沈莉+石秋霞+高曉忠+吳春雷+周玉波

摘要：為了比較不同炮制方法對(duì)牡丹皮多糖和總黃酮含量的影響，本研究以牡丹皮生品、酒制品、炒黃制品、炒焦制品和炒炭制品為材料，分別測(cè)定了它們多糖和總黃酮的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，牡丹皮生品多糖含量為9.31%，酒制品為10.86%，炒黃制品為10.62%，炒焦制品為9.96%，炒炭制品為8.78%；牡丹皮生品總黃酮含量為1.86%，酒制品為2.07%，炒黃制品為1.98%，炒焦制品為1.93%，炒炭制品為1.77%。牡丹皮經(jīng)過炮制后多糖和總黃酮的含量均發(fā)生變化，以酒制品中的含量為最高。

關(guān)鍵詞：牡丹皮；炮制；多糖；總黃酮

中圖分類號(hào)：R284.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）11-0324-03

牡丹皮為毛茛科芍藥屬植物牡丹（Paeoniasuffruticosa）的干燥根皮，性微寒，味苦、辛，歸肝、心、腎經(jīng)，是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥之一。其功效為清熱涼血、活血化瘀等，主要用于熱入營(yíng)血、溫毒發(fā)斑、吐血衄血、夜熱早涼、無(wú)汗骨蒸、經(jīng)閉痛經(jīng)、癰腫瘡毒等[1-2]。歷史上牡丹皮的炮制方法很多，主要有酒制、炒制、煮制、制炭等。生品長(zhǎng)于清熱涼血、活血化瘀，丹皮制炭后凝血作用增強(qiáng)，有涼血止血的作用[3]，用于吐血、衄血。目前臨床中最常用的是牡丹皮生品，“清炒”“酒炒”“炒炭”僅有少部分地區(qū)沿用，研究也多集中于生品，而對(duì)其炮制品的研究較少[4-5]。本試驗(yàn)通過比較牡丹皮及其不同炮制品中多糖和總黃酮的含量，為深入研究牡丹皮成分提供數(shù)據(jù)支持。

1材料

1.1儀器

FZ102粉粹機(jī)（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；METTLERAL204型分析天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；80-2臺(tái)式低速離心機(jī)（上海手術(shù)器械廠）；HP8453型紫外-可見分光光度計(jì)（惠普公司）。

1.2試劑與試藥

牡丹皮產(chǎn)地為安徽，購(gòu)自浙江震元醫(yī)藥連鎖有限公司，經(jīng)鑒定為毛茛科芍藥屬植物牡丹P.suffruticosa的干燥根皮。蕓香苷（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100080-200707），D-無(wú)水葡萄糖（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110833-200904），濃硫酸、乙醇、重蒸苯酚、氫氧化鈉、氯化鋁、亞硝酸鈉等試劑為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1樣品的制備

牡丹皮生品：取牡丹皮20g，純凈水洗3次后，晾干備用。牡丹皮酒制：取牡丹皮，照生品清洗法處理后晾干，每500g牡丹皮加黃酒60g，拌勻后悶透，放鍋內(nèi)用文火加熱炒干，取出放涼。牡丹皮炒黃：取牡丹皮，照生品清洗法處理后晾干，用文火微炒，取出放涼備用。牡丹皮炒焦：取牡丹皮，照生品清洗法處理，晾干，用文火炒至微焦，取出放涼備用。牡丹皮炒炭：取牡丹皮，照生品清洗法處理后晾干，用中火加熱炒至焦炭色，取出放涼。

2.2牡丹皮多糖含量測(cè)定

2.2.1牡丹皮精制多糖的制備

稱取牡丹皮生品粉末30g，加入80%乙醇（10倍量）后在90℃水浴中回流3次（2h/次），抽濾后取藥渣揮盡乙醇，再加水（10倍量）回流提取3次（2h/次），趁熱抽濾，合并濾液，減壓濃縮后，加95%乙醇至醇含量達(dá)80%，置4℃冰箱中靜置12h，充分沉淀后過濾，干燥后得到粗多糖。

