尹艾萍，付玉嬪，2，包松蓮，祁榮頻，2，毛云玲，郝佳波，2，司馬永康，2，張榮貴，劉冬芬

(1．云南省林業(yè)科學(xué)院，云南 昆明650201;2．云南省森林植物培育與開發(fā)利用重點(diǎn)實驗室;國家林業(yè)局開放性重點(diǎn)實驗室云南珍稀瀕特森林植物保護(hù)和繁育實驗室，云南 昆明650201;3．中國林業(yè)科學(xué)研究院資源昆蟲研究所，云南 昆明650224;4．紅河州林業(yè)科學(xué)研究所，云南 蒙自661199)

黑老虎 (Kadsura coccinea)為五味子科(Schisandrac)南五味子屬 (Kadsura)木質(zhì)藤本植物，別名冷飯團(tuán)、過山龍?zhí)?、血藤泡?“布福娜”等。具有藥用、食用、觀賞及藤用等多種用途。其從根至葉均可入藥，具消腫、解毒、治療跌打損傷、中樞抑制、安神、強(qiáng)壯等多種功效，近年的研究亦發(fā)現(xiàn)，其主要有效成分為木脂素類和三萜類成分，其中有20多個為該植物特有成分，這些化學(xué)成分具有抗氧化、抗HIV病毒、拮抗血小板活化因子、抗腫瘤等活性［1～6］。其果實可食，果大、味酸甜，富含多種人體必需的氨基酸和微量元素［7］，無毒并具有調(diào)節(jié)血脂的作用［8］，而且果皮對傷寒沙門氏菌有顯著地抑制作用［9］，亦是一種具有潛在開發(fā)價值的珍稀野生水果［10～12］。黑老虎葉大有光澤、四季常綠，花色艷麗、豐富，木質(zhì)藤體可任意造型，可制作盆景或供園林綠化用。黑老虎常生于海拔1 500～2 200 m的山地疏林中，常纏繞于大樹上。四川、浙江、廣西、貴州、江西、福建、廣東、湖南、海南、香港、云南等地有分布，在云南主要分布于屏邊、金平、河口、景東、普洱、景洪、勐海、文山等縣 (市)，越南也有分布。目前，關(guān) 于 黑 老 虎 的 引 種 栽 培［13～14］、 化 學(xué) 成分［2，4，14］、藥理活性［3］、微量元素［15～16］等有相關(guān)報道，但其苗木質(zhì)量分級研究尚無相關(guān)報道。苗木是開展人工培育的物質(zhì)基礎(chǔ)，苗木質(zhì)量的好壞直接影響培育的成效，本項研究通過對其容器苗質(zhì)量進(jìn)行分級，提出黑老虎人工培育的合格苗木標(biāo)準(zhǔn)，從而為黑老虎人工引種栽培提供科學(xué)依據(jù)。

1 引種地點(diǎn)自然概況

黑老虎容器苗培育試驗地位于昆明市黑龍?zhí)兜脑颇鲜×謽I(yè)科學(xué)院苗圃內(nèi)。該地屬北亞熱帶半濕潤高原季風(fēng)氣候，年均溫14．7℃，海拔1 970 m，年平均降雨量1 000 mm左右，干濕季節(jié)明顯，年均相對濕度68．2%，絕對最高溫31．5℃，≥10℃的積溫4 799．3℃，平均霜期85天，全年日照時數(shù)大于2 239．3 h，降雪與晚霜形成“倒春寒”，可導(dǎo)致植物的凍害。土壤為山地紅壤，較粘重、板結(jié)，保水、保肥性弱。

表1 黑老虎不同種源采集地的信息Tab．1 Collection sites of different provenance of Kadsura coccinea

