史 輯， 崔 妮， 景海漪， 賈天柱

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧大連116600）

炮制對(duì)巴戟天中茜草素型蒽醌類成分的影響

史 輯， 崔 妮， 景海漪， 賈天柱*

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧大連116600）

目的采用HPLC法比較巴戟天不同炮制品中1，2-二甲氧基-3-羥基蒽醌、1-甲氧基-2-羥基蒽醌、1，3-二羥基-2-甲氧基蒽醌、甲基異茜草素-1-甲醚、甲基異茜草素的含有量。方法巴戟天炮制品以三氯甲烷提取，使用Thermo Syncronis C18色譜柱（150 mm×4.6mm，5mm），流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸水，梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)277 nm。結(jié)果

巴戟天；炮制方法；蒽醌；1，2-二甲氧基-3-羥基蒽醌；1-甲氧基-2-羥基蒽醌；1，3-二羥基-2-甲氧基蒽醌；甲基異茜草素-1-甲醚；甲基異茜草素

中藥巴戟天為茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How.的干燥根，具有祛風(fēng)濕、補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨之功效，多用于風(fēng)濕痹痛，筋骨痿軟，遺精陽痿，月經(jīng)不調(diào)，少腹冷痛，宮冷不孕等癥［1］?；瘜W(xué)和藥理實(shí)驗(yàn)表明巴戟天中的蒽醌類成分是其主要的生理活性成分，包括rubiadin、rubiadin-1-methylether等?！吨袊幍洹?010年版收載巴戟天的炮制品種有巴戟天、巴戟肉、鹽巴戟天和制巴戟天。炮制方法涉及到蒸去心、鹽蒸、鹽炒、甘草水煮等多種方法。目前藥典僅以寡糖耐斯糖的含有量考察巴戟天及其炮制品的質(zhì)量，并不全面，故本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定巴戟天炮制品中5種茜草素型蒽醌類成分的量，并與巴戟天生品進(jìn)行同步比較，試圖探索炮制前后巴戟天中茜草素型蒽醌類成分的變化規(guī)律，為中藥炮制品中發(fā)揮藥效的化學(xué)成分及質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了依據(jù)。

1 儀器與材料

Waters2695型高效液相色譜儀，Waters2998檢測(cè)PDA器；KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Mettler AE240電子分析天平 （瑞典）；磷酸 （色譜級(jí)），乙腈、甲醇 （色譜級(jí)），純凈水，其他試劑均為分析純。

1，2-二甲氧基-3-羥基蒽醌、1-甲氧基-2-羥基蒽醌、1，3-二羥基-2-甲氧基蒽醌、甲基異茜草素-1-甲醚、甲基異茜草素均為本實(shí)驗(yàn)自制，經(jīng)NMR和MS確認(rèn)結(jié)構(gòu)，采用HPLC峰面積歸一化法計(jì)算，純度均大于98.5%。巴戟天藥材購自安徽省亳州市藥材市場(chǎng)，產(chǎn)地廣西，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)翟延君教授鑒定為巴戟天Morinda officinalis How.的干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn) Thermo Syncronis C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 mm），流動(dòng)相為乙腈（A）-0.2%磷酸水（B），梯度洗脫（0～5 min，20%A；5～20 min，42%A；20～45 min，42%A；45～50 min，60%A）。體積流量0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)277 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量20μL。在此條件下，各色譜峰理論板數(shù)均不小于8 000，1，2-二甲氧基-3-羥基蒽醌、1-甲氧基-2-羥基蒽醌與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，拖尾因子均符合要求，見圖1。

2.2 炮制方法

2.2.1 巴戟天 除去雜質(zhì)，干燥。

2.2.2 巴戟肉 （蒸去心） 取凈巴戟天，照蒸法蒸透，趁熱除去木心，切段，干燥。

2.2.3 巴戟肉 （扒去心） 取凈巴戟天，手扒除去木心，剪成小段，干燥。

圖1 5種蒽醌對(duì)照品 （A）和供試品 （B）的高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram s of reference substances of five anthraquinones（A）and sam p le（B）

2.2.4 鹽蒸巴戟 取凈巴戟天，用鹽水拌勻，悶潤(rùn)，置適宜容器內(nèi)，蒸至鹽水被吸盡，表面呈黑色時(shí)，取出，除去木心，干燥，得巴戟天鹽蒸品（每100 g藥材，2 g鹽加100 mL純水溶解）。

