■廖玉英 莫國(guó)東 黃英飛 覃仕善 黃 麗 文信旺 吳 亮 韋鳳英

（廣西畜牧研究所，廣西南寧 530001）

現(xiàn)今在經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展的同時(shí)也帶來(lái)了一系列問題，食品安全問題則是民眾最為關(guān)注的一個(gè)熱點(diǎn)。三聚氰胺、瘦肉精、蘇丹紅等食品問題一次次掀起巨大的波瀾，使得廣大民眾深受其害?？股厥?0世紀(jì)最偉大的發(fā)現(xiàn)之一，在畜禽養(yǎng)殖中主要用于治療或作為飼料添加劑；但由于抗生素的泛濫使用或使用不當(dāng)，現(xiàn)在面臨著嚴(yán)重的耐藥性問題。已有研究表明，抗生素的耐藥性問題不僅能通過(guò)食源性傳播，而且還能通過(guò)人畜接觸或環(huán)境散播，給公共衛(wèi)生安全帶來(lái)了極大的危害，同時(shí)對(duì)人類的健康也是一個(gè)嚴(yán)重的威脅。益生素又稱益生菌、促生劑、微生態(tài)制劑或飼用微生物添加劑。益生素能有效補(bǔ)充腸道中的有益微生物，維持消化道內(nèi)菌群平衡，提高機(jī)體的抗病能力、飼料轉(zhuǎn)化率等，從而達(dá)到促生長(zhǎng)和提高抗病力的雙重作用[1-2]。本試驗(yàn)通過(guò)在黃羽肉雞的日糧基礎(chǔ)上添加不同制劑的益生素，探討益生素對(duì)黃羽肉雞的免疫器官指數(shù)、新城疫和流感抗體效價(jià)，腸道菌群，血液、氣管黏液和腸液中的免疫球蛋白含量的影響，為益生素的臨床應(yīng)用和開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及來(lái)源

試驗(yàn)所選1日齡黃羽肉雞（金陵黃雞）購(gòu)買于廣西金陵農(nóng)牧有限公司；所用益生菌分別為普通益生菌（由乳酸菌、酵母菌和芽孢桿菌等組成）、加酶益生菌（在普通益生菌基礎(chǔ)上添加酶），由廣西畜牧研究所配制；麥康凱培養(yǎng)基和MRS培養(yǎng)基購(gòu)自北京陸橋技術(shù)有限公司；氯化鈉為市售分析純；生理鹽水自行配制。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選取1日齡金陵黃雞180只，隨機(jī)分成3組，每組60只，分3個(gè)重復(fù)，每重復(fù)20只。試驗(yàn)分組如下:①對(duì)照組Ⅰ:飼喂玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧，日糧配方及養(yǎng)分含量參照NRC(1994)標(biāo)準(zhǔn)配制；②益生菌制劑組(試驗(yàn)組Ⅱ):在基礎(chǔ)日糧中添加0.1%益生菌；③加酶益生菌制劑組(試驗(yàn)組Ⅲ):在基礎(chǔ)日糧中添加0.1%加酶益生菌，試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。試驗(yàn)雞采用籠養(yǎng)方式，自由飲水和采食，按照常規(guī)免疫程序接種免疫，整個(gè)試驗(yàn)期為17周。

表1 試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1 免疫抗體測(cè)定

在試驗(yàn)期17周結(jié)束，每組隨機(jī)抽取10只肉雞進(jìn)行翼靜脈采血，靜置分離血清，將分離到的血清用血凝抑制方法檢測(cè)新城疫和流感H9抗體的效價(jià)。

1.3.2 免疫器官指數(shù)測(cè)定

抽取10只肉雞活體稱重、屠宰，摘取脾臟及胸腺，剔除脂肪后稱重，計(jì)算免疫器官重與體重的相對(duì)重得到免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)=免疫器官重/體重×100。

1.3.3 免疫球蛋白測(cè)定

試驗(yàn)結(jié)束前，采血分離血清；肉雞處死后，快速采集腸液和氣管黏液，4℃保存送到南寧市第八醫(yī)院用東芝210型生化儀測(cè)定血清、氣管黏液和腸液中的IgA、IgM相對(duì)含量。