2 材料與方法

2.1 材料

2013年11-12月收集了云南省6個產(chǎn)地的黑老虎種子 (種源信息見表1)。2014年1月將不同種源黑老虎種子分別進(jìn)行濕沙催芽，2月初種子露白時播入沙床培育芽苗，3月初分別移入營養(yǎng)袋培育容器苗，容器規(guī)格為12 cm×15 cm，苗期管理方法一致。11月29日調(diào)查其藤高和地徑，每個種源隨機(jī)調(diào)查30個無病蟲害單株，并進(jìn)行表型特征觀察和記錄。

2.2 苗木分級方法

2．2．1 苗木分級指標(biāo)確定

黑老虎為木質(zhì)藤本植物，苗期與木本植物生長特點(diǎn)相近，所以本項研究采用木本植物苗木質(zhì)量研究方法［17］進(jìn)行苗木質(zhì)量評價。以苗高 (H)與地徑 (D)作為黑老虎容器苗的苗木質(zhì)量分級指標(biāo)，同時參考藤本植物的生長特性，結(jié)合表型性狀進(jìn)行苗木質(zhì)量分級。

2．2．2 苗木分級標(biāo)準(zhǔn)的計算

(1)數(shù)值標(biāo)準(zhǔn)化

由于藤高和地徑的質(zhì)量級不同，為使數(shù)據(jù)值能在同一水平上進(jìn)行計算和分析比較，必須對所有觀測數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。采用極差法公式進(jìn)行數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化［18］，

①，式中，Zij為標(biāo)準(zhǔn)化值;i為藤高或地徑;j為樣苗號 (1，2，3…30);Xi(max)、Xi(min)分別為所觀測的總體樣本中的藤高或地徑的極大值和極小值。

(2)分級

以屏邊種源H1為例，用8月齡黑老虎苗的藤高、地徑標(biāo)準(zhǔn)化值之和做出一維坐標(biāo)圖 (圖1)。在以往的研究做出一維圖時，根據(jù)自己的經(jīng)驗分級，然后再用歐式距離進(jìn)行校正［19］。本項研究做出一維圖后，不直接進(jìn)行經(jīng)驗分級，而是結(jié)合聚類分析結(jié)果 (圖2)互為參考進(jìn)行初始分級。然后根據(jù)初始分級的結(jié)果，采用歐式距離最小法進(jìn)行校正，只到歐式距離最短時為最終分級［18］。

圖1 8月齡黑老虎H1種源的藤高、地徑標(biāo)準(zhǔn)化值之和一維圖Fig．1 The one-dimensional graphs of sum of standardized value of plant height，ground diameter of Kadsura coccinea 8-month-old seedling

圖2 8月齡黑老虎H1種源的藤高、地徑標(biāo)準(zhǔn)化值之和聚類結(jié)果圖Fig．2 SPSS dendrogram of the sum of standardized value of height，ground diameter of 8-month-old Kadsura coccinea seedlings

2．2．3 臨界值確定

逐步聚類分級的結(jié)果是各級苗木凝聚在以該級最終凝聚中心為圓心，d為半徑的圓內(nèi)。過大的苗木在Ⅰ級苗的上方，過小的苗木在Ⅱ級的下方，因此只要求出Ⅰ、Ⅱ級苗的下限，就可準(zhǔn)確地確定各級別的界限［19］。計算公式為，②，x=Dx③，y=H④，其中，K=1，SH標(biāo)、SD標(biāo)為各級苗木的藤高、地徑標(biāo)準(zhǔn)化值的標(biāo)準(zhǔn)差。HⅠ下=HⅠ-x1，DⅠ下=DⅠ-y1;HⅡ下=HⅡ-x2，DⅡ下=DⅡ-y2。將 HⅠ下、DⅠ下和 HⅡ下、DⅡ下帶入數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化公式后即可求得Ⅰ級和Ⅱ級苗木下限臨界值。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同種源分級結(jié)果