2.2.5 鹽炒巴戟 取凈巴戟天，用鹽水拌勻，悶潤(rùn)，置鍋內(nèi)，文火炒至鹽水被吸盡，表面呈黑褐色時(shí)，取出，除去木心，干燥，得巴戟天鹽炒品（每100 g藥材，2 g鹽加100 mL純水溶解）。

2.2.6 制巴戟 （甘草水煮） 取甘草，搗碎，加水煎湯，加入凈巴戟天拌勻，悶潤(rùn)，煮透，趁熱除去木心，切段，干燥 （每100 g藥材，6 g甘草）。

2.2.7 制巴戟 （甘草水蒸） 取甘草，搗碎，加水煎湯，加入凈巴戟天拌勻，悶潤(rùn)蒸制2 h，趁熱除去木心，切段，干燥 （每100 g藥材，6 g甘草）。

2.2.8 酒蒸巴戟 取凈巴戟天，加適量黃酒拌勻，悶潤(rùn)，蒸制2 h，取出，除去木心，干燥，得巴戟天酒蒸品 （每100 g藥材，10 m L黃酒）。

2.2.9 酒炒巴戟天 取凈巴戟天，加適量黃酒拌勻，悶潤(rùn)，文火炒干，取出，除去木心，干燥，得巴戟天酒炒品（每100 g藥材，10 mL黃酒）。

2.3 對(duì)照品溶液的制備 取1-甲氧基-2-羥基蒽醌、1，2-二甲氧基-3-羥基蒽醌、甲基異茜草素-1-甲醚、1，3-二羥基-2-甲氧基蒽醌、甲基異茜草素對(duì)照品適量，精密稱定，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度分別為1.428 mg/mL、1.634 mg/mL、1.15 mg/mL、0.624 mg/mL、0.508 mg/mL的對(duì)照品貯備液。然后分別取上述溶液1 mL、1 mL、1.5 mL、1 mL、0.5 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即為混合對(duì)照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備 取巴戟天藥材粉末 （過60目篩）2 g，精密稱定，至圓底燒瓶中，加三氯甲烷80 m L回流提取2次，每次2 h，濾液合并，回收三氯甲烷，殘?jiān)蛹状级ㄈ葜? mL量瓶中。過0.45 mm微孔濾膜，得巴戟天樣品溶液。8種不同炮制品也分別按照該法處理。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系考察 精密吸取混合對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、1.0、1.5 mL至10 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻，進(jìn)樣20 mL，按上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰面積。以峰面積Y為縱坐標(biāo)，對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度X（mg/L）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸?；貧w方程及線性范圍見表1，結(jié)果表明各組分在各自質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表1 5種蒽醌類成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Tab.1 Regression equations，linear ranges and correlation coefficients

2.5.2 精密度試驗(yàn) 取 “2.3”項(xiàng)下所得混合對(duì)照品溶液，按 “2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得5種蒽醌的峰面積的RSD分別為1.5%、1.6%、1.5%、1.7%、1.8%，表明本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.5.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取巴戟天生品粉末，平行稱定6份，按 “2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)得1-甲氧基-2-羥基蒽醌、1，2-二甲氧基-3-羥基蒽醌、甲基異茜草素-1-甲醚、1，3-二羥基-2-甲氧基蒽醌、甲基異茜草素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.036 7、0.045 2、0.034 0、0.036 3、0.008 mg/g，RSD分別為0.8%、2.9%、0.9%、0.2%、0.2%，表明本實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)性良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取巴戟天生品粉末，按“2.4”項(xiàng)所述方法制備樣品溶液，分別于0、1、2、4、6、8、10 h測(cè)定，測(cè)得5種蒽醌峰面積的RSD分別為 0.8%、2.9%、0.9%、0.2%、 0.2%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含有量的巴戟天 （201207001）生品粉末，平行取樣6份，每份分別精密加入對(duì)照品貯備液，按 “2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按 “2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)測(cè)得量和加入量，計(jì)算各待測(cè)成分的加樣回收率，結(jié)果見表2。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Results of recovery tests

2.6 樣品測(cè)定 分別取上述9種樣品粉末2 g，平行測(cè)定3份，精密稱定，按 “2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按 “2.1”項(xiàng)下色譜條件各測(cè)定3次，得相應(yīng)色譜峰面積，帶入回歸方程，計(jì)算相應(yīng)的蒽醌含有量，結(jié)果見表3。

