宋艷紅，崔 穎（武漢科技大學附屬天佑醫(yī)院，武漢 430064）

·藥劑·

鹽酸文拉法辛溫敏型原位凝膠的研制

宋艷紅，崔 穎＊（武漢科技大學附屬天佑醫(yī)院，武漢 430064）

目的 確定鹽酸文拉法辛溫敏型原位凝膠的基質(zhì)處方。方法 以不同質(zhì)量濃度泊洛沙姆作為溫敏材料，用卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素作黏膜黏附劑，考察凝膠的相變溫度和黏附力，優(yōu)選基質(zhì)處方。結(jié)果 確定180g·L－1泊洛沙姆407和3.0g·L－1聚乙烯吡咯烷酮組合作為鹽酸文拉法辛溫敏型原位凝膠的處方基質(zhì)，其膠凝溫度為31.7℃，黏附力98.1 g·cm－2。結(jié)論 選定的基質(zhì)處方可用于制備鹽酸文拉法辛溫敏型原位凝膠。

鹽酸文拉法辛；泊洛沙姆；溫敏；原位凝膠

鹽酸文拉法辛（venlafaxine hydrochloride，簡稱VH）是5－HT和NA雙重再攝取抑制藥的代表藥物，在臨床上被廣泛用于治療各種類型抑郁癥，同時被用于臨床治療強迫癥、精神分裂癥、社交恐懼癥、創(chuàng)后應激障礙、經(jīng)期前心境惡劣障礙等疾?。?］。

鼻腔給藥在治療疾病方面發(fā)揮著獨特的作用，主要特點是鼻腔吸收迅速、生物利用度較口服給藥更高，無肝臟首過效應，避免了藥物的胃腸道反應，給藥簡便，用量少［2］，并且鼻腔給藥后藥物分子可滯留于嗅部黏膜而吸收進入腦部，繞過血腦屏障，起到治療作用［3］。原位凝膠（in situ gel）是指以溶液狀態(tài)給藥后，可在給藥部位立即發(fā)生相變的制劑，獨特的溶液－凝膠轉(zhuǎn)變性質(zhì)，兼有制備簡單、使用方便、滯留時間長等優(yōu)點［4］。本文以溫敏性聚合物泊洛沙姆407為載體制備文拉法辛鼻用凝膠，采用原位凝膠技術(shù)，使凝膠在鼻腔內(nèi)原位凝膠化并迅速黏附于黏膜表面，延長藥物在黏膜表面的吸收時間，提高藥物療效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC－10Avp型高效液相色譜儀（日本島津，SPD－10Avp紫外檢測器，島津Class－vp色譜工作站）；ME215S電子分析天平（德國Sartorius公司）；超聲波溶解儀（上海寧商超聲儀器有限公司）；自制黏附力測定裝置（自制）。

2.2 試藥 文拉法辛原料藥（華北制藥集團海翔醫(yī)藥公司，藥用級，批號20080525）；文拉法辛對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100543－201101，質(zhì)量分數(shù)99.88%）；泊洛沙姆407，188（P407，P188，德國BASF公司）；殼聚糖（浙江金殼生物化學有限公司，藥用級，批號20110917）；聚乙交酯丙交酯－聚乙二醇－聚乙交酯丙交酯（PLGA－PEG－PLGA，上海麗昂化學有限公司，藥用級，批號20100411）；卡波姆934（廊坊聚通化工有限公司，藥用級，批號20090723）；聚乙烯吡咯烷酮（PVP K30，上海協(xié)泰化工有限公司，藥用級，批號20090317）；羥丙基甲基纖維素（HPMC K4M，山東聊城阿華制藥有限公司，藥用級，批號20091215）；鹽酸文拉法辛片（常州四藥制藥有限公司，25mg／片，批號20130517）；甲醇（天津市科密歐化學試劑有限公司，色譜純）；乙腈（Sigma Aldrich Inc，色譜純）。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方設(shè)計