不同種源黑老虎8月齡苗木分級結(jié)果見表2。從表2可以看出，在一致的自然環(huán)境、相同的管理措施和相同的生長時間下，不同種源黑老虎苗木分級結(jié)果存在差異，在出圃時應(yīng)該區(qū)別對待，不合格苗木應(yīng)留圃繼續(xù)培養(yǎng)。此外，不同種源8月齡的苗木其合格苗比例也有差異，其中以H1種源最低，不到50%，其它種源合格苗都在50%以上。分析原因可能是黑老虎高生長過快，影響了其地徑的生長，造成藤高與地徑的生長不協(xié)調(diào)，影響了苗木的質(zhì)量。所以在育苗時可采取斷頂、控制水分或增加容器規(guī)格等措施促進(jìn)黑老虎苗木地徑生長和苗木木質(zhì)化程度。

不同產(chǎn)地黑老虎苗木的平均藤高的高低順序依次為，H1(屏邊)＞H3(普文)＞H2(河口)＞H5(勐海)＞H6(大渡崗)＞H4(景東);地徑的高低順序為，H3(普文)＞H6(大渡崗)＞H5(勐海)＞H4(景東)＞H2(河口)＞H1(屏邊)。從藤高排序結(jié)果可知，H1種源的藤體生長旺盛，約是其他種源的1．5～3倍，從抽梢習(xí)性來看，11月初還在抽梢，12月中下旬頂芽形成或不形成頂芽，H2種源與H1種源生長特性相近，但種子發(fā)芽時間長，苗期生長較慢。其他種源僅有少數(shù)不形成頂芽，頂芽形成時間為10月底-11月底。從黑老虎苗木地徑排序情況看，以H3種源地徑生長快，而藤高生長最快的H1種源，地徑生長卻是最慢的。綜合黑老虎藤高和地徑指標(biāo)，6個種源在昆明地區(qū)生長優(yōu)劣順序為，H3(普文)＞H6(大渡崗)＞H5(勐海)＞H2(河口)＞H1(屏邊)＞H4(景東)。

表2 6個種源黑老虎8月齡苗木的分級結(jié)果Tab．2 Grading results of 8-month-old Kadsura coccinea seedlings of six provenances

3.2 不同種源苗期生長差異

將6個種源的藤高、地徑進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表3。從表3可以看出，不同產(chǎn)地之間8月齡的苗木藤高和地徑差異都極顯著。

表3 不同種源黑老虎8月齡苗木藤高、地徑方差分析結(jié)果Tab．3 ANOVA analysis of height and ground diameter of 8-month-old Kadsura coccinea seedlings of different provenances

4 結(jié)論與討論

對苗木質(zhì)量評價一般從2個方面來看，一個是從表型判定，即有無病蟲害、機(jī)械損傷、頂芽飽滿情況、葉色、木質(zhì)化程度等形態(tài)指標(biāo)正常與否;另一個是對苗木鮮重、苗高、地徑等數(shù)量指標(biāo)的綜合評價。苗木分級指標(biāo)的確定主要是指評價苗木質(zhì)量的數(shù)量指標(biāo)的確定。評價苗木的數(shù)量指標(biāo)很多，且很多可操作性差，所以需要從這些指標(biāo)中選擇出符合以下2個條件的指標(biāo)來:一要保證具有足夠的信息量，二要在生產(chǎn)實踐中具有實際可操作性。從苗木生長因子相關(guān)性分析的研究結(jié)果［20～23］可以看出，它們具有基本一致的規(guī)律:都是以苗木全株鮮重為相關(guān)的中心，最能體現(xiàn)苗木質(zhì)量，鮮重越重，苗木質(zhì)量越好，是評價苗木質(zhì)量的最佳指標(biāo)，但生產(chǎn)中不易操作。其余各測定指標(biāo)中與全株鮮重相關(guān)最緊密的依次為:地上部分的重量或地下部分的重量、苗高、地徑、葉片數(shù)、根莖比、根長等。苗木各指標(biāo)間的相關(guān)性，一方面反映了苗木各器官之間相對均衡的生長作用，即其整體性;另一方面又說明了評價苗木質(zhì)量時可選擇相關(guān)性較緊密的相對較少的指標(biāo)。在這些指標(biāo)中，苗木全株鮮重或干重、地上、地下部分重量都不具備實際可操作性，綜合考慮，地徑、苗高與全株鮮重相關(guān)性較強(qiáng)，且這2個指標(biāo)在生產(chǎn)實踐中較易實施。所以，本研究直接以黑老虎苗木的藤高和地徑作為數(shù)量指標(biāo)評價的標(biāo)準(zhǔn)，不僅直觀性強(qiáng)，操作也方便，在生產(chǎn)中比較容易實施。