3 討論

3.1 供試品溶液制備工藝的優(yōu)化 本實(shí)驗(yàn)考察了不同比例的甲醇-水、乙酸乙酯、三氯甲烷、乙醇、丙酮作為提取溶劑，不同的提取方法，如超聲法、回流法、索氏提取器法，根據(jù)考察結(jié)果，將提取方法設(shè)定為以三氯甲烷為提取溶劑，回流提取2次，每次2 h，能夠?qū)⑤祯惓煞痔崛⊥耆?/p>

表3 巴戟天生品及不同炮制品中蒽醌類成分的測(cè)定結(jié)果 （mg/g，n=3）Tab.3 Detem ination results of anthraguinones in p rocessed samp les（mg/g，n=3）

3.2 色譜條件的優(yōu)化 本實(shí)驗(yàn)考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸水、乙腈-磷酸水溶液等流動(dòng)相系統(tǒng)，結(jié)果顯示以乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動(dòng)相時(shí)分離度及峰形能夠達(dá)到較好效果，因此采用乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫。

3.3 炮制過程中蒽醌類成分的變化 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明巴戟天經(jīng)炮制后，蒽醌類成分含有量有所變化，鹽蒸巴戟天、蒸去心巴戟天、甘草水煮巴戟天的5種蒽醌總量均有所增加，3種炮制方法均為藥典收載的炮制方法，也是目前較常用的炮制品種。本課題曾對(duì)巴戟天補(bǔ)腎壯陽有效部位進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)蒽醌類成分為補(bǔ)腎陽的有效部位，提示巴戟天用于腎陽虛癥治療時(shí)，應(yīng)用鹽巴戟、制巴戟和巴戟肉，效果更好。

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Effect of processing on alizarin type anthraquinones content from Morindae officinalis Radix

SHIJi， CUINi， JING Hai-yi， JIA Tian-zhu*
（Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China）

AIMTo compare the effects of processingmethods on the contents of alizarin anthraquinones（including 1-methoxy-2-hydroxy anthraquinone，1，2-dimethoxy anthraquinone，rubiadin-1-methyl ether，1，3-dihydroxy anthraquinone，and rubiadin）from Bajitian（Morindae officinalis Radix）.METHODSThe analysis of Bajitian chloroform extractwas performed on Thermo Syncronis C18column（4.6 mm×150 mm，5μm）with acetonitrilephosphoric acid water asmobil phase in a gradient elution mode，and the detection wavelength was set at277 nm.RESULTSThe calibration curveswere linear in the range 7.1-57.1 mg/L for 1-methoxy-2-hydroxy anthraquinone（r=1.000），8.2-65.4 mg/L for 1，2-dimethoxy anthraquinone（r=1.000），8.6-345mg/L for rubiadin-1-methyl ether（r=1.000），3.1-124.8 mg/L for 1，3-dihydroxy anthraquinone（r=0.999 9），and 1.3-50.8 mg/L for rubiadin（r=0.999 5），respectively.Their average recoveries were 102.6%，95.2%，99.7%，103.8%，and 103.0%，respectively.Their RSDswere 1.2%，0.8%，1.4%，1.3%，and 2.2%，respectively.CONCLUSIONAs compared with raw Bajitian，processingmakes five anthraquinones contents increase in Bajitian，which compose steaming-and-remove-xylem，processing with salt-water，and coboiling with Gancao.

Morindae officinalis Radix；processing；anthraquinone；1-methoxy-2-hydroxy anthraquinone；1，2-dimethoxy anthraquinone；rubiadin-1-methyl ether；1，3-dihydroxy anthraquinone；rubiadin

R283.3

：A

：1001-1528（2015）06-1294-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.06.029

2014-12-04

國家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目 （81001635）；國家中醫(yī)藥管理局行業(yè)專項(xiàng) （201107007）

史 輯，女，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事中藥炮制化學(xué)研究，E-mail：lnshiji@163.com，Tel：（0411）85890146

*通信作者：賈天柱，男，碩士，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中藥炮制原理研究，E-mail：jiatz@126.com，Tel：（0411）85890135

5種成分分別在7.1～57.1 mg/L、8.2～65.4 mg/L、8.6～345 mg/L、3.1～124.8 mg/L、1.3～50.8 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r2分別是1.000、1.000、1.000、0.999、0.999，加樣回收率分別為102.6%、95.2%、99.7%、103.8%、103.0%，RSD分別為1.2%、0.8%、1.4%、1.3%、2.2%。結(jié)論與生品相比，巴戟肉 （蒸去心）、鹽蒸巴戟、甘草水煮巴戟天中5種蒽醌的含有量有不同程度的增加。