馬燕萍，孫 蕓，王東東，3，田 莉，3＊（.新疆醫(yī)科大學(xué)校醫(yī)院，烏魯木齊 8300；.新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，烏魯木齊8300；3.新疆名醫(yī)名方與特色方劑學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 8300）

維藥材歐綿馬的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

馬燕萍1，孫 蕓2，王東東2，3，田 莉2，3＊（1.新疆醫(yī)科大學(xué)校醫(yī)院，烏魯木齊 830011；2.新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，烏魯木齊830011；3.新疆名醫(yī)名方與特色方劑學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830011）

目的 研究新疆產(chǎn)維藥材歐綿馬的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為該植物資源的開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。方法 采用性狀鑒別、顯微鑒別、薄層色譜法、紫外可見(jiàn)分光光度法對(duì)新疆不同產(chǎn)地的10批歐綿馬藥材進(jìn)行研究，對(duì)其水分、總灰分、酸不溶灰分、浸出物和總間苯三酚的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果 對(duì)新疆產(chǎn)歐綿馬藥材的性狀、顯微特征進(jìn)行了描述，建立了TLC定性鑒別方法，制訂了維藥材歐綿馬的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：水分、灰分、酸不溶灰分分別不得超過(guò)12.0%，15.0%和6.0%；醇溶性浸出物、總間苯三酚含量分別不少于20.0%和5.0%。結(jié)論 建立的方法簡(jiǎn)便、快速、重復(fù)性好，適用于歐綿馬藥材的質(zhì)量控制。

歐綿馬；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；總間苯三酚

維藥材歐綿馬為鱗毛蕨科鱗毛蕨屬植物歐洲鱗毛蕨Dryopteris filix－mas（L.）Schott的干燥根莖及葉柄殘基，異名克爾可斯、克里達(dá)如［1］，系多年生草本植物，國(guó)內(nèi)主要分布于新疆北部福海、奇臺(tái)、昌吉、塔城、和布克賽爾、博樂(lè)、霍城、尼勒克、新源、鞏留等縣，國(guó)外哈薩克斯坦、俄羅斯和歐洲亦有分布，生長(zhǎng)于海拔2 000米左右的陰濕山坡或河谷林下［1－3］，成群落分布。

維吾爾醫(yī)學(xué)認(rèn)為，歐綿馬具有清滌異物、消散寒濕的功效，臨床主要用于機(jī)體黏液質(zhì)偏盛、吞酸胃弱、尿頻腸阻、腸寄生蟲等癥，收錄于1999年出版的《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》（維吾爾藥分冊(cè)）［4］，歐綿馬中的間苯三酚類化合物具有驅(qū)蟲、抗菌、抗病毒、止血、解痙止痛及抗腫瘤等作用［3－5］。歐綿馬現(xiàn)行藥材標(biāo)準(zhǔn)中［4］僅有粗略的定性鑒別，無(wú)定量指標(biāo)，也未見(jiàn)質(zhì)量研究的相關(guān)文獻(xiàn)，為保證其用藥安全有效，本文參考相關(guān)文獻(xiàn)［6］對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Mikroskope Primo Star X2005型數(shù)碼顯微鏡（德國(guó)麥克奧迪實(shí)業(yè)有限公司）；XS105型電子天平（德國(guó)梅特勒－托利多儀器有限公司）；GBC Cinira－40型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（澳大利亞GBC科學(xué)儀器公司）；AK－1000A搖擺式中藥粉碎機(jī)（溫嶺市奧為中藥機(jī)械有限公司）；KQ3200DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；CS101型鼓風(fēng)干燥箱（中華人民共和國(guó)重慶實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠）。

1.2 試藥 本實(shí)驗(yàn)所用10批歐綿馬樣品均系野生采集的樣品，9批采自新疆伊犁地區(qū)，1批采自昌吉地區(qū)，經(jīng)李永和主任中藥師鑒定為歐洲鱗毛蕨Dryopteris filix－mas（L.）Schott，將藥材陰干，去除根莖及葉柄殘基以外的其他部分，粉碎，備用；綿馬貫眾素ABBA對(duì)照品（成都瑞芬思生物科技有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98%，批號(hào)M－040－111008）；堅(jiān)牢藍(lán)BB鹽（上海阿拉丁試劑有限公司，批號(hào)F106955）；水為蒸餾水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀 藥用根莖，呈圓柱形，長(zhǎng)10～15cm，直徑1～2cm，覆蓋著的葉柄殘基可達(dá)5cm。呈復(fù)瓦狀排列，互相密接處復(fù)有棕色膜狀鱗葉片。表面黑棕色，斷面淺綠色，葉柄基部長(zhǎng)約2cm，直徑0.7～1cm，略彎而側(cè)扁。氣微，味苦。

2.2 顯微鑒別

2.2.1 根莖的橫切面 根莖橫切面呈多角形。木栓細(xì)胞數(shù)列，內(nèi)含棕色物質(zhì)；薄壁組織含淀粉粒及色素塊，髓心四周有周韌型維管束（分體中柱）8～12個(gè)，周韌型；內(nèi)皮層凱氏點(diǎn)明顯；木質(zhì)部由梯紋、網(wǎng)紋、孔紋管和纖維組成；在薄壁細(xì)胞間隙中可見(jiàn)有小腺毛，直徑20～50μm；薄壁組織中散在有較多的葉跡維管束。見(jiàn)圖1。