2.1.1 原位凝膠材料的篩選和相變溫度的測定 分別選用不同質(zhì)量濃度泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、殼聚糖、PLGA－PEG－PLGA，并采用攪拌子轉(zhuǎn)動法［5］測定膠凝溫度。在西林瓶中裝入溫敏型凝膠溶液10g和攪拌子，插入精度為0.1℃的精密溫度計，溫度計的水銀球完全浸沒在凝膠溶液中，將其放入低溫（＜10℃）水域中，轉(zhuǎn)速300r·min－1，保持水溫持續(xù)緩慢升溫，升溫速率約1～2℃·min－1。隨著溫度升高，凝膠溶液黏度也逐漸增大，將磁力攪拌子完全停止轉(zhuǎn)動的溫度定為膠凝溫度，每個樣品平行測定6次，結(jié)果取平均值。各原位凝膠材料的相變溫度結(jié)果見表1。

表1 原位凝膠材料相變溫度Tab.1 Temperature of in situ gel material phase change（n＝6）

由表1可知，泊洛沙姆188、殼聚糖、PLGAPEG－PLGA3種原位凝膠材料相變溫度范圍大，不易控制質(zhì)量濃度，并且單純的殼聚糖溫度敏感凝膠力學強度較低，在體溫下凝膠形成的速度不易控制［6］，故選用泊洛沙姆407進行進一步的研究。2.1.2 原位凝膠質(zhì)量濃度的優(yōu)化 合適的鼻腔給藥體積在0.15mL左右，為保證文拉法辛的用量（1次25mg，1日2～3次），確定原位凝膠中文拉法辛含量為200g·L－1（相當于鹽酸文拉法辛226.0g）的前提下，采用單因素考察泊洛沙姆407質(zhì)量濃度對載藥凝膠相變溫度的影響，確定最佳泊洛沙姆407的質(zhì)量濃度。精密稱取泊洛沙姆適量，配制成各種質(zhì)量濃度的溶液，按2.1.1法測定相變溫度，結(jié)果見表2。

表2 泊洛沙姆質(zhì)量濃度篩選Tab.2 Screening of poloxamer concentration（n＝6）

由表2結(jié)果可知，不同質(zhì)量濃度泊洛沙姆407的水溶液和載藥文拉法辛的相變溫度都與泊洛沙姆407質(zhì)量濃度呈負相關(guān)，當在泊洛沙姆407溶液中加入文拉法辛后凝膠的相變溫度有顯著性提高。泊洛沙姆的質(zhì)量濃度過高或過低對原位凝膠的制備及質(zhì)量影響較大，我們經(jīng)過實驗并結(jié)合相關(guān)文獻［7－8］，選擇泊洛沙姆407質(zhì)量濃度為180g·L－1，相變溫度在29～32℃范圍內(nèi)的A8組別作進一步研究。

2.1.3 黏膜黏附劑的選擇 原位凝膠不僅需要具有適宜的相變溫度，使其能在人體生理溫度下發(fā)生相轉(zhuǎn)變，且應具有合適的黏附性，經(jīng)鼻內(nèi)給藥后可在體溫時膠凝，且給藥后不會從體內(nèi)黏膜上脫落。在確定泊洛沙姆407和文拉法辛的質(zhì)量濃度后，選用不同的高分子黏膜黏附劑進行黏附力大小比較，結(jié)果見表3。

表3 黏附劑種類和質(zhì)量濃度篩選Tab.3 Screening of the type and concentration of adhesion agent（n＝6）

由表3結(jié)果可知，隨著高分子黏膜黏附劑質(zhì)量濃度的增加，凝膠的黏附力增大，而相變溫度卻顯著降低。以卡波姆934作黏附劑時相變溫度過低，而羥丙基甲基纖維素作黏附劑時黏附力太大，均不符合要求。查閱相關(guān)資料，鼻腔內(nèi)溫度為32～34℃［9］，綜合相變溫度和黏附力的指標，選用B5作為適宜處方進行進一步研究。

2.2 制備方法 取鹽酸文拉法辛22.6g、PVP0.3g和尼泊金0.1g，溶于適量蒸餾水中，將該溶液冷卻至4℃；緩慢加入泊洛沙姆，邊加邊攪拌，最后蒸餾水加至100g，將混合物置于4℃過夜，得無色透明黏液，即為文拉法辛溫敏型原位凝膠，分裝于密閉容器中，貯存于陰涼處。

