蘇秋香，叢　敬，宮　倩

（1.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院形態(tài)中心實(shí)驗(yàn)室遼寧沈陽(yáng)110034；2.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室遼寧沈陽(yáng)110034；3.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院遼寧沈陽(yáng)110034）

絞股藍(lán)皂苷在小鼠皮膚衰老中的抗氧化損傷作用研究

蘇秋香1，叢敬2，宮倩3

（1.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院形態(tài)中心實(shí)驗(yàn)室遼寧沈陽(yáng)110034；2.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室遼寧沈陽(yáng)110034；3.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院遼寧沈陽(yáng)110034）

目的：探討絞股藍(lán)皂苷對(duì)衰老小鼠皮膚的抗氧化保護(hù)作用。方法：60只小鼠隨機(jī)分成3組，青年組（A）、老年對(duì)照組（B）和老年給藥組（C）；A、B組灌胃生理鹽水20ml/kg，C組灌胃絞股藍(lán)皂苷提取液8g/kg，每天1次。30天后取皮膚組織，檢測(cè)丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性。結(jié)果：與A組比較，B組、C組皮膚組織中MDA含量增加，SOD、CAT、GSH-Px活性降低（＜0.05）；與B組比較，C組皮膚組織中MDA含量減少，SOD、CAT、GSH-Px活性增加（＜0.05）。結(jié)論：灌胃絞股藍(lán)皂苷可減輕衰老小鼠皮膚的氧化損傷，具有延緩小鼠皮膚衰老的作用。

絞股藍(lán)皂苷；抗氧化損傷；皮膚衰老

隨著年華老去，各系統(tǒng)、器官、組織甚至細(xì)胞都會(huì)發(fā)生改變，皮膚也不例外。其功能的減弱或喪失，不僅影響美觀，而且增加了多種皮膚疾病的發(fā)生率[1]。國(guó)內(nèi)外學(xué)者試圖運(yùn)用多種理論解釋衰老的進(jìn)程，其中包括氧化應(yīng)激學(xué)說(shuō)，即氧化產(chǎn)物的生成與清除之間的失衡，導(dǎo)致了衰老的發(fā)生、發(fā)展[2]。絞股藍(lán)是葫蘆科草質(zhì)藤本植物，是五加科之外唯一含有與人參皂苷相似結(jié)構(gòu)皂苷的植物，其皂苷成分具有保護(hù)心腦血管、抗腦缺氧、抗腫瘤及抗衰老等藥理作用，并在治療高血脂癥、血管性癡呆、消化道潰瘍以及中風(fēng)等方面取得了一定的療效，因此引起國(guó)內(nèi)外眾多學(xué)者的重視[3]。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)研究絞股藍(lán)皂苷（Gyp）對(duì)自然衰老小鼠皮膚中氧化產(chǎn)物含量及抗氧化酶活性的影響，探索其抗衰老的藥理作用及機(jī)制，為絞股藍(lán)的進(jìn)一步臨床應(yīng)用及市場(chǎng)開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

清潔級(jí)昆明種小鼠18月齡40只，6月齡20只，雌雄各半，體重35～59g，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分3組：青年組（A）、老年對(duì)照組（B）和老年給藥組（C）。動(dòng)物按性別及組別分籠飼養(yǎng)，常規(guī)飼食飲水。

1.2藥品制備及給藥

絞股藍(lán)皂苷粉末（成都曼思特生物科技有限公司）用干燥箱烘干24h，以水作為溶劑進(jìn)行浸提，浸提條件為90℃，30min。冷卻至室溫，過(guò)濾、澄清，得提取液0.4g生藥/ml，放置4℃冰箱待用。A、B組灌胃生理鹽水20ml/kg，C組灌胃絞股藍(lán)皂苷提取液8g/kg。以上操作每天1次，共進(jìn)行30d。

1.3取材及指標(biāo)測(cè)定

將各組小鼠于第31天用剃毛器脫去背部皮膚毛發(fā)，面積為2cm×3cm。處死小鼠，取背部脫毛處全層皮膚，面積為1cm×1cm，制成組織勻漿，按試劑盒（南京建成生物醫(yī)學(xué)工程研究所）說(shuō)明書的方法分別檢測(cè)丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均通過(guò)SPSS12.0軟件進(jìn)行處理，各組實(shí)驗(yàn)參數(shù)以表示。組間差異按方差分析進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，并用最小顯著差法(LSD法)作兩兩比較。＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

與A組比較，B組和C組的MDA含量均增加，SOD、CAT和GSH-Px活性均不同程度降低（＜0.05）。與B組比較，C組的MDA含量降低，SOD、CAT和GSH-Px活性增加（＜0.05）。提示自然衰老小鼠皮膚中，氧化產(chǎn)物MDA含量增加，抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px活性降低；灌胃絞股藍(lán)皂苷可減少自然衰老小鼠皮膚組織中MDA生成，提高SOD、CAT、GSH-Px活性。見表1。