粗多糖水復(fù)溶后，用Servage（三氯甲烷-正丁醇，4∶1）法進(jìn)行除蛋白操作[6]，反復(fù)多次后用考馬斯亮藍(lán)法檢驗(yàn)至無(wú)蛋白[7]。取上清液，加入乙醇，使溶液中醇濃度達(dá)到80%，4℃靜置過夜后離心，沉淀用熱水復(fù)溶后抽濾，濾液再重復(fù)1次醇沉淀操作，離心后的沉淀分別用無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，烘干至恒重，得到精制的牡丹皮多糖。

2.2.2供試品溶液的制備

取牡丹皮生品及其炮制品粉末各1.0g，加入80%乙醇50mL于90℃水浴中回流2次，每次2h，過濾后取濾渣揮盡乙醇，再加50mL水回流提取3次，每次2h，抽濾后合并濾液，濃縮后轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，定容即得。

2.2.3對(duì)照品溶液的制備

取無(wú)水葡萄糖（干燥至恒重）0.0499g于50mL容量瓶中，加水溶解后定容，得濃度為0.998mg/mL的葡萄糖對(duì)照品溶液。

2.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別量取葡萄糖對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于50mL容量瓶中，加水至刻度。量取上述各標(biāo)準(zhǔn)液1.0mL于20mL具塞試管中，加入1.0mL的5%苯酚溶液，搖勻后再加入5.0mL濃硫酸，蓋上試管塞，搖勻后置沸水浴中加熱反應(yīng)30min，取出后放置冰水浴中冷卻至室溫。以相應(yīng)試劑作空白參比，在488nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度D。以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（x）為橫坐標(biāo)，吸光度y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程y=8.079x-0.0514（r=0.9995），表明葡萄糖濃度在0.01996～0.09980mg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.2.5換算因子的測(cè)定

取牡丹皮精制多糖0.0155g于50mL量瓶中，加水溶解后定容，得濃度為0.31mg/mL的牡丹皮精制多糖溶液。精確量取上述多糖溶液1.0mL于20mL具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)操作測(cè)定吸光度，通過回歸方程求出精制多糖溶液中的葡萄糖濃度，并計(jì)算其中含量。按下式計(jì)算換算因子：f=W/（C×D），式中W為多糖質(zhì)量（mg），C為多糖中葡萄糖濃度（mg/mL），D為稀釋倍數(shù)。測(cè)得換算因子f=3.58（n=6）。

2.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試液1.0mL，置10mL量瓶中加水定容，搖勻后取1.0mL于20mL具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)操作，測(cè)定吸光度，之后每隔15min測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定2h，結(jié)果吸光度值的RSD為1.71%，表明供試液室溫下2h內(nèi)穩(wěn)定性良好。endprint

2.2.7精密度試驗(yàn)

精確吸取濃度為0.03992mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液1.0mL，按“2.2.4”節(jié)操作測(cè)定，平行測(cè)定6份，RSD為2.61%，表明儀器具有良好的精密度。

2.2.8重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批次的牡丹皮生品6份，按“2.2.2”節(jié)方法制備供試品溶液，精確量取1.0mL，置10mL量瓶中加水定容，搖勻后取1.0mL于20mL具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)操作測(cè)定吸光度，RSD為2.17%，表明本試驗(yàn)具有良好的重復(fù)性。

2.2.9加樣回收率試驗(yàn)

取牡丹皮生品6份各0.5g，分別加入葡萄糖對(duì)照品10mg，按“2.2.2”節(jié)方法制備供試品溶液，精確量取1.0mL于10mL量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻后取1.0mL于20mL具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)方法測(cè)定，計(jì)算后得葡萄糖平均回收率為100.73%，RSD為2.80%（n=6），見表1。

