鄧金明， 吳海英， 余 霜， 鐘若曦

(浙江愛(ài)生藥業(yè)有限公司，浙江 杭州310018)

中國(guó)是個(gè)酒文化歷史非常悠久而且十分豐厚的國(guó)家。適量飲酒，可陶冶情操，愉悅身心，但過(guò)量及長(zhǎng)期飲酒易帶來(lái)的身體機(jī)能的損害，其中以酒精性肝損傷最為常見(jiàn)，包括脂肪肝、酒精性肝炎、肝硬化甚至肝癌［1-2］。歸脾顆粒由十大經(jīng)典古方歸脾湯經(jīng)現(xiàn)代工藝制備而來(lái)，包含黨參、木香、茯苓、當(dāng)歸等11 味中藥。在市場(chǎng)隨機(jī)回訪中有較多客戶反映歸脾顆粒具有解酒效果，能很好地解決飲酒后問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以作進(jìn)一步研究。

1 材料

1.1 藥物 歸脾顆粒劑(浙江愛(ài)生藥業(yè)有限公司，規(guī)格3 g/袋，相當(dāng)于生藥6 g)，用純化水配成0.15 g/mL 的藥液，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?，使用時(shí)取所需量藥液水浴加熱至37 ℃，搖勻。

1.2 動(dòng)物 ICR 雄性小鼠120 只，體質(zhì)量20 ～22 g，購(gòu)自上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，合格證編號(hào)2008001634464。

1.3 主要試劑 56%二鍋頭白酒(V/V)，北京順鑫農(nóng)業(yè)股份有限公司牛欄山酒廠。其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.4 主要儀器 TGL 18C 高速臺(tái)式離心機(jī);BCD-241C 華日冰箱;FA2104 型電子分析天平;德國(guó)SLEE MEV 冷凍切片機(jī);Lecia TCS SP2 激光共聚焦顯微鏡;GC 2010Plus 型氣相色譜儀等。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組及灌胃［3-6］實(shí)驗(yàn)小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d 后，標(biāo)記，稱定質(zhì)量，隨機(jī)分成4 組(表1)，每組30 只。連續(xù)灌胃一個(gè)月，其中歸脾顆?；蛏睇}水按0.2 mL/20 g 體質(zhì)量灌服，酒按0.25 mL/20 g 體質(zhì)量灌服，記錄相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

表1 組別設(shè)置

2.2 檢測(cè)［7-9］按表1 組別設(shè)置連續(xù)灌胃30 d，末次給酒后于30、60、90、120、150、180 min 摘除眼球取血，分離血清測(cè)血醇質(zhì)量濃度。取血斷頸處理后立即取小鼠肝臟大葉片，浸泡于福爾馬林溶液中固定，用作組織病理切片。

3 結(jié)果

3.1 一般觀察及死亡率 灌酒后小鼠先表現(xiàn)出興奮狀態(tài)，繼而共濟(jì)失調(diào)，毛發(fā)松散，呼吸急促，個(gè)別有呼吸衰竭現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)第3 ～4 天防醉對(duì)照組普遍出現(xiàn)活動(dòng)減少，食量下降現(xiàn)象，至第10 天共死亡12 只，造模30 d 共死亡18 只;而歸脾防醉組大部分活躍，至第10 天，共死亡3 只，造模30 d 共死亡8 只;長(zhǎng)期保養(yǎng)組均無(wú)死亡。說(shuō)明飲酒易造成小鼠生理機(jī)能的衰竭甚至導(dǎo)致死亡，而歸脾顆粒有助于保護(hù)小鼠生理機(jī)能的修復(fù)，減少死亡率，防醉對(duì)照組的死亡率明顯高于歸脾防醉組，說(shuō)明歸脾顆粒有助于小鼠生理機(jī)能的修復(fù)，減少死亡率，同時(shí)延緩小鼠的死亡時(shí)間，詳見(jiàn)表2。

表2 小鼠死亡情況統(tǒng)計(jì)

3.2 體質(zhì)量變化［10］實(shí)驗(yàn)第30 天稱量各組小鼠體質(zhì)量，對(duì)比實(shí)驗(yàn)前后各組平均體質(zhì)量，計(jì)算體質(zhì)量增長(zhǎng)率，見(jiàn)表3 及圖1。從體質(zhì)量增長(zhǎng)率比較，歸脾保養(yǎng)組＞保養(yǎng)對(duì)照組＞歸脾防醉組＞防醉對(duì)照組。