表1　絞股藍(lán)皂苷對(duì)自然衰老小鼠皮膚的抗氧化作用

SOD（U/mgprot）463.77±92.15 200.79±26.53*312.27±42.87*☆CAT（U/mgprot）101.18±15.75 50.51±9.52*65.58±11.94*☆組別青年組（A）老年對(duì)照組（B）老年給藥組（C）GSH-Px（μmol/L）259.41±42.19 130.02±39.08*198.71±30.04*☆MDA（nmol/mgprot）4.83±1.03 12.42±2.86*10.02±2.01*☆樣本數(shù)20 20 20

3　討論

衰老的自由基學(xué)說(shuō)認(rèn)為，衰老過(guò)程源于氧化應(yīng)激反應(yīng)，即過(guò)剩的自由基對(duì)細(xì)胞及組織的損害[4-5]。氧自由基是機(jī)體正常代謝的中間產(chǎn)物，因含有未配對(duì)的電子，而具有不穩(wěn)定性，可引發(fā)鏈?zhǔn)阶杂苫磻?yīng)。低濃度的氧自由基是機(jī)體執(zhí)行正常生理功能所必需的，但高濃度時(shí)則可攻擊細(xì)胞膜、蛋白質(zhì)、核酸而造成組織結(jié)構(gòu)的氧化損傷。氧化應(yīng)激也可以破壞DNA的結(jié)構(gòu)，引發(fā)DNA損傷應(yīng)答，或者直接調(diào)控衰老相關(guān)的信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞衰老的發(fā)生[6-7]。MDA就是氧自由基與細(xì)胞膜中不飽和脂肪酸發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)，形成的氧化終產(chǎn)物[8]。MDA是很強(qiáng)的交聯(lián)劑，可與蛋白質(zhì)、核酸等結(jié)成難溶性物質(zhì)，使細(xì)胞膜硬化導(dǎo)致其通透性降低，影響細(xì)胞的物質(zhì)交換，繼而使之破裂、凋亡。與此同時(shí)，機(jī)體內(nèi)存在對(duì)抗氧自由基的抗氧化系統(tǒng)，酶和非酶系統(tǒng)。主要的抗氧化酶包括，SOD、CAT和GSH-Px。SOD是超氧陰離子的清除劑，CAT和GSH-Px可以清除H2O2和脂質(zhì)過(guò)氧化物[9-11]。隨著年齡增加，人體內(nèi)MDA大量堆積，如SOD、CAT和GSH-Px等抗氧化酶活性降低[12]，因此監(jiān)測(cè)氧化產(chǎn)物含量和抗氧化酶活性的變化可在一定程度上了解氧化應(yīng)激在器官、組織自然衰老中的作用。

本實(shí)驗(yàn)中，老年對(duì)照組沒(méi)有給予絞股藍(lán)皂苷處理，其各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與青年組比較顯示，較正常皮膚自然衰老的小鼠皮膚組織中氧化產(chǎn)物增加，抗氧化酶活性降低，支持氧化應(yīng)激致皮膚衰老的假設(shè)。與老年對(duì)照組相較，老年給藥組的檢測(cè)結(jié)果顯示，灌胃絞股藍(lán)皂苷一段時(shí)間后，衰老的皮膚組織中抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px活性增高，MDA含量降低。提示絞股藍(lán)皂苷可以通過(guò)提高抗氧化酶的活性，增強(qiáng)氧自由基的清除，減輕脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的程度，使MDA含量降低，從而削弱氧化應(yīng)激反應(yīng)對(duì)組織的損傷，一定程度延緩皮膚衰老。但最佳的給藥途徑、時(shí)間和濃度有待進(jìn)一步的深入研究。絞股藍(lán)皂苷是否還可以通過(guò)其他機(jī)制減輕或改變自然衰老皮膚的損傷可成為研究人員探索的新方向。

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編輯/張惠娟

Study on the effect of gypenosides on antioxidative injury in aged mice skin

SU Qiu-xiang1,CONG Jing2,GONG Qian3
（1.Morphology Central Lab,Shenyang Medical College,Shenyang 110034,Liaoning,China; 2.Department of Histology-embryology,Shenyang Medical College,Shenyang 110034,Liaoning,China; 3.Shenyang Medical College,Shenyang 110034,Liaoning,China）

ObjectiveTo study the antioxidative protection of Gypenosides in aged mices skin. Methods 60 mices were selected and randomly divided into 3 groups:young control group(group A),aged control group(group B)and aged dose group(group C).In group A and group B,normal saline(20ml/kg)was given intragastricly.Gypenosides extracts at doses of 8g/kg was administered intragastricly in group C,once a day.Skin tissue from treated mices were prepared for analysis 30 days after treatments.Relative level changes of MDA,SOD,CAT and GSH-Px were measured. Results Increases in MDA and decreases in SOD,CAT and GSH-Px were observed in both group B and group C as compared with group A(<0.05).Compared with mices in group B,mices in group C showed significant decreases in MDA and increases in SOD,CAT and GSH-Px(<0.05). ConclusionIntragastric administration of Gypenosides extracts to mices could alleviate the oxidative injury to aged skin,and therefore could delay the skin aging in mices.

Gypenosides;antioxidative injury;aged skin

R339.3+8

A

1008-6455（2015）03-0034-02

2014-11-28

2015-01-27