圖1 歐綿馬根莖橫切面Fig.1 Transverse section of rhizome of Dryopteris filix－mas（L.）Schott

2.2.2 粉末特征 歐綿馬粉末黃棕色。鱗片表皮細(xì)胞由黃色狹長(zhǎng)薄壁細(xì)胞組成，可見(jiàn)橢圓形氣孔；管胞棱形或橢圓形，具孔紋；木栓細(xì)胞表面類圓形，縱面觀呈長(zhǎng)方形，常含棕色物質(zhì)，薄壁細(xì)胞多角形或類圓形，含淀粉粒，直徑5～15μm；細(xì)胞間隙偶見(jiàn)腺毛，常含棕紅色物質(zhì)，管胞孔紋、梯紋，偶有網(wǎng)紋，有的薄壁細(xì)胞和木栓細(xì)胞具孔紋。見(jiàn)圖2。

圖2 歐綿馬粉末Fig.2 Powder of Dryopteris filix－mas（L.）Schott

2.3 薄層鑒別 取本品粉末0.5g，加環(huán)己烷20mL，超聲提取30min，過(guò)濾，取濾液10mL濃縮至5mL，作為供試品溶液。另取歐綿馬對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按照《中國(guó)藥典》（2010年版）一部附錄方法，吸取2種溶液各4μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上［取硅膠G10g、枸櫞酸－磷酸氫二鈉緩沖液（pH7.0）10mL、維生素C 60mg、羧甲基纖維素鈉溶液20mL，調(diào)勻，鋪板，室溫避光晾干，50℃活化2h后備用］，以正己烷－三氯甲烷－甲醇（30∶15∶1）為展開(kāi)劑，薄層板置于展開(kāi)缸中預(yù)飽和2h，展開(kāi)，展距15cm以上，取出，立即噴以1g·L－1堅(jiān)牢藍(lán)BB鹽的體積分?jǐn)?shù)50%乙醇溶液，在40℃放置1h。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯紅色斑點(diǎn)。

2.4 檢查 水分、總灰分、酸不溶性灰分測(cè)定分別參照《中國(guó)藥典》（2010年版）一部附錄測(cè)定法；浸出物測(cè)定參照《中國(guó)藥典》（2010年版）一部附錄以體積分?jǐn)?shù)50%乙醇為溶劑，采用熱浸法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表l。

表1 歐綿馬水分、灰分、酸不溶性灰分、醇浸出物及含量測(cè)定結(jié)果Tab.l Determination results of moisture，ash，acid insoluble ash，alcohol－soluble extractives and content of total phloroglucinol of Dryopteris filix－mas（L.）Schott （n＝10）

2.5 含量測(cè)定

2.5.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綿馬貫眾素ABBA對(duì)照品適量，用乙醇制成質(zhì)量濃度為0.08 mg·mL－1的溶液作為對(duì)照品溶液。

2.5.2 供試品溶液的制備 取本品約1g，精密稱定，精密加入乙醇100mL，稱質(zhì)量，回流提取1h，冷卻至室溫，稱質(zhì)量，補(bǔ)足減失的質(zhì)量，混勻，過(guò)濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液2mL，置于10mL量瓶中，用乙醇稀釋并定容至刻度，搖勻，即得。

2.5.3 線性考察 精密吸取對(duì)照品溶液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2和1.4mL，置于10mL磨口具塞刻度試管中，均用乙醇稀釋至2mL，精密加入1g·L－1堅(jiān)牢藍(lán)BB鹽溶液5mL，混勻，室溫放置20 min，以第1管為空白，在476nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度（A）對(duì)對(duì)照品的量C（μg）做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A＝6.214 3 C＋0.066 6，r＝0.999 2。表明對(duì)照品在16～112μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5.4 穩(wěn)定性考察 同一顯色后供試品溶液每隔10min測(cè)定1次吸光度，90min內(nèi)吸光度的RSD為2.00%，表明供試品溶液在90min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.5 精密度實(shí)驗(yàn) 取同一批供試品溶液，精密吸取2mL，平行操作6份，顯色，測(cè)定，吸光度的RSD為2.62%。

2.5.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批供試品，按供試品溶液制備方法，平行制備6份，測(cè)定，結(jié)果RSD為1.37%。2.5.7 回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量供試品（質(zhì)量分?jǐn)?shù)8.58%）約0.5g，平行6份，精密加入對(duì)照品溶液20 mL，精密加人乙醇80mL，按照2.6.2項(xiàng)下方法制備，測(cè)定吸光度，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Experiment results of recovery test

2.5.8 樣品含量測(cè)定 取10批不同地區(qū)歐綿馬藥材樣品，按擬定方法制備和測(cè)定含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