2.2.10樣品含量測(cè)定

精確量取“2.2.2”節(jié)下牡丹皮及其炮制品供試液各1.0mL于10mL量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻后取1.0mL于20mL具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)方法測(cè)定吸光度，通過上述回歸方程計(jì)算出供試液中葡萄糖濃度，再按下列公式計(jì)算供試品中多糖的含量：含量=（C×D×f/W）×100%，其中C為供試液中葡萄糖的濃度，D為稀釋倍數(shù)，f為換算因子，W為供試品干品質(zhì)量。得到的結(jié)果見表2。

2.3牡丹皮總黃酮含量測(cè)定

2.3.1供試品溶液的制備

取牡丹皮生品及其炮制品粉末各1.0g，加入50mL的75%乙醇加熱回流提取3次（2h/次），過濾，將濾液減壓濃縮至無(wú)乙醇，用同體積乙醚萃取除去葉綠素及蠟質(zhì)等，最后用75%乙醇定容至50mL，得到總黃酮樣品溶液。

2.3.2對(duì)照品溶液的制備

取蕓香苷對(duì)照品0.0252g，用60%乙醇溶解，再定容至50mL即得。

2.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精確量取對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，分別置10mL容量瓶中，依次加入0.3mL的5%亞硝酸鈉溶液，搖勻后放置6min；然后加0.3mL的10%氯化鋁溶液搖勻后放置6min，再加4mL的4%氫氧化鈉溶液，用60%乙醇定容，搖勻，放置15min后，以相應(yīng)試劑作空白參比，于510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以蕓香苷濃度（x）為橫坐標(biāo)，吸光度（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程：y=9.846x-0.010（r=0.9997），表明蕓香苷濃度在0.0252～0.1260mg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)

精確量取供試液1.0mL于10mL容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作，測(cè)定吸光度，之后每隔10min測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定1h，結(jié)果RSD為2.56%，表明供試液室溫下1h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.5精密度試驗(yàn)

取蕓香苷對(duì)照品溶液2.0mL于10mL容量瓶中，按“2.3.3”節(jié)操作平行測(cè)定6份，RSD為1.97%，表明儀器具有良好的精密度。

2.3.6重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批次牡丹皮生品6份，按“2.3.1”節(jié)方法制備供試液，精確量取1.0mL于10mL容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，RSD為2.38%，表明本試驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.3.7加樣回收率試驗(yàn)

取6份牡丹皮生品，每份1.0g，分別加入蕓香苷對(duì)照品20mg，按照“2.3.1”節(jié)操作制備供試液，量取1.0mL于10mL容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，計(jì)算蕓香苷平均回收率為99.61%，RSD為2.70%（n=6），見表3。

2.3.8樣品含量測(cè)定

精確量取“2.3.1”節(jié)中牡丹皮及其炮制品供試液各1.0mL于10mL容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，再依據(jù)回歸方程求出供試品中總黃酮的濃度，結(jié)果見表4。

3討論

長(zhǎng)期以來(lái)，對(duì)牡丹皮的研究較多集中于酚及酚苷類、單萜及苷類等活性物質(zhì)，而對(duì)于丹皮多糖的研究很少。然而丹皮多糖有明顯的降血糖、保護(hù)腎臟及提高免疫等功效，是頗具發(fā)展前景的一種天然活性物質(zhì)[8-9]。本研究通過計(jì)算葡萄糖和牡丹皮精制多糖之間的換算因子，并以此校正多糖含量的方法，測(cè)定了牡丹皮及其炮制品中多糖的含量，多糖含量按酒制品、炒黃制品、炒焦制品、生品、炒炭制品次序依次降低。

近年來(lái)研究人員從牡丹皮中分離得到黃酮類化合物[10]，其中兒茶素、槲皮素、山柰素是清除1，1-二苯基-2-三硝基苯肼、O-2[KG-*2]·自由基，抑制酪氨酸酶、高級(jí)糖化物終產(chǎn)物（AGES）產(chǎn)生的主要活性物質(zhì)[11]。試驗(yàn)表明，牡丹皮及其不同炮制品中黃酮的含量差異較大，從高到底依次為：酒制品>生品>炒炭制品>炒焦制品>炒黃制品。由此可見，牡丹皮除酒制品外，其他方法炮制后的總黃酮含量均有降低。通過本試驗(yàn)研究可為牡丹皮的炮制研究提供參考，同時(shí)也為牡丹皮的綜合應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：160.