2.3 含量測定 采用HPLC法測定制劑中鹽酸文拉法辛的含量［10］。

2.3.1 測定波長的選擇 取鹽酸文拉法辛對照品適量，分別以蒸餾水、0.1mol·L－1鹽酸溶液、pH6.8磷酸鹽緩沖溶液為溶劑，稀釋成適當質(zhì)量濃度的溶液，在200～400nm波長范圍內(nèi)進行紫外掃描，結(jié)果表明，鹽酸文拉法辛在上述溶液中于226nm處有最大吸收，因此確定測定波長為226nm。

2.3.2 色譜條件 色譜柱：大連依利特C18柱（250 mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈－甲醇－0.02mol·L－1磷酸二氫鈉溶液（25∶15∶60，用10mL·L－1磷酸調(diào)pH值3.0）；流速：1mL·min－1；檢測波長：226nm；柱溫：30℃；進樣量：20μL。

2.3.3 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸文拉法辛對照品適量，加流動相溶解并稀釋至質(zhì)量濃度約2 mg·mL－1的儲備液，搖勻即得。

2.3.4 供試品溶液的制備 精密稱取鹽酸文拉法辛原位凝膠0.2g，置于50mL量瓶中，用流動相超聲30min充分溶解，搖勻，濾膜過濾，濾液儲存?zhèn)溆谩?/p>

2.3.5 陰性對照溶液的制備與干擾實驗 取處方量的各輔料，制備不含鹽酸文拉法辛的空白凝膠，照2.3.4項下方法制成陰性對照品溶液，依法進樣，輔料在文拉法辛相應保留時間的位置并沒有出峰，說明輔料不會干擾鹽酸文拉法辛的含量測定。結(jié)果見圖1。

2.3.6 線性關(guān)系考察 精密量取2.3.3項下對照品溶液適量，以流動相稀釋至質(zhì)量濃度為0.2，0.4，0.8，1.6，3.2，6.4，12.8和25.6μg·mL－1的系列標準溶液，各進樣20μL，記錄峰面積，以質(zhì)量濃度（C）對峰面積（A）進行線性回歸，標準曲線：A＝1 754.31C＋202.47（r＝0.999 0，n＝7）。結(jié)果表明，鹽酸文拉法辛進樣量在0.4～25.6μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.7 重復性實驗 分別精密稱取同一批樣品（批號20131115－1）5份，照供試品溶液的制備項下方法制成供試品溶液，進樣20μL測定，求得相對標準偏差為RSD為1.24%（n＝5），表明重復性良好。

2.3.8 回收率實驗 采用加樣回收法。稱取已知含量的同一批樣品（批號20131115－1）9份，分成3組，分別精密加入80%，100%和120%的對照品溶液，按樣品含量測定項下的方法測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算含量，測得鹽酸文拉法辛平均回收率為98.76%和RSD為1.71%（n＝9）。

2.3.9 樣品的含量測定 精密稱取鹽酸文拉法辛原位凝膠0.2g，置于50mL量瓶中，用流動相超聲30 min充分溶解，搖勻后濾膜過濾，精密量取續(xù)濾液5 mL，置于100mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，平行測定5次；另取2.3.3項下溶液稀釋后同法進行測定，按外標法以峰面積計算，含量均在標示量的97.25%～101.76%（n＝5）之間，符合規(guī)定。結(jié)果見圖1。

圖1 HPLC圖A.對照品；B.供試品；C.陰性樣品；1.鹽酸文拉法辛Fig.1 HPLC chromatogramsA.reference substance；B.samples；C.negative samples；1.venlafaxine hydrochloride