在苗木質(zhì)量分級研究中一般都分作3級，第3級都作為不合格苗，而生產(chǎn)上往往僅分作2級，即合格苗與不合格苗。本研究以為生產(chǎn)提供依據(jù)，用藤高和地徑作為綜合評價指標(biāo)，采用逐步聚類分析方法，將苗木分為3級，Ⅰ、Ⅱ級苗為合格苗，Ⅲ級苗為不合格苗，從而提出云南6個產(chǎn)地的8月齡黑老虎實生容器苗合格苗木的數(shù)量質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):屏邊種源，H≥44．4 cm，D≥0．39 cm;河口種源 H≥22．2 cm，D≥0．40 cm;普文種源，H≥24．1 cm，D≥0．48 cm;景東種源，H ＞ 14．7 cm，D≥0．38 cm;勐海種源，H＞21．2 cm，D≥0．41 cm;大渡崗種源，H＞19．0 cm，D≥0．47 cm。此外，合格苗還應(yīng)具有枝葉繁茂，葉色正常，無病蟲危害，無機(jī)械損傷，木質(zhì)化程度高等形態(tài)特征，屏邊種源因其生長旺盛，對低溫反應(yīng)敏感性差，頂芽形成較少外，其余種源還應(yīng)具備頂芽飽滿健壯等質(zhì)量特征。由于不同的氣候環(huán)境和立地條件影響，不同地區(qū)黑老虎苗期的生長和頂芽形成可能有差異，本研究提出的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅對昆明地區(qū)8月齡黑老虎苗期培育提供參考。

方差分析結(jié)果表明，云南6個產(chǎn)地黑老虎幼苗生長有極顯著差異 (P＜0．001)，在昆明培育的8月齡容器苗以普文種源生長較好，其次是大渡崗、勐海、河口、屏邊，景東種源的藤高、地徑生長量較小。屏邊種源藤高生長過盛，影響了地徑的生長，導(dǎo)致苗木綜合質(zhì)量下降，因此，應(yīng)在育苗期間進(jìn)行斷頂促進(jìn)其地徑生長和木質(zhì)化，斷頂適宜高度有待作進(jìn)一步試驗研究決定。

關(guān)于藤本植物苗木質(zhì)量研究鮮有報道。僅見于羅漢果 (Siraitia grosuenorii)采用組織培養(yǎng)培育壯苗中，以株高、莖粗、葉面積等生長性狀指標(biāo)作為考察指標(biāo)［24］，從而選擇其培育壯苗的體系。本研究初次采用藤高、地徑2個數(shù)量指標(biāo)對木質(zhì)藤本植物的苗木質(zhì)量進(jìn)行了分級和評價，剔除了人為影響，其結(jié)果更趨于科學(xué)合理，但由于其本身的攀援特性，株高生長速度快，往往會間接地影響地徑的生長，采用地徑、藤高標(biāo)準(zhǔn)化值之和進(jìn)行逐步聚類分級的方法可能導(dǎo)致合格苗比例下降，所以，在其評價中是否應(yīng)該加入藤高和地徑的比值范圍還有待進(jìn)一步研究。