表3 各組實(shí)驗(yàn)前后平均體質(zhì)量變化及增長(zhǎng)率

圖1 各組實(shí)驗(yàn)前后平均體質(zhì)量變化及增長(zhǎng)率

歸脾防醉組與防醉對(duì)照組比較，證明歸脾顆粒對(duì)酒精的影響，有助于小鼠生理機(jī)能的修復(fù)，減少酒精的危害;歸脾保養(yǎng)組與保養(yǎng)對(duì)照組比較，證明歸脾顆粒對(duì)正常小鼠的影響，有助于增加小鼠的食欲，促進(jìn)消化代謝功能;具體參考表中數(shù)據(jù)。

3.3 睡眠情況［11］實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第7 天，每組均灌酒后觀察小鼠的活動(dòng)情況。以小鼠爬行不穩(wěn)、后腹拖地、毛松散、閉眼不動(dòng)為醉酒指標(biāo)，以活動(dòng)自如、靈活、精神、毛滑順為醒酒指標(biāo)，記錄小鼠入睡(醉酒)時(shí)間和蘇醒(醒酒)時(shí)間，計(jì)算出睡眠潛伏時(shí)間(從灌酒至入睡的時(shí)間，min)及睡眠時(shí)間(從入睡到蘇醒的時(shí)間，min)。

從表4 數(shù)據(jù)結(jié)果得知，服用歸脾顆粒對(duì)小鼠的睡眠影響。一直服用歸脾顆粒的歸脾防醉組、歸脾保養(yǎng)組平均睡眠潛伏期較2 個(gè)對(duì)照組防醉對(duì)照組、保養(yǎng)對(duì)照組短，睡眠時(shí)間長(zhǎng)，表現(xiàn)為易醉晚醒的現(xiàn)象。推測(cè)為服用歸脾顆粒增強(qiáng)了機(jī)體胃腸道的運(yùn)化能力，后給酒，可促進(jìn)對(duì)酒精的吸收，從而表現(xiàn)為易醉的效果。而歸脾顆?？赡苡小鞍采裥Ч?，從而延長(zhǎng)了睡眠時(shí)間。

表4 睡眠情況

3.4 血醇變化 睡眠情況的數(shù)據(jù)顯示歸脾組比對(duì)照組易醉，分析給酒后各時(shí)間點(diǎn)的血醇質(zhì)量濃度發(fā)現(xiàn)歸脾顆?？梢源龠M(jìn)小鼠對(duì)酒精的吸收和代謝。促進(jìn)酒精吸收具體表現(xiàn)即為睡眠潛伏期短的易醉，歸脾顆粒促進(jìn)酒精代謝與安神助眠雙重作用下結(jié)果表現(xiàn)為睡眠時(shí)間長(zhǎng)，血醇質(zhì)量濃度變化具體情況見(jiàn)圖2。

圖2 血醇質(zhì)量濃度-時(shí)間變化曲線

歸脾防醉組，由于歸脾顆粒的促進(jìn)吸收和代謝作用，加之此組長(zhǎng)期飲酒，推測(cè)小鼠胃腸道吸收功能得到鍛煉、提高，使其吸收最快，表現(xiàn)為血醇質(zhì)量濃度最高。代謝也最快。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，在1 h 后血醇質(zhì)量濃度下降到75 mg/100 mL，低于醉酒質(zhì)量濃度(80 mg/100 mL)，并呈現(xiàn)繼續(xù)緩慢下降趨勢(shì)。

防醉對(duì)照組，由于酒精的長(zhǎng)期刺激且沒(méi)有歸脾顆粒的保護(hù)作用，胃腸道功能可能受到一定程度損傷，導(dǎo)致此組吸收最差，肝功能受影響，代謝也最差。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，3 h后仍然呈現(xiàn)醉酒狀態(tài) (血醇質(zhì)量濃度高達(dá)87.9 mg/100 mL)。

歸脾保養(yǎng)組，該組顯示其對(duì)酒精的代謝能力不如歸脾防醉組，說(shuō)明歸脾防醉組小鼠因?yàn)殚L(zhǎng)期飲酒和服用歸脾顆粒使得體內(nèi)的乙醇代謝酶得到適應(yīng)并強(qiáng)化，故能在1 h 就低于醉酒質(zhì)量濃度，而歸脾保養(yǎng)組達(dá)到相同質(zhì)量濃度需要2 h。