2.4 原位凝膠與片劑體外釋放度比較 采取振蕩透析釋放法［11］比較文拉法辛原位凝膠和片劑的釋放度。釋放介質(zhì)為pH6.8磷酸鹽緩沖液，溫度定為34 ±0.5℃，振蕩頻率為60次·min－1。稱取制得的鹽酸文拉法辛原位凝膠溶液0.2g，加入透析袋內(nèi)，將透析袋開口用繩子扎緊，置于37℃烘箱中5min，使溶液形成凝膠，再置于盛有100mL釋放介質(zhì)的具塞錐形瓶中，置于恒溫振蕩器中，并于0，1，2，4，8，12和24h分別移取釋放液2mL，取出后迅速補加等量的新鮮介質(zhì)。同法取文拉法辛片劑（每次1片）進行對比操作。取出的釋放液經(jīng)0.22μm微孔濾膜濾過后，照含量測定方法項下測定藥物含量，計算各時間點的累積釋放百分率（n＝6），結(jié)果見圖2。方差分析結(jié)果見表4。

圖2 鹽酸文拉法辛原位凝膠和片劑的體外累積釋放度Fig.2 Cumulative release in vitro of thermoreversible in situ gel and tablets of venlafaxine hydrochloride

表4 方差分析結(jié)果Tab.4 Results of variance analysis

鹽酸文拉法辛原位凝膠快速均衡釋放，在8h后達到穩(wěn)定狀態(tài)，然后緩慢持續(xù)釋放并達到累積釋放度87.6%，藥物釋放比較完全。片劑釋藥較慢且呈不規(guī)則狀態(tài)，累積釋放度較原位凝膠小，但兩者無顯著性差異（P＞0.1）。2.5 膠凝溫度和黏附力的測定 稱取放置4℃過夜的樣品5g，按2.1.1項下方法測定樣品的膠凝溫度，結(jié)果見表5。目前體外檢測生物黏附制劑黏附性能大多還是采用施加壓力的方法［12］，將放置4℃過夜的樣品5g，置于36.5℃恒溫水浴中加熱30min待其膠凝后，采用自制的黏附力測定裝置［13］測定原位凝膠的黏附力，結(jié)果見表5。結(jié)果表明，5批樣品的膠凝溫度及黏附力在規(guī)定范圍內(nèi)，均符合要求。

表5 樣品的膠凝溫度及黏附力測定結(jié)果Tab.5 Measurement results of gelation temperature and adhesion force of samples （n＝5）

2.6 無菌和微生物限度的檢查 照《中國藥典》無菌檢查法和微生物限度檢查法［14］檢查，結(jié)果均符合規(guī)定。

3 討論

溫敏型凝膠是利用外界條件和用藥部位的溫度差異，使聚合物發(fā)生相轉(zhuǎn)變的系統(tǒng)，在室溫或較低溫度條件下為液態(tài)，當環(huán)境溫度升高至相變溫度時形成具有一定機械強度的凝膠，黏附于用藥部位，達到緩釋藥物的目的。本制劑即是采用此原理以泊洛沙姆為載體制成溫敏型原位凝膠，以溶液形式通過鼻腔給藥后形成具有一定黏附力的凝膠，使鹽酸文拉法辛達到緩釋給藥的目的［15］。

泊洛沙姆407溶液具有反向膠凝的特性，當溫度升高時可由溶液狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)槟z狀態(tài)，其機制是泊洛沙姆分子在水溶液中形成以疏水性PPO為內(nèi)核、以親水性PEO為外殼的球狀膠束，當溫度升高至膠凝溫度時，膠束間相互纏結(jié)和堆積，從而形成半固體狀的凝膠。當泊洛沙姆407質(zhì)量濃度升高時溶液中的膠束數(shù)量和所占體積就越大，升高溫度時，膠束就越早發(fā)生堆砌和纏結(jié)，因此實驗中隨著泊洛沙姆407質(zhì)量濃度的增加，溶液的膠凝溫度就越低。

聚乙烯吡咯烷酮是性能優(yōu)異、用途廣泛的水溶性高分子材料，它作為生物黏附劑能與生物組織之間發(fā)生黏合，可使凝膠較好地黏附于黏膜表面，延長藥物與黏膜的接觸時間及藥效的特續(xù)時間，并且對黏膜的刺激性小，有利于制劑的長期使用。

本文通過考察不同質(zhì)量濃度的泊洛沙姆對相變溫度的影響，選用不同的高分子黏膜黏附劑進行黏附力大小比較，并從主藥的含量測定、體外釋放度、原位凝膠的相變溫度、黏附力測定、無菌和微生物限度的檢查幾個方面，對鹽酸文拉法辛溫敏型原位凝膠進行了質(zhì)量評價，篩選出了最佳配方。

［1］ 李潔，馬崔.文拉法辛的藥理特點及臨床應用［J］.山東精神醫(yī)學，2005，18（4）：276－279.

