陳旅翼，解錦勃，蘭 洲，林淑華，胡 超，鄧旭坤，林親雄

(1中南民族大學 藥學院，武漢430074；2 湖北中醫(yī)藥大學 藥學院，武漢430065)

大麻藥總皂苷滴丸制備工藝及溶出度研究

陳旅翼1，解錦勃1，蘭 洲2，林淑華1，胡 超1，鄧旭坤1，林親雄1

(1中南民族大學 藥學院，武漢430074；2 湖北中醫(yī)藥大學 藥學院，武漢430065)

為確立大麻藥總皂苷滴丸的最佳成型工藝并考察其溶出度，以滴丸的成型率為評價指標，對大麻藥滴丸基質與冷卻劑的選擇、大麻藥與基質的配比、滴制的溫度、滴距、滴速進行了單因素分析，并在此基礎上以正交試驗通過丸重差異、溶散時限和外觀質量3個指標對上述主要影響因素進行了優(yōu)選，采用轉籃法和HPLC測定了其溶出度和含量.結果表明：大麻藥總皂苷滴丸的最佳工藝條件為B3A1C1D2，即藥物基質質量比為1∶4，PEG4000-PEG6000基質質量比為2∶1，滴制溫度為70℃，滴距為5 cm，此條件下滴丸各項指標最好.說明該工藝簡便可行，評價指標可靠合理，滴丸溶出度良好，符合2010年版中國藥典對滴丸制劑的要求.

大麻藥總皂苷；滴丸；制備工藝；正交試驗；溶出度

大麻藥(DolichosfalcateKlein)為豆科鐮萹豆屬植物，藥用根莖，別名麻里麻、麻三段、豆葉百步還陽等[1]，分布于我國云南、四川、甘肅等地，尤以云南為多.本品性辛、麻、溫，有毒，具有祛風活血、止血止痛等功效.在云南民間主要用于骨折、跌打損傷、風濕疼痛，治療外傷出血，能抗癌、利尿[2-4].

大麻藥總皂苷為其主要活性成分[5,6].皂苷類成分一般口服吸收較差，生物利用度低[7]，對胃腸道刺激性較大[8,9]，不適宜做成普通的散劑或片劑等.而滴丸具有制備設備簡單、操作方便、工藝周期短、生產效率高、質量穩(wěn)定、劑量準確的優(yōu)點，其服用量小、起效快、生物利用度高[10,11].本文采用固體分散技術將大麻藥制成滴丸，縮短了藥物的溶散時限，改善了口感，提高了生物利用度，并降低了胃腸道的刺激性.

1 材料與儀器

1.1 材料

PEG4000、PEG6000(天津市博迪化工有限公司)，二甲基硅油、液體石蠟、甘油(天津博迪化工股份有限公司)，菜籽油(多琦, 食用型, 湖北華飴木本油脂有限公司)，大麻總皂苷(自制, 批號20131025, 純度>60%)，大麻藥苷B(自制, 批號20120705,純度>98%).

1.2 儀器

分析天平(PL403, METTLER TOLEDO, 梅特勒托利多儀器)，智能藥物溶出試驗儀(RCZ-6B3型, 上海楚柏實驗室設備有限公司)，高效液相色譜儀(戴安Ultimate 3000分析型液相色譜儀)，Phecda C18色譜柱(漢邦科技，2.1 mm×150 mm, 3 μm)，高功率數控超聲波清洗器(KQ-400KDE型, 昆山市超聲儀器有限公司)，螺旋測微器(北京第二量具廠).

2 方法與結果

2.1 滴丸制備單因素分析

2.1.1 基質的選擇

大麻藥總皂苷水溶性常溫下較小，熱水中較大.故選用水溶性較好的PEG類基質來研制滴丸，以基質種類和配比設計空白實驗方案，以滴丸成型效果作為判定指標，其他條件相同，結果見表1.由表1可知，當PEG6000與PEG4000按質量比為2∶1, 1∶1, 1∶2時滴丸成型效果較好，故選擇上述配比作為正交實驗中因素A水平.

2.1.2 冷卻劑的選擇

以多琦菜籽油、液體石蠟和二甲基硅油為冷卻劑，其他條件相同，進行滴丸劑的滴制.以滴丸沉降速度、外觀形狀為指標，結果見表2，由表2可見，多琦菜籽油為冷卻劑時滴丸外觀最圓整，故選用多琦菜籽油作為大麻總皂苷滴丸劑制備的冷卻劑.

