王正鳳 劉洪軍 賀麗英 鄭小鋒

（西南藥業(yè)股份有限公司藥物研究所，中國 重慶400038）

苯磺酸氨氯地平片屬于二氫吡啶類鈣離子通道拮抗藥，用于原發(fā)性高血壓的治療，由美國輝瑞制藥公司于1992年研發(fā)上市，商品名絡(luò)活喜?，上市藥品規(guī)格主要為5mg,療效顯著[1]?，F(xiàn)在國內(nèi)進行申報以及批準生產(chǎn)的有2.5mg、5mg、10mg三種規(guī)格，以滿足不同情況下的用藥需求。由于該品種的規(guī)格較小，已有研究[2-4]一般采用《中國藥典》附錄“溶出度測定法”的第二法（介質(zhì)體積為500ml）或第三法進行溶出度的測定[5]。根據(jù)國內(nèi)外藥品相關(guān)指導(dǎo)原則的要求，隨著分析技術(shù)特別是高效液相色譜應(yīng)用的普及，供試樣品的濃度可以低至ng/ml，已經(jīng)大大突破了以往小規(guī)格藥品為滿足紫外分光光度法測定而采用的小體積溶出條件，第三法（小杯法）將逐步不再采用。本研究考察了三種規(guī)格樣品用同樣的條件溶出后，直接以高效液相色譜進行分析的方法，并對方法進行了驗證。結(jié)果表明，方法準確、簡便、快速，適用于多種規(guī)格苯磺酸氨氯地平片溶出度的測定。

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器

Agilent 1260(VWD)高效液相色譜儀（安捷倫科技）；ZRS-8G智能溶出儀 （天津天大天發(fā)）；TG332A微量分析天平 （湘儀儀器廠）；METTLERAB-204E分析天平（梅特勒公司）。

1.2 試藥

苯磺酸氨氯地平對照品（中國藥品生物制品檢定所）、苯磺酸氨氯地平片（西南藥業(yè)股份有限公司）；甲醇（色譜純，上海國藥試劑集團）、磷酸二氫鉀（分析純，重慶川東化工廠）。

2 方法

2.1 溶出方法

取本品，照溶出度測定法[中國藥典2010年版二部附錄X C第二法]，以鹽酸溶液（0.9→1000）500ml為溶劑，轉(zhuǎn)速為每分鐘 75轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)30分鐘時，取溶液適量，濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液；另取苯磺酸氨氯地平對照品約14mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇適量溶解后加鹽酸溶液（0.9→1000）稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加鹽酸溶液（0.9→1000）稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取上述兩種溶液，依法測定并計算出每片的溶出量，限度為標示量的80%，應(yīng)符合規(guī)定。

2.2 分析方法（色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗）

色譜柱：Agilent ZORBAX SB C18 柱（150×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-0.03mol/L 磷酸二氫鉀溶液（70：30）；流速：1.0ml·min-1；檢測波長：237nm；柱溫25℃；進樣體積10μl；理論塔板數(shù)按氨氯地平峰計算應(yīng)不低于1000。

2.3 溶液的配制

2.3.1 標準儲備液

精密稱取苯磺酸氨氯地平對照品，置100ml容量瓶中，加甲醇適量溶解后加入鹽酸溶液（0.9→1000）稀釋至刻度，搖勻，使成含氨氯地平0.2 mg/ml的溶液。

2.3.2 對照溶液

精密稱取苯磺酸氨氯地平對照品，置100ml容量瓶中，加甲醇適量溶解后加入鹽酸溶液（0.9→1000）稀釋至刻度，搖勻，精密量取適量該液再稀釋，使成含氨氯地平0.01 mg/ml的溶液。

2.3.3 樣品供試液

分別取2.5mg 20141101批、5mg 20141101批、10mg 20141101批三種規(guī)格各1個代表批樣品，依法進行溶出試驗，取樣濾過即得。

2.3.4 陰性樣品及溶液

精密稱取空白輔料約70 mg，置500ml容量瓶中，先加入250ml溶劑，超聲30分鐘，用溶劑定容至刻度，濾過，即為陰性對照溶液。

3 結(jié)果

3.1 專屬性及系統(tǒng)適用性驗證

取空白溶劑、陰性對照溶液、對照溶液和樣品供試液，采用擬定的色譜條件分別進行液相色譜分析。結(jié)果表明，陰性對照和空白溶劑對氨氯地平峰無干擾，樣品供試液中也未發(fā)現(xiàn)干擾峰，說明方法專屬性強，見圖1；系統(tǒng)適用性溶液理論塔板數(shù)大于1000。

3.2 線性及線性范圍

取標準儲備液 0.5 ml、1.0ml、1.25 ml、2.5 ml、5.0 ml、6.0 ml， 分別置于50ml容量瓶中，用溶劑稀釋定容，即得線性試驗樣品溶液。該六份樣品代表的濃度分別為 2μg/ml、4μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20.1μg/ml、24.1μg/ml，代表的范圍為2.5 mg規(guī)格標準濃度的60%至10 mg規(guī)格標準濃度的120%。精密量取上述溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積Y對氨氯地平濃度X進行線性回歸，得回歸方程為：y=53.688x+3.1784，r=0.9999(n=6)。表明在濃度為 2μg/ml～24.1μg/ml的范圍內(nèi)，氨氯地平峰具有良好的線性關(guān)系。

