK）細胞，后一種方法得到的T淋巴細胞純度高但是費用昂貴［7］．

李付廣等［8］根據(jù)不同細胞在特定培養(yǎng)基中的死亡時間不同而篩選出T淋巴細胞，該實驗在低劑量IL?2的維持條件下利用細胞培養(yǎng)淘汰法獲得了初步純化的T淋巴細胞，該方法經(jīng)濟、操作簡單．

1．3角質(zhì)形成細胞與淋巴細胞的混合培養(yǎng)目前關(guān)于OLP的角質(zhì)形成細胞與淋巴細胞的體外共培養(yǎng)模型的建立尚且不多．李琴等［9］成功建立了OLP角質(zhì)形成細胞與淋巴細胞的體外混合培養(yǎng)模型，一定程度上模擬了人體局部OLP的發(fā)病環(huán)境．國外有學(xué)者從OLP患者口腔粘膜切取部分組織，分離得到角質(zhì)形成細胞后在無血清的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，從正常人外周血中分離得到單個核細胞，懸浮在含有L?谷氨酸和抗生素的RPMI?1640培養(yǎng)基中，再將單個核細胞在角質(zhì)形成細胞的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，實驗結(jié)果顯示角質(zhì)形成細胞表達的TNF?α、GMCSF、IL?1β等細胞因子可以誘導(dǎo)單個核細胞表達更多的細胞粘附分子，從而增強外周血單個核細胞的增殖、遷移［10］．

2　對OLP細胞培養(yǎng)的討論

近年來對于OLP角質(zhì)形成細胞、淋巴細胞培養(yǎng)的研究尚且不多，其中存在一些值得討論的問題．

2．1不同培養(yǎng)基對培養(yǎng)結(jié)果的影響OLP的細胞培養(yǎng)大部分采用含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基．不過最近有學(xué)者分別用RPMI?1640培養(yǎng)基和IMDM培養(yǎng)基培養(yǎng)外周血樹突狀細胞（dentritic cell，DC），觀察不同培養(yǎng)基對細胞功能的影響，實驗結(jié)果顯示兩種細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)的DC在形態(tài)學(xué)、CD14和CD83的表達以及內(nèi)吞作用方面沒有太大的差異，但是用IMDM培養(yǎng)的DC低表達CD1a、IL?12，高表達IL?6、IL?8、IL?10，減少了對T細胞增殖的刺激作用，用IMDM培養(yǎng)基培養(yǎng)的DC可能與誘導(dǎo)機體的免疫耐受有關(guān)［11］．

以上說明用RPMI?1640和IMDM培養(yǎng)細胞可以使同樣的細胞表現(xiàn)出不同的功能，目前IMDM有多種型號，如果采用不同型號的IMDM培養(yǎng)基在體外混合培養(yǎng)OLP角質(zhì)形成細胞和淋巴細胞，結(jié)果是否會發(fā)生改變還需要進一步地研究．

2．2培養(yǎng)基中離子及其濃度的改變對培養(yǎng)結(jié)果的影響李習(xí)玲等［12］采用無血清無鈣離子的角質(zhì)形成細胞生長培養(yǎng)基，不加任何細胞因子和生長因子，僅僅通過改變培養(yǎng)基中的鈣離子濃度，調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細胞的形成和分化，成功的對小鼠的表皮角質(zhì)形成細胞進行了原代培養(yǎng)．

Takagi等［13］在培養(yǎng)應(yīng)用于臨床再生醫(yī)學(xué)的角質(zhì)形成細胞時發(fā)現(xiàn)，去掉傳統(tǒng)角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)基中的轉(zhuǎn)鐵蛋白和金屬元素硒，對犬科口腔黏膜上皮細胞層的形成沒有明顯影響．

2．3PFT?α對培養(yǎng)結(jié)果的影響張興洪等［14］取正常皮膚的角質(zhì)形成細胞進行體外培養(yǎng)，證實一定劑量的P53抑制劑PFT?α可以減輕阿霉素對人皮膚角質(zhì)形成細胞的損傷．口腔黏膜角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)的有關(guān)實驗證實只有小而圓的細胞才具有增殖能力［24］，如果在培養(yǎng)液中加入P53抑制劑PFT?α，會不會對角質(zhì)形成細胞的培養(yǎng)結(jié)果產(chǎn)生影響需要通過實驗證實．

綜上所述，OLP是發(fā)生于口腔黏膜的慢性炎癥，作為一種T細胞介導(dǎo)的自身免疫性疾?。?5］，OLP的發(fā)生發(fā)展與多種細胞因子密切相關(guān)．本研究對與OLP關(guān)系密切的主要細胞因子做了簡要概括，鑒于OLP與多種細胞因子有關(guān)，有些學(xué)者開始體外混合培養(yǎng)OLP角質(zhì)形成細胞與淋巴細胞，但是目前相關(guān)的研究尚且不多，OLP的發(fā)病機制以及很多問題都有待進一步研究證實．

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R781．5

A

2095?6894（2015）08?117?02

2015－07－24；接受日期：2015－08－06

許斌．碩士．E?mail：xubin188＠126．com