3 討論

歐綿馬藥用歷史悠久，維吾爾醫(yī)學(xué)著作《明凈詞典》、《注醫(yī)典》等對(duì)其藥性及功能主治均有記載［3］，目前研究多為粗提物的活性研究［7－8］。歐綿馬曾作為同屬植物綿馬貫眾（Dryopteris crassirhizoma Nakai.）的混用品［9］，后者是《中國(guó)藥典》收載品種，對(duì)其化學(xué)成分、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、藥理作用和臨床應(yīng)用研究均較為深入。二者外形近似，但歐綿馬裂片邊緣銳裂成粗齒，根莖質(zhì)地疏松，綿馬貫眾裂片邊緣矩圓形，根莖質(zhì)地較堅(jiān)實(shí)，可加以區(qū)別。歐綿馬在國(guó)內(nèi)主要分布于新疆北部天山和阿爾泰山，主要產(chǎn)區(qū)是伊犁地區(qū)，質(zhì)量為優(yōu)［3］，綿馬貫眾主要分布在東北，二者分布區(qū)沒(méi)有重疊。

《維吾爾藥志》記載［1］∶歐綿馬含綿馬素（aspidin）、綿馬酸（filicic acid）、白綿馬素（albaspidin）等間苯三酚衍生物，但TLC鑒別時(shí)樣品在上述3種對(duì)照品相應(yīng)的位置并未出現(xiàn)相同顏色斑點(diǎn)，故與對(duì)照藥材進(jìn)行比較。根據(jù)不同地區(qū)10批藥材質(zhì)量研究結(jié)果，并考慮藥材來(lái)源差異的實(shí)際情況，暫定：水分不得過(guò)15.0%，酸不溶性灰分不得超過(guò)6.0%，雜質(zhì)不得超過(guò)12.0%，醇溶性浸出物不得少于20.0%，總間苯三酚含量限度不低于6.0%。新疆不同地區(qū)的歐綿馬中總間苯三酚含量有較大差異，比東北產(chǎn)綿馬貫眾所含間苯三酚含量略低［10］，此種差異可能與藥材的生長(zhǎng)環(huán)境、生長(zhǎng)年限有關(guān)，有待進(jìn)一步地研究。歐綿馬尚無(wú)人工栽培品，本實(shí)驗(yàn)所用均為野生采集，鑒于伊犁地區(qū)野生分布較多，品質(zhì)優(yōu)，建議藥用歐綿馬的產(chǎn)地固定為新疆伊犁地區(qū)。

［1］ 劉勇民，沙吾提·伊克木.維吾爾藥志：上冊(cè)［M］.烏魯木齊：新疆人民出版社，1999，320－323.

［2］ 新疆植物志編輯委員會(huì).新疆植物志：第一卷［M］.烏魯木齊：新疆科技衛(wèi)生出版社，1992：45－46.

［3］ 國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草：維吾爾藥卷［M］.上海：上?？萍汲霭嫔?，2005：232.

［4］ 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)：維吾爾藥分冊(cè)［S］.烏魯木齊：新疆科技衛(wèi)生出版社，1999：59.

［5］ 歐有權(quán)，賴永娥，羅潤(rùn)嫦，等.塞來(lái)昔布聯(lián)合間苯三酚緩解結(jié)石所致腎絞痛的臨床研究［J］.西北藥學(xué)雜志，2012，27（4）：356－357.

［6］ 劉沖，董紅亞，楊偉俊，等.哈薩克藥材黑果越橘質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步研究［J］.西北藥學(xué)雜志，2014，29（2）：123－124.

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Study on the quality standard of Dryopteris filix－mas（L.）Schott

MA Yanping1，SUN Yun2，WANG Dongdong2，3，TIAN Li2，3＊（1.Xinjiang Medical University Hospital，Urumqi 830011，China；2.College of TCM，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China；3.Xinjiang Key Laboratory of Famous Prescription and Science of Formula，Urumqi 830011，China）

Objective To establish the quality standard of Dryopteris filix－mas（L.）Schott，thus to provide a basis for herbs applicacion and the plant resource development.Methods The plant was studied by the methods including microscopic identification，thin layer chromatography，and visible spectrophotometry.The contents of water，ash，acid insoluble ash，extraction and total phloroglucinol of samples from ten different output places of Xinjiang were analyzed respectively.Results The morphological characteristics and powder microscopic characteristics were described.A TLC method was set up for qualitative identification analysis.The limits of the ethanol extraction content of moisture，ash，acid insoluble ash were 12.0%，15.0%，and 6.0%，respectively.The minimum contents of the ethanol extraction and total phloroglucinol were no less than 20.0%，and 5.0%，respectively.Conclusion The quality standard established in this paper is suitable for the quality control of Dryopteris filix－mas（L.）Schott.

Dryopteris filix－mas（L.）Schott；quality standard；total phloroglucinol

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.02.004

R282

A

1004－2407（2015）02－0121－04

2014－10－23）

國(guó)家藥品（維藥）標(biāo)準(zhǔn)提高研究課題（編號(hào)：538）；國(guó)家中醫(yī)藥管理局全國(guó)第四次中藥資源普查試點(diǎn)（新疆）項(xiàng)目（編號(hào)：2011－2013）

馬燕萍，女，主管藥師

＊通信作者：田莉，女，博士，副教授