［1］王楠，李占林，華會明．黑老虎根化學(xué)成分的研究［J］．中草藥，2010，41(2):195-197．

［2］舒永志，成亮，曺濬喆，等．黑老虎的化學(xué)成分研究［J］．中草藥，2012，43(3):428-431．

［3］石焱芳，陳海玲．黑老虎的藥理活性成份研究進(jìn)展［J］．海峽藥學(xué)，2013，25(7):67-69．

［4］王楠，李占林，劉曉秋．黑老虎根化學(xué)成分的研究(Ⅱ)［J］．中國藥物化學(xué)雜志，2012，2(4):305-309．

［5］延在昊，成亮，孔令義，等．黑老虎化學(xué)成分及其抗氧化活性研究［J］．中草藥，2013，44(21):2969-2973．

［6］Liu J S，Li L．Kadsulignans L-N，three dibenzocyclooctadiene lignans from Kadsura coccinea［J］．Phytochemistry，1995，38(1):241-245．

［7］李順祥．冷飯團(tuán)的氨基酸及微量元素測定［J］．湖南中醫(yī)雜志，1996，12(6):48．

［8］李志春，孫健，封毅，等．黑老虎果毒理實驗及其對血脂的調(diào)節(jié)作用［J］．食品科學(xué)，2011，32(1):203-205．

［9］封毅，李志春，孫健，等．黑老虎果皮體外抑菌活性的初步研究［J］．時珍國醫(yī)國藥，2011，22(4):822-824．

［10］田定科．野生果樹資源-冷飯團(tuán)的利用初探［J］．中國果業(yè)信息，2006，23(2):28．

［11］邵則夏．五味子的食用藥用價值與開發(fā)利用［J］．中國野生植物資源，1995(4):33-35．

［12］陶光林，歐建．經(jīng)濟(jì)藤本植物冷飯團(tuán)的初步研究［J］．貴州林業(yè)科技，2003，31(3):8-10，16．

［13］唐輝，韋霄，蔣運(yùn)生，等．冷飯團(tuán)引種栽培試驗［J］．中國南方果樹，35(5):23-24．

［14］吳智濤．冷飯團(tuán)特性及其栽培技術(shù)［J］．中國園藝文摘，2012(6):190-192．

［15］段永泉，黃鎖義，許運(yùn)智，等．云南黑老虎中微量元素的測定［J］．微量元素與健康研究，2004，21(4):32-33．

［16］黃鎖義，龍碧波，文輝忠．廣西黑老虎中微量元素測定［J］．理化檢驗-化學(xué)分冊，2006，42(10):807-808．

［17］付玉嬪，祁榮頻，李玉媛．櫸樹容器苗苗木分級與種源研究［J］．廣西林業(yè)科學(xué)，2005，34(3):127-131．

［18］包松蓮，李志國，張建云．塔拉容器實生苗質(zhì)量分級標(biāo)準(zhǔn)的研究［J］．中國農(nóng)學(xué)通報，2015，31(1):47-52．

［19］蔣水元，李虹，黃夕洋，等．兩面針苗木分級標(biāo)準(zhǔn)的研究［J］．福建林業(yè)科技，2010，37(4):87-90．

［20］方碧江．降香黃檀苗木分級標(biāo)準(zhǔn)的探討［J］．福建熱作科技，2009，34(4):30-32．

［21］竇全琴，仲磊，張敏，等．櫸樹苗木質(zhì)量分級研究［J］．江蘇林業(yè)科技，2009，36(1):1-4，14．

［22］楊斌，趙文書，姜遠(yuǎn)標(biāo)，等．思茅松容器苗苗木分級研究［J］．西部林業(yè)科學(xué)，2004，33(1):32-37．

［23］楊斌，趙文書，陳建文，等．西南樺容器苗苗木分級研究［J］．云南林業(yè)科技，2003，32(2):17-21．

［24］姚紹嫦，潘麗梅，白隆華，等．正交試驗優(yōu)選羅漢果組培苗生根壯苗生產(chǎn)工藝［J］．種子，2014，33(5):118-120．