2.1.3 藥物與基質比例的篩選

稱取一定量的PEG6000和PEG4000于蒸發(fā)皿中，其中PEG6000和PEG4000質量比分別為1∶1，1.5∶1.5，1∶2，1∶3 .再向蒸發(fā)皿中分別加入大麻藥總皂苷藥粉2, 1.5, 1, 1 g，使得藥物與基質的質量比分別為1∶1，1∶2，1∶3和1∶4，其他條件相同，考察各種配比藥液的融合情況、粘稠度和滴制難易程度，結果見表3.由表3可知，當基質與藥物質量比小于2∶1時藥液很粘稠，難以融合，無法滴制，故確定基質與藥物的最小質量為2∶1，同時為了控制滴丸中基質的含量，最大比例控制為4∶1，最終確定基質與藥物的比例為2∶1, 3∶1, 4∶1作為B因素的3個水平.

2.1.4 藥液溫度、滴距、滴速的選擇

主藥與PEG6000、PEG4000 質量比為1∶2∶1，冷凝液為多琦菜籽油，其他條件均一致，分別以滴制溫度(70, 80, 90 ℃)，滴距(3,5,7 cm)，滴速(20, 30, 40滴/min)設計實驗，以其成型率為考察指標.結果表明：滴制溫度、滴距對滴制效果影響較大，最佳溫度為80℃，最佳滴距為5 cm，而滴速對成型工藝研究影響不是很大.綜上最終確定滴速為30滴/min，以70, 80, 90 ℃的滴制溫度作為C因素的3個水平，以3, 5, 7 cm的滴距作為D因素的3個水平.

2.2 滴丸制備工藝研究

2.2.1 正交因素水平設計

選擇對滴丸成型工藝影響較大的4個因素，即PEG6000-PEG4000質量比(A)、主藥與基質質量比(B)、滴制溫度(C)、滴距(D)，每個因素選擇3水平，采用L9(33)正交實驗法對滴丸成型工藝參數進行研究.正交實驗因素水平表設計見表4.

2.2.2 實驗指標計算

選取丸重差異、溶散時限和外觀評分3個指標來考察滴丸制備工藝參數.丸重差異：任取滴丸20粒，精密稱定每粒滴丸的重量，計算20粒滴丸的重量平均值、標準差和變異系數. 溶散時限：任取滴丸6粒，按2010版《中國藥典》一部附錄XIIA崩解時限檢查方法中滴丸劑進行檢查，記錄每粒滴丸的溶散時限，計算6粒滴丸溶散時限的平均值、標準差和變異系數.外觀評分：以大小均一、色澤一致、圓整、成型率及相互不粘連為滿分10分，其中每項各占2分，逐項評分后再總分，計算3人評分的平均值、標準差和變異系數.

2.2.3 正交實驗結果分析

正交9個實驗所制的滴丸的外觀評分、溶散時限和丸重差異的結果見表5.

2.2.4 外觀評分結果分析

外觀評分的直觀分析結果見表6，4個因素的極差大小排序為B>A>C>D.采用極差最小的D因素作為誤差項進行方差分析，其他3個因素均不具備顯著性(p>0.05, 見表7),其中A1>A3>A2、B3>B2>B1、C1>C3>C2，滴距因素中以D1得分較高，故采用外觀評分作為指標優(yōu)選的最佳工藝為B3A1C1D1，即藥物基質質量為1∶4，基質質量為2∶1，滴制溫度為70℃，滴距為3cm.

2.2.5 溶散時限結果分析

溶散時限的直觀分析結果見表 8，4個因素的極差大小排序為A>D>B>C.采用極差最小的C因素作為誤差項進行方差分析，B因素具有顯著性差異(p<0.05,見表9)，且B30.05)，其中A1

2.2.6 丸重差異結果分析

由丸重差異的直觀分析結果(表10)可見，4個因素的極差大小排序為A>C>B>D.采用極差最小的D因素作為誤差項進行方差分析，其他3個因素均不具有顯著性差異(p>0.05, 見表 11)，其中B3

2.2.7 滴丸制備工藝參數確定

以外觀評分、溶散時限、丸重差異為指標優(yōu)選的最佳工藝分別為B3A1C1D1，B3A1C3D2，B3A1C2D3.藥物制劑過程須著重考慮藥效和成本兩個因素.考慮藥效，溶散時限對其影響較大，故滴距項選擇D2；節(jié)約成本，降低能耗考慮，滴制溫度選擇D1.故大麻藥總皂苷滴丸制備的最佳工藝確定為B3A1C1D2，即藥物基質質量比為1∶4，基質質量為2∶1，滴制溫度為70 ℃，滴制距離為5 cm.