［2］ 潘嘉.鼻黏膜毒性研究進展［J］.西北藥學雜志，2005，20（2）：88－89.

［3］ 王峰，蔣新國.鼻黏膜作為腦內(nèi)遞藥途徑的研究進展［J］.藥學學報，2001，36（8）：6361－6362.

［4］ 魏培，鄧樹海，李凌冰，等.原位凝膠緩釋給藥系統(tǒng)的研究進展［J］.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2007，38（12）：890－894.

［5］ 戴助，蔣學斌.陰道用塞克硝唑溫敏型原位凝膠的研制［J］.中國醫(yī)院藥學雜志，2011，31（11）：948－950.

［6］ 頊佳音，楊洪軍，熊欣，等.常見溫度敏感型原位凝膠載體的研究進展［J］.中國實驗方劑學雜志，2011，17（2）：252－257.

［7］ Mandar J，Bhandwalkar，Amelia M.Thermoreversible nasal in situ gel of venlafaxine hydrochloride formulation，characterization and pharmacodynamic evaluation［J］.AAPS Pharm Sci Tech，2013，14（1）：101－110.

［8］ 欒琳，甘勇，張馨欣，等.利巴韋林溫度－離子敏感型鼻用原位凝膠噴霧劑的制備及體外性質(zhì)考察［J］.沈陽藥科大學學報，2009，26（4）：249－253.

［9］ 吳杏梅.鹽酸格拉司瓊鼻用溫敏型凝膠的制備及其體外釋放度研究［J］.中國藥業(yè)，2008，17（16）：49－50.

［10］ 馮碧敏，鄧代全，張昊.高效液相色譜法測定鹽酸文拉法辛緩釋片的主藥含量［J］.中國醫(yī)院用藥評價與分析，2012，12（5）：440－442.

［11］ 趙泉，楊玉偉，鄧樹海，等.阿替洛爾鼻用凝膠劑的處方篩選［J］.中國醫(yī)院藥學雜志，2005，25（1）：27－29.

［12］ 高朝霞，蔣學華，張川川，等.體外黏附力的測定及在生物黏附制劑處方篩選的試用［J］.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2006，37（9）：606－609.

［13］ 張友智，崔穎，王靜.克霉唑陰道用乳凝膠的制備與質(zhì)量評價［J］.醫(yī)藥導報，2013，32（2）：244－247.

［14］ 國家藥典委員會.中國藥典2010年版［S］.二部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄ⅠU，ⅨE，ⅩF，ⅪH，ⅪJ.

［15］ 金璐燕，李娟.泊洛沙姆407在制劑中的應用進展［J］.藥學與臨床研究，2009，17（3）：231－233.

Preparation of thermoreversible in situ gel of venlafaxine hydrochloride

SONG Yanhong，CUI Ying＊（Affiliated Tianyou Hospital of Wuhan University of Science and Technology，Wuhan 430064，China）

Objective To prepare venlafaxine hydrochloride thermoreversible insitugel.Methods Thermosensitive polymer was prepared by using poloxamer in different concentration.Mucosa adhere was prepared using carbopol，PVP，and HPMC.The gelation temperature and the adhesion force of gel were tested to optimize the prescription base.Results 180g·L－1poloxamer and 3.0g·L－1PVP were found to be satisfactory compositions of the gel base.Its gelation temperature was 31.7℃，and the adhesion force was 98.1g·cm－2.Conclusion The selected base can be used for the preparation of thermoreversible in situ gel of venlafaxine hydrochloride.

venlafaxine hydrochloride；poloxamer；thermoreversible；in situ gel

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.02.019

R944

A

1004－2407（2015）02－0165－04

2014－11－26）

宋艷紅，女，主管技師

＊通信作者：崔穎，女，副主任藥師