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[11]DingHY，LinHC，ChangTS.TyrosinaseinhibitorsisolatedfromtherootsofPaeoniasuffruticosa[J].JournalofCosmeticScience，2009，60（3）：347-352.endprint

2.2.7精密度試驗(yàn)

精確吸取濃度為0.03992mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液1.0mL，按“2.2.4”節(jié)操作測(cè)定，平行測(cè)定6份，RSD為2.61%，表明儀器具有良好的精密度。

2.2.8重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批次的牡丹皮生品6份，按“2.2.2”節(jié)方法制備供試品溶液，精確量取1.0mL，置10mL量瓶中加水定容，搖勻后取1.0mL于20mL具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)操作測(cè)定吸光度，RSD為2.17%，表明本試驗(yàn)具有良好的重復(fù)性。

2.2.9加樣回收率試驗(yàn)

取牡丹皮生品6份各0.5g，分別加入葡萄糖對(duì)照品10mg，按“2.2.2”節(jié)方法制備供試品溶液，精確量取1.0mL于10mL量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻后取1.0mL于20mL具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)方法測(cè)定，計(jì)算后得葡萄糖平均回收率為100.73%，RSD為2.80%（n=6），見表1。

2.2.10樣品含量測(cè)定

精確量取“2.2.2”節(jié)下牡丹皮及其炮制品供試液各1.0mL于10mL量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻后取1.0mL于20mL具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)方法測(cè)定吸光度，通過上述回歸方程計(jì)算出供試液中葡萄糖濃度，再按下列公式計(jì)算供試品中多糖的含量：含量=（C×D×f/W）×100%，其中C為供試液中葡萄糖的濃度，D為稀釋倍數(shù)，f為換算因子，W為供試品干品質(zhì)量。得到的結(jié)果見表2。

2.3牡丹皮總黃酮含量測(cè)定

2.3.1供試品溶液的制備

取牡丹皮生品及其炮制品粉末各1.0g，加入50mL的75%乙醇加熱回流提取3次（2h/次），過濾，將濾液減壓濃縮至無(wú)乙醇，用同體積乙醚萃取除去葉綠素及蠟質(zhì)等，最后用75%乙醇定容至50mL，得到總黃酮樣品溶液。

2.3.2對(duì)照品溶液的制備

取蕓香苷對(duì)照品0.0252g，用60%乙醇溶解，再定容至50mL即得。

2.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精確量取對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，分別置10mL容量瓶中，依次加入0.3mL的5%亞硝酸鈉溶液，搖勻后放置6min；然后加0.3mL的10%氯化鋁溶液搖勻后放置6min，再加4mL的4%氫氧化鈉溶液，用60%乙醇定容，搖勻，放置15min后，以相應(yīng)試劑作空白參比，于510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以蕓香苷濃度（x）為橫坐標(biāo)，吸光度（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程：y=9.846x-0.010（r=0.9997），表明蕓香苷濃度在0.0252～0.1260mg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)

精確量取供試液1.0mL于10mL容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作，測(cè)定吸光度，之后每隔10min測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定1h，結(jié)果RSD為2.56%，表明供試液室溫下1h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.5精密度試驗(yàn)