1.3.4 腸道微生物菌群測(cè)定

屠宰后立即解剖并分別收集各組的空腸和盲腸段，結(jié)扎后用酒精棉球消毒各切口，將所取的樣本迅速放入無(wú)菌容器內(nèi)。在無(wú)菌操作臺(tái)上從空腸和盲腸中分別取出1.0 g內(nèi)容物于裝有9 ml無(wú)菌生理鹽水的無(wú)菌試管內(nèi)，攪拌均勻。用倍比稀釋法將空腸和盲腸內(nèi)容物進(jìn)行10倍稀釋。選擇合適的稀釋度分別接種于麥康凱瓊脂和MRS固體培養(yǎng)基平皿上（各稀釋度設(shè)3個(gè)重復(fù)），37℃培養(yǎng)24 h后菌落計(jì)數(shù)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用Excel 2007軟件建立原始數(shù)據(jù)庫(kù)，采用DPS軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行LSD多重比較，分析結(jié)果數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（Mean±SE）”表示。

2 結(jié)果分析

2.1 不同益生菌制劑對(duì)黃羽肉雞免疫器官指數(shù)的影響（見表2）

表2 不同益生菌制劑對(duì)黃羽肉雞免疫器官指數(shù)的影響

由表2可知，試驗(yàn)組Ⅱ的脾臟指數(shù)比對(duì)照組Ⅰ提高2.36%，差異顯著（P＜0.05），試驗(yàn)組Ⅲ的脾臟指數(shù)比對(duì)照組Ⅰ提高6.29%，差異極顯著（P＜0.01）；試驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ的胸腺指數(shù)比對(duì)照組Ⅰ分別提高5.26%、3.76%，差異顯著（P＜0.05），但試驗(yàn)組Ⅱ與試驗(yàn)組Ⅲ相比較差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 不同益生菌制劑對(duì)黃羽肉雞免疫球蛋白含量的影響（見表3）

表3 不同益生菌制劑對(duì)黃羽肉雞免疫球蛋白含量的影響(g/l)

由表3可知，試驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ的血清及腸液的IgA分別高于對(duì)照組Ⅰ7.27%、10.91%和5.36%、8.93%，試驗(yàn)組Ⅱ與對(duì)照組Ⅰ相比差異顯著（P＜0.05），試驗(yàn)組Ⅲ與對(duì)照組Ⅰ相比差異極顯著（P＜0.01），試驗(yàn)組間差異顯著（P＜0.05）；試驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ的氣管液IgA分別高于對(duì)照組Ⅰ12.90%、15.05%，差異顯著（P＜0.05），但試驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ間差異不顯著（P＞0.05）；血清、腸液及氣管液的IgM各組間差異均不顯著（P＞0.05）。

2.3 不同益生菌制劑對(duì)黃羽肉雞疫苗免疫效果的影響（見表4）

由表4可知，ND抗體滴度試驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ分別比對(duì)照組Ⅰ提高2.29%、7.84%，試驗(yàn)組Ⅱ與對(duì)照組Ⅰ相比差異不顯著（P＞0.05），與試驗(yàn)組Ⅲ相比差異顯著（P＜0.05）；禽流感疫苗H9的抗體滴度試驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ分別比對(duì)照組提高12.08%、45.28%，試驗(yàn)組Ⅱ與對(duì)照組Ⅰ相比差異顯著（P＜0.05），試驗(yàn)組Ⅲ與對(duì)照組Ⅰ相比差異極顯著（P＜0.01），試驗(yàn)組Ⅱ與試驗(yàn)組Ⅲ相比差異顯著（P＜0.05）。

表4 不同益生菌制劑對(duì)黃羽肉雞疫苗免疫效果的影響(lg2)

2.4 不同益生菌制劑對(duì)黃羽肉雞腸道菌落濃度的影響（見表5）

表5 不同益生菌制劑對(duì)黃羽肉雞腸道菌落濃度的影響[lg(CFU/g)]

由表5可知，試驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ直腸的大腸桿菌菌落濃度分別比對(duì)照組降低12.98%、14.23%，差異顯著(P＜0.05)，試驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ間差異不顯著（P＞0.05）；直腸的乳酸菌菌落濃度試驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ與對(duì)照組相比差異不顯著(P＞0.05)。十二指腸的大腸桿菌菌落濃度試驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ與對(duì)照組Ⅰ相比，分別降低15.27%、9.01%，而乳酸菌菌落濃度比對(duì)照組Ⅰ分別提高11.05%、14.83%，試驗(yàn)組Ⅲ的大腸桿菌菌落濃度與對(duì)照組相比差異顯著(P＜0.05)；乳酸菌菌落濃度與對(duì)照組Ⅰ相比差異極顯著(P＜0.01)；直腸與十二指腸的沙門氏菌只出現(xiàn)少量。

