曾聰彥， 胡 瑩， 高玉橋， 梅全喜， 鐘希文， 戴衛(wèi)波， 林 慧， 張文霞

(廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山市中醫(yī)院，廣東 中山528400)

傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為，急性缺血性中風(fēng)患者多因積損正衰、勞倦內(nèi)傷致肝腎陰液虧損，陰虛而致肝陽(yáng)化風(fēng)，加之陽(yáng)熱煎熬津液成痰，致使痰阻血脈，瘀滯不通而發(fā)為中風(fēng)。因此，“風(fēng)火挾痰瘀痹阻腦絡(luò)”應(yīng)為其主要病機(jī)［1-3］。根據(jù)上述中風(fēng)主要病機(jī)，選用石決明、珍珠母、鉤藤、豨薟草、牡丹皮、赤芍、三七等具有熄風(fēng)、活血、解毒的中藥組方，并嚴(yán)格按中藥制劑研究技術(shù)指導(dǎo)原則有關(guān)規(guī)定要求，從處方優(yōu)選以及制備工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、臨床觀察等多方面綜合研究［4-6］，最終研制成具有“熄風(fēng)通腦、祛痰解毒、活血化瘀”的熄風(fēng)通腦膠囊。該膠囊正是