3.3 精密度

3.3.1 重復(fù)性

取同濃度的樣品供試液6份及對照溶液，分別精密量取注入色譜儀，記錄色譜圖，統(tǒng)計6份溶出度結(jié)果的相對標準偏差，結(jié)果得到RSD(%)=0.12。

3.3.2 中間精密度

取同一批次的樣品，配制相同濃度的6份樣品供試液及對照溶液，在不同的時間，更換人員、色譜柱和液相儀進行中間精密度試驗，最后對12個溶出度數(shù)據(jù)進行相對標準偏差的統(tǒng)計，得到RSD(%)=0.27。

3.4 加樣回收率

分 別 精 密 量 取 儲 備 液 0.5 ml、1.0ml、1.25 ml、2.5 ml、5.0 ml、6.0 ml，置已加入了對應(yīng)量輔料的50 ml容量瓶中，用溶劑溶解（超聲30分鐘）并稀釋至刻度，濾過，即得到從2.5 mg規(guī)格溶出60%至10 mg規(guī)格溶出120%之間6個濃度水平的加樣回收率供試液；精密量取上述溶液及對照溶液，依法測定，每個水平平行測定3次，計算每次回收率結(jié)果，并統(tǒng)計共18個結(jié)果的相對標準偏差。得到回收率在99.6%-101.4%范圍內(nèi)，且18個數(shù)據(jù)的RSD(%)=0.36。

3.5 濾膜的影響

取樣品供試液，先用國產(chǎn)醋酸纖維素膜（上海迪清過濾技術(shù)有限公司，0.45μm規(guī)格）過濾，取續(xù)濾液即得第一次濾過供試液，取部分該液，用新的相同濾膜再過濾，續(xù)濾液即得第二次濾過供試液。分別對兩種供試液進行色譜分析，每樣2次，記錄色譜圖，統(tǒng)計4次峰面積的相對標準偏差。測定結(jié)果基本一致，RSD（%）=0.78，濾膜基本無影響。

3.6 溶液的穩(wěn)定性

考慮到苯磺酸氨氯地平在強酸下極不穩(wěn)定易發(fā)生降解的實際情況，必須考察配制好的樣品供試液在常溫下的穩(wěn)定性，以進一步確定試驗條件和注意事項。 筆者分別在放置 0 h、2h、4 h、6 h、8h、16h 時取樣進行分析，結(jié)果表明，在該酸性介質(zhì)中，主藥的穩(wěn)定性較差，但在取樣后盡快（2小時內(nèi)）測定，結(jié)果與0小時基本一致，穩(wěn)定性符合要求。

3.7 耐用性

取對照溶液和樣品供試液，在分別流速變化0.2ml/min、柱溫變化5℃、采用不同廠牌及規(guī)格的色譜柱以及標準條件下，每個條件測定兩次，統(tǒng)計每個變動下得到的4個測定結(jié)果與標準條件下得到的2個測定測定結(jié)果共6個數(shù)據(jù)的相對標準偏差，結(jié)果流速變化下溶出的RSD(%)=0.15、采用不同廠牌和規(guī)格的色譜柱下含量的RSD(%)=0.12、柱溫變化下含量的RSD(%)=0.21，且各條件下得到的結(jié)果均在98.0%-102.0%范圍內(nèi)。

3.8 樣品的測定

取每個規(guī)格各1個代表批樣品，照HPLC法進行溶出度的測定，結(jié)果測得三批樣品的溶出度分別為2.5mg(20141101批)：99.7%、98.6% 、98.9% 、99.5% 、99.8% 、99.4% ； 5mg(20141101 批 )：100.7% 、99.6% 、98.7% 、99.1% 、99.4% 、99.1% ；10mg(20141101 批 )：101.2% 、100.8%、100.9%、101.5%、99.8%、100.4%，全部符合規(guī)定。

4 討論

苯磺酸氨氯地平片法定標準或已報道的文獻中，一般采用紫外-可見分光光度法進行溶出供試液的分析測定，方法專屬性較HPLC法低，在使用酸性介質(zhì)溶出后，即使有明顯降解情況，由于降解產(chǎn)物本身也有較強的紫外吸收，亦不能通過測定體現(xiàn)出來；而HPLC法則清楚的體現(xiàn)了這種變化，由于主藥在酸性環(huán)境中更容易發(fā)生氧化降解，故取樣后需盡快上機測定，才能保證結(jié)果的準確、可靠。

在三種規(guī)格中，即使是最小規(guī)格（2.5mg）供試液主峰的S/N也遠遠大于定量限，故在進行溶出試驗時，如果采用標準的900ml或1000ml的介質(zhì)體積，仍能滿足取樣濾過后直接進行HPLC法測定的靈敏度要求。

［1］王全洪,吳丹,等.HPLC法同時測定苯磺酸氨氯地平原料藥及片劑中8種已知有關(guān)物質(zhì)的含量[J].中國藥房,2013,24(25)：2369-2372.

［2］程敏毓,劉放.不同廠家苯磺酸氨氯地平口服制劑溶出度比較[J].海峽藥學(xué),2010,1(3)：18-21.

［3］蘇芳,孔愛英,等.不同廠家苯磺酸氨氯地平片溶出度的考察[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2012,24(3)：44-46.

［4］王方,劉祖雄.苯磺酸氨氯地平分散片的制備及溶出度測定[J].臨床軍醫(yī)雜志,2011,9(2)：355-358.

［5］國家藥典委員會.《中國藥典》2010 年版(二部)[M].2010：附錄 85-87.