取蕓香苷對(duì)照品溶液2.0mL于10mL容量瓶中，按“2.3.3”節(jié)操作平行測(cè)定6份，RSD為1.97%，表明儀器具有良好的精密度。

2.3.6重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批次牡丹皮生品6份，按“2.3.1”節(jié)方法制備供試液，精確量取1.0mL于10mL容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，RSD為2.38%，表明本試驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.3.7加樣回收率試驗(yàn)

取6份牡丹皮生品，每份1.0g，分別加入蕓香苷對(duì)照品20mg，按照“2.3.1”節(jié)操作制備供試液，量取1.0mL于10mL容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，計(jì)算蕓香苷平均回收率為99.61%，RSD為2.70%（n=6），見表3。

2.3.8樣品含量測(cè)定

精確量取“2.3.1”節(jié)中牡丹皮及其炮制品供試液各1.0mL于10mL容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，再依據(jù)回歸方程求出供試品中總黃酮的濃度，結(jié)果見表4。

3討論

長(zhǎng)期以來(lái)，對(duì)牡丹皮的研究較多集中于酚及酚苷類、單萜及苷類等活性物質(zhì)，而對(duì)于丹皮多糖的研究很少。然而丹皮多糖有明顯的降血糖、保護(hù)腎臟及提高免疫等功效，是頗具發(fā)展前景的一種天然活性物質(zhì)[8-9]。本研究通過計(jì)算葡萄糖和牡丹皮精制多糖之間的換算因子，并以此校正多糖含量的方法，測(cè)定了牡丹皮及其炮制品中多糖的含量，多糖含量按酒制品、炒黃制品、炒焦制品、生品、炒炭制品次序依次降低。

近年來(lái)研究人員從牡丹皮中分離得到黃酮類化合物[10]，其中兒茶素、槲皮素、山柰素是清除1，1-二苯基-2-三硝基苯肼、O-2[KG-*2]·自由基，抑制酪氨酸酶、高級(jí)糖化物終產(chǎn)物（AGES）產(chǎn)生的主要活性物質(zhì)[11]。試驗(yàn)表明，牡丹皮及其不同炮制品中黃酮的含量差異較大，從高到底依次為：酒制品>生品>炒炭制品>炒焦制品>炒黃制品。由此可見，牡丹皮除酒制品外，其他方法炮制后的總黃酮含量均有降低。通過本試驗(yàn)研究可為牡丹皮的炮制研究提供參考，同時(shí)也為牡丹皮的綜合應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

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2.2.7精密度試驗(yàn)

精確吸取濃度為0.03992mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液1.0mL，按“2.2.4”節(jié)操作測(cè)定，平行測(cè)定6份，RSD為2.61%，表明儀器具有良好的精密度。

2.2.8重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批次的牡丹皮生品6份，按“2.2.2”節(jié)方法制備供試品溶液，精確量取1.0mL，置10mL量瓶中加水定容，搖勻后取1.0mL于20mL具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)操作測(cè)定吸光度，RSD為2.17%，表明本試驗(yàn)具有良好的重復(fù)性。

2.2.9加樣回收率試驗(yàn)

取牡丹皮生品6份各0.5g，分別加入葡萄糖對(duì)照品10mg，按“2.2.2”節(jié)方法制備供試品溶液，精確量取1.0mL于10mL量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻后取1.0mL于20mL具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)方法測(cè)定，計(jì)算后得葡萄糖平均回收率為100.73%，RSD為2.80%（n=6），見表1。

2.2.10樣品含量測(cè)定

精確量取“2.2.2”節(jié)下牡丹皮及其炮制品供試液各1.0mL于10mL量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻后取1.0mL于20mL具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)方法測(cè)定吸光度，通過上述回歸方程計(jì)算出供試液中葡萄糖濃度，再按下列公式計(jì)算供試品中多糖的含量：含量=（C×D×f/W）×100%，其中C為供試液中葡萄糖的濃度，D為稀釋倍數(shù)，f為換算因子，W為供試品干品質(zhì)量。得到的結(jié)果見表2。