2.2.8 滴丸制備工藝小試驗證

按B3A1C1D2滴丸制備工藝參數制備了3批小試滴丸(批號1312181, 1312182, 1312183)，通過外觀評分、丸重差異和溶散時限指標測試后證明該滴丸制備工藝穩(wěn)定可行.

2.3 滴丸溶出度考察

本品制備工藝研究表明，滴丸水溶性較好，丸重規(guī)格較小，考慮含量測定中進樣濃度等因素，以每次服用量8粒為單位，選擇250 mL磷酸鹽緩沖溶液(pH=7.4)為溶出介質，每次取樣1 mL，進行相關處理后測定溶出度，因大麻藥總皂苷主要藥效成分為大麻藥苷B，其純度為70%，故選擇測定大麻藥苷B含量來考察大麻藥總皂苷滴丸的溶出度.

2.3.1 對照品儲備液制備

精密稱定100 mg大麻藥苷B，置于100 mL容量瓶中，加少量甲醇超聲溶解，再加甲醇定容，制備成濃度為1000 μg/mL的對照品儲備液.

2.3.2 供試品配制

精密稱取12 mg磨碎的滴丸，溶于10 mL容量瓶中，配制成供試品溶液.

2.3.3 色譜條件

Phecda C18色譜柱(2.1 mm× 150 mm, 3 μm)，柱溫25℃，流動相：A為0.1%乙酸乙腈溶液，B為0.1%乙酸溶液，梯度洗脫條件：0 ～16 min，A-B (30∶70→62∶38)；16～18 min，A-B (62∶38→30∶70)；18～20 min，A-B (30∶70)為流動相；檢測波長為215 nm；流速0.3 mL·min-1.

2.3.4 標準曲線繪制

將對照品儲備液，分別精密量取0.3, 0.5, 1, 1.2, 1.5, 2 mL定容至5 mL容量瓶中.吸取上述不同濃度的對照品溶液10 μL，進HPLC得到對應的峰面積，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制曲線.曲線方程為y=723.18x+2.3912，線性范圍60 ～ 400 μg/mL，相關系數r=0.9999，方程可用.

2.3.5 精密度試驗

將濃度為200 μg/mL的對照品溶液，連續(xù)進樣6次， RSD為0.37 %，表明精密度良好.

2.3.6 重復性試驗

取供試品溶液連續(xù)進樣6次， RSD為0.33 %，表明重復性良好.

2.3.7 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，過0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液上液相，進樣量10 μL，分別在0, 1, 4, 8, 12, 24 h進樣測定含量，供試品在24 h內含量RSD為0.68 %，表明穩(wěn)定性良好.

2.3.8 加樣回收試驗

精密稱取9份3 mg已磨碎滴丸，分別加入1.8, 2.2, 2.6 mL對照品各3份，溶于2.5 mL容量瓶中，平行操作9次，上液相檢測，每份溶液測定3次，結果顯示，3組平均回收率分別為103.2%,101.5%,101.3%，RSD為1.02%，符合試驗要求.

2.3.9 含量測定

將3次重復工藝制備得到的滴丸磨碎，分別精密稱取約12 mg，置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解和定容，過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液上液相檢測大麻藥苷B的峰面積，每份溶液平行測定3次，算得平均值14.09%，RSD為0.45%，即滴丸中的大麻藥苷B含量為14.09%.

2.3.10 溶出度測定

按照中國藥典2010年版一部附錄溶出度測定項下的方法測定溶出度，平行檢測3批(1312181, 1312182, 1312183).以磷酸鹽緩沖溶液(pH=7.4)作為溶出介質，維持溫度(37±0.5)℃，轉速(100±1) r/min，分別在5, 10,15,30,45,60 min取樣，同時立即補充等量新鮮介質，試樣過0.45 μm微孔濾膜，續(xù)濾液上液相檢測大麻藥苷B峰面積，再按標準曲線計算藥物的累積釋放量，結果見表12，表明滴丸體外溶出明顯加快，60 min內滴丸累積釋放量達到95%，說明該法制備的滴丸符合藥典的相關規(guī)定.

3 結論

(1) 大麻藥總皂苷滴丸的最佳工藝條件為：藥物基質質量為1∶4，基質質量為2∶1，滴制溫度為70℃，此條件下，滴丸各項指標最好.該工藝簡便可行，評價指標可靠合理，滴丸成型性好，符合2010年版中國藥典對滴丸制劑的要求.