3 討論

益生素是根據(jù)微生態(tài)平衡理論、營(yíng)養(yǎng)理論和防治理論選用有益的微生物及其發(fā)酵產(chǎn)物，經(jīng)過(guò)特殊加工工藝而制成的微生態(tài)制劑。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局把它定義為可直接飼喂或作為飼料添加劑的微生物?？股貛?lái)的諸多危害已對(duì)人類的身體健康和生存環(huán)境構(gòu)成巨大的威脅，因而禁用抗生素、綠色健康養(yǎng)殖的呼聲越來(lái)越高。

在本研究中，添加益生素飼喂的雞只的免疫器官指數(shù)，氣管黏液、腸液和血清中的免疫球蛋白含量，血清中新城疫和流感抗體的效價(jià)明顯高于飼喂普通日糧的雞只。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[3]，雛雞服用益生素后血清、腸液及氣管液的IgA增高，即消化道和呼吸道局部黏膜的體液免疫反應(yīng)增強(qiáng)；而血清、腸液及氣管液的IgM與對(duì)照組相比差異不顯著，原因可能為IgM是最早合成和分泌的抗體，含量于前10 d是高峰期，而本試驗(yàn)的檢測(cè)時(shí)間是試驗(yàn)后期，時(shí)間長(zhǎng)，則含量有所下降，與不添加益生菌制劑的對(duì)照組相比差異不大。朱慧玲等[4]在發(fā)霉日糧添加益生素飼喂后，肉雞血液中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性顯著降低，并且中性粒細(xì)胞降低，漿細(xì)胞數(shù)提高，法氏囊指數(shù)高于對(duì)照組（P＜0.05）。呂英等[5]用免疫酶組織化學(xué)法研究雛雞飼喂益生素后，其法氏囊和脾臟生成的細(xì)胞數(shù)量均比對(duì)照組有不同程度的增加。本試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明了在飼料中添加益生素不僅對(duì)雛雞的免疫系統(tǒng)功能有提高作用，而且對(duì)肉雞也具有相同的作用。

益生素含有大量有益菌，其菌體成分如多肽、肽聚糖、胞壁糖、蛋白質(zhì)等，可作為抗原刺激腸道，以免疫佐劑的形式作用于免疫器官，從而促進(jìn)免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育。相關(guān)研究表明，益生素能增加腸道黏膜中的CD8+細(xì)胞，說(shuō)明益生素對(duì)家禽的免疫系統(tǒng)有一定的影響，促進(jìn)免疫器官（胸腺、法氏囊、脾臟等）的生長(zhǎng)發(fā)育[6]。另外，益生素與病原菌有相同或相似的抗原物質(zhì)，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，提高免疫力，或產(chǎn)生類似抗生素和免疫因子，抑制病原菌的生長(zhǎng)繁殖。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，添加益生素飼喂的組別中的大腸桿菌數(shù)量明顯少于對(duì)照組，而乳酸菌含量高于對(duì)照組，并且加酶益生素的效果尤佳，與陸永久等[7]用添加益生素飼喂銀香雞促進(jìn)其生長(zhǎng)發(fā)育，提高腸道益生菌數(shù)量的報(bào)道結(jié)果一致。

動(dòng)物機(jī)體腸道內(nèi)微生物種群及其數(shù)量處于一個(gè)平衡狀態(tài)。如若腸道菌群失去平衡，動(dòng)物機(jī)體的消化功能就會(huì)出現(xiàn)紊亂，誘發(fā)疾病，極易發(fā)生繼發(fā)感染，從而影響機(jī)體發(fā)育。乳酸菌和芽孢桿菌是動(dòng)物體內(nèi)的優(yōu)勢(shì)菌落，添加飼喂，可降低腸道pH值，抑制病原菌的定植等，維持腸道微生態(tài)平衡，并且產(chǎn)生多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如氨基酸、維生素等，參與機(jī)體的新陳代謝，促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育。酵母菌主要通過(guò)阻止病原微生物黏附，刺激非特異性免疫方面增強(qiáng)免疫功能[2]。其次，產(chǎn)酶益生素可產(chǎn)生多種消化酶，從而促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，提高飼料的轉(zhuǎn)化率。

總之，在飼料中添加益生菌制劑對(duì)黃羽肉雞可促進(jìn)免疫器官的發(fā)育，改善腸道內(nèi)的微生態(tài)平衡，增高體液中的免疫球蛋白IgA、IgM的含量及增強(qiáng)疫苗免疫效果。研究結(jié)果說(shuō)明，益生菌制劑能提高動(dòng)物的免疫力，對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育起到促進(jìn)作用，并且加酶益生素的效果優(yōu)于只添加益生素的效果。