保養(yǎng)對(duì)照組，該組為沒(méi)有服用歸脾顆粒(可作為空白對(duì)照組)，需要3 h 酒醒(以低于血醇質(zhì)量濃度80 mg/100 mL 為標(biāo)準(zhǔn))，比歸脾防醉組(1 h)和歸脾保養(yǎng)組(2 h)都慢，雖然血醇峰值與歸脾防醉組相近，但達(dá)峰時(shí)間延后了1 h。數(shù)據(jù)顯示，3 h 后血醇質(zhì)量濃度降低為63.11 mg/100 mL，僅優(yōu)于防醉對(duì)照組。

因此，長(zhǎng)期服用歸脾顆粒，可增強(qiáng)胃腸道運(yùn)化吸收功能，促進(jìn)肝臟代謝活力，即增強(qiáng)小鼠機(jī)體解酒能力。3.5 肝組織病理切片［12-13］各組小鼠肝組織經(jīng)石蠟切片，HE 染色后在50 倍光學(xué)顯微鏡下觀察，結(jié)果圖3 所示。從結(jié)果可以看出，歸脾防醉組的肝臟結(jié)構(gòu)大致正常，肝細(xì)胞未見(jiàn)明顯腫脹;防醉對(duì)照組的肝細(xì)胞腫脹，肝索排列紊亂，肝竇受壓，可見(jiàn)血管充血和灶性壞死;歸脾保養(yǎng)組的肝臟結(jié)構(gòu)基本正常，清晰可見(jiàn)，肝索排列大致正常;保養(yǎng)對(duì)照組的肝臟結(jié)構(gòu)正常，清晰可見(jiàn)，肝索排列大致正常。

因此，服用歸脾顆粒對(duì)小鼠肝臟具有較明顯的保護(hù)作用，可減少飲酒帶來(lái)的損害。

圖3 各組的肝組織病理切片(HE×50)

4 討論

血醇測(cè)定實(shí)驗(yàn)表明歸脾顆粒對(duì)灌酒小鼠胃腸道吸收及肝臟代謝功能有明顯的提高作用;小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)，表明歸脾顆?？裳娱L(zhǎng)睡眠時(shí)間和提高質(zhì)量，具有一定的安神助眠效果，這與戴詩(shī)文等［14］開(kāi)展的對(duì)歸脾顆粒劑的藥效學(xué)研究中提到歸脾的安神之功效相符。此外，歸脾顆粒還能增加小鼠食欲，從而增加體質(zhì)量，大幅度降低死亡率。

由王緒平等［15］進(jìn)行的歸脾顆粒劑對(duì)肝灌流液中酶AST、ALT 的影響實(shí)驗(yàn)，測(cè)定肝灌流液中天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)，兩者是肝細(xì)胞內(nèi)的主要功能酶，在肝組織損傷及壞死時(shí)，酶從細(xì)胞內(nèi)漏出入血，故檢測(cè)小鼠血中ALT 和AST 活性的高低可判斷其肝細(xì)胞損傷的程度［16］，結(jié)果提示歸脾顆粒劑對(duì)肝臟無(wú)毒性影響，這為歸脾顆粒劑的臨床合理用藥提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)的肝組織病例切片，進(jìn)一步證實(shí)了歸脾顆粒劑對(duì)肝臟無(wú)毒性，且具有一定的修復(fù)作用。

本實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)血醇-時(shí)間變化曲線、體質(zhì)量及病理切片等因素一定程度上說(shuō)明歸脾顆粒對(duì)機(jī)體有較明顯的正作用，而對(duì)于機(jī)體修復(fù)的程度，特別是胃腸道及肝臟具有保護(hù)及修復(fù)作用，還有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)論證。具體可對(duì)胃腸道生化指標(biāo)作進(jìn)一步研究，以確證歸脾顆粒對(duì)胃腸道也有保護(hù)作用，增加其運(yùn)化吸收能力。如胃黏膜中內(nèi)皮素(ET)、一氧化氮合成酶(NOS)、生長(zhǎng)抑素(SS)和血管活性腸肽(VIP)，內(nèi)皮素(ET)和一氧化氮(NO)考察。對(duì)肝臟功能可進(jìn)行天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)的測(cè)定。以上指標(biāo)的測(cè)定將是歸脾顆粒對(duì)機(jī)能功能器官是否有明顯的保護(hù)作用的有力佐證。

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