(2) 最佳工藝條件下所制備的滴丸平均重量為45 mg，其中大麻藥苷B含量達到14.09%，即每丸中含有6.3 mg大麻藥苷B.已建立的色譜方法能滿足對大麻藥總皂苷滴丸中大麻藥苷B的含量測定要求.

(3) 溶出度實驗表明：在磷酸緩沖鹽(pH=7.4)的條件下，有較好的溶出速率，說明大麻藥總皂苷滴丸在正常腸道內的溶出良好.

[1] 云南省衛(wèi)生局革命委員會.云南中草藥[M].昆明: 云南人民出版社, 1971.

[2] 田成國, 楊燕云. 大麻藥抗癌有效成分的研究[J]. 中草藥通訊, 1977, 12(2): 8-12.

[3] 黃厚聘, 程才芬, 林文琴, 等. 大麻藥總皂苷的抗癌作用[J]. 中國藥理學報, 1982, 3(4): 286-288.

[4] 貴陽醫(yī)學院病理學教研組.大麻藥對小鼠移植性腫瘤細胞呼吸的影響[J]. 科學通報, 1975, 20(7): 339-342.

[5] 浦湘渝, 吳大剛, 楊崇仁. 大麻藥的三萜皂苷成分(1)[J].云南植物研究, 1984, 6(3): 321-324.

[6] Chen L, Mola M, Deng X, et al.DolichosfalcataKlein attenuated the inflammation induced by monosodium urate crystalsinvivoandinvitro[J]. J Ethnopharmacol., 2013, 150(2):545-52.

[7] Han M, Sha X, Wu Y, et al. Oral absorption of ginsenoside Rb1 usinginvitroandinvivomodels[J]. Planta Med, 2006, 72(5): 398-404.

[8] Shen J, Cao C N, Su H, et al. Evidence of gastro-intestinal system as an active and toxic target of sasanqua saponins extract[J]. Exp Toxicol Pathol, 2008, 60(1):43-49.

[9] 陳旅翼, 蘭 洲, 林親雄, 等. 大麻藥生品和三種炮制品的急性毒性比較[J]. 中南民族大學學報：自然科學版 [J]. 2013, 32(3): 54-59.

[10] 崔福德. 藥劑學[M]. 5版. 北京：人民衛(wèi)生出版社, 2003: 156.

[11] 李 軍, 孫殿甲, 馬桂芝. 紅景天滴丸的制備工藝研究[J]. 新疆醫(yī)科大學學報, 2006, 29(11):1050-1052.

Study on the Preparation Process and Dissolution Rate of Dropping
Pills of Total Saponin inDolichosfalcateKlein

Chen Lüyi1, Xie Jingbo1, Lan Zhou2, Lin Shuhua1, Hu Chao1, Deng Xukun1, Lin Qinxiong1

(1 College of Pharmacy, South-Central University for Nationalities, Wuhan 430074, China；2 College of Pharmacy, Hubei University of Chinese Medicine, Wuhan 4300765, China)

To investigate the optimum preparation process and the dissolution rate of the dropping pills of total saponin inDolichosfalcateKlein, the briquetting rate of the dropping pills was used to evaluate the various processing factors, such as the choice of substrate and refrigerant, the proportion of substrate to drug, the processing temperature, the dropping distance and dropping speed. The preparation process was optimized according to the pill weight variation, the dissolution time limit, and the pill′s appearance via an orthogonal test. The dissolubility and the content of dropping pills was also determined by rotating basket and HPLC method. The results indicated that the optimum preparation process wasB3A1C1D2, viz., a proportion of substrate to drug of 1∶4, a proportion of PEG4000 to PEG6000 of 2∶1, a processing temperature of 70°C, and a dropping distance of 5 cm. The technique was simple and reproducible, and the evaluation indexes were reliable and reasonable. The dropping pill thus prepared fully met the requirements for dropping pill as described in the 2010 edition of China Pharmacopoeia with good dissolution.

total saponin inDolichosfalcateKlein; dropping pills; preparation process; orthogonal test; dissolution rate

2014-05-30

陳旅翼(1983-)，男，講師，博士，研究方向：有毒民族藥物，E-mail：clyhappy05@163.com

國家自然科學基金資助項目(81303284，81403157)；武漢市青年科技晨光計劃資助項目(2015070404010183)；湖北省自科基金創(chuàng)新群體資助項目(2013CFA013)

R283

A

1672-4321(2015)04-0053-05