2.3牡丹皮總黃酮含量測(cè)定

2.3.1供試品溶液的制備

取牡丹皮生品及其炮制品粉末各1.0g，加入50mL的75%乙醇加熱回流提取3次（2h/次），過濾，將濾液減壓濃縮至無(wú)乙醇，用同體積乙醚萃取除去葉綠素及蠟質(zhì)等，最后用75%乙醇定容至50mL，得到總黃酮樣品溶液。

2.3.2對(duì)照品溶液的制備

取蕓香苷對(duì)照品0.0252g，用60%乙醇溶解，再定容至50mL即得。

2.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精確量取對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，分別置10mL容量瓶中，依次加入0.3mL的5%亞硝酸鈉溶液，搖勻后放置6min；然后加0.3mL的10%氯化鋁溶液搖勻后放置6min，再加4mL的4%氫氧化鈉溶液，用60%乙醇定容，搖勻，放置15min后，以相應(yīng)試劑作空白參比，于510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以蕓香苷濃度（x）為橫坐標(biāo)，吸光度（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程：y=9.846x-0.010（r=0.9997），表明蕓香苷濃度在0.0252～0.1260mg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)

精確量取供試液1.0mL于10mL容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作，測(cè)定吸光度，之后每隔10min測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定1h，結(jié)果RSD為2.56%，表明供試液室溫下1h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.5精密度試驗(yàn)

取蕓香苷對(duì)照品溶液2.0mL于10mL容量瓶中，按“2.3.3”節(jié)操作平行測(cè)定6份，RSD為1.97%，表明儀器具有良好的精密度。

2.3.6重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批次牡丹皮生品6份，按“2.3.1”節(jié)方法制備供試液，精確量取1.0mL于10mL容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，RSD為2.38%，表明本試驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.3.7加樣回收率試驗(yàn)

取6份牡丹皮生品，每份1.0g，分別加入蕓香苷對(duì)照品20mg，按照“2.3.1”節(jié)操作制備供試液，量取1.0mL于10mL容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，計(jì)算蕓香苷平均回收率為99.61%，RSD為2.70%（n=6），見表3。

2.3.8樣品含量測(cè)定

精確量取“2.3.1”節(jié)中牡丹皮及其炮制品供試液各1.0mL于10mL容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，再依據(jù)回歸方程求出供試品中總黃酮的濃度，結(jié)果見表4。

3討論

長(zhǎng)期以來(lái)，對(duì)牡丹皮的研究較多集中于酚及酚苷類、單萜及苷類等活性物質(zhì)，而對(duì)于丹皮多糖的研究很少。然而丹皮多糖有明顯的降血糖、保護(hù)腎臟及提高免疫等功效，是頗具發(fā)展前景的一種天然活性物質(zhì)[8-9]。本研究通過計(jì)算葡萄糖和牡丹皮精制多糖之間的換算因子，并以此校正多糖含量的方法，測(cè)定了牡丹皮及其炮制品中多糖的含量，多糖含量按酒制品、炒黃制品、炒焦制品、生品、炒炭制品次序依次降低。

近年來(lái)研究人員從牡丹皮中分離得到黃酮類化合物[10]，其中兒茶素、槲皮素、山柰素是清除1，1-二苯基-2-三硝基苯肼、O-2[KG-*2]·自由基，抑制酪氨酸酶、高級(jí)糖化物終產(chǎn)物（AGES）產(chǎn)生的主要活性物質(zhì)[11]。試驗(yàn)表明，牡丹皮及其不同炮制品中黃酮的含量差異較大，從高到底依次為：酒制品>生品>炒炭制品>炒焦制品>炒黃制品。由此可見，牡丹皮除酒制品外，其他方法炮制后的總黃酮含量均有降低。通過本試驗(yàn)研究可為牡丹皮的炮制研究提供參考，同時(shí)也為牡丹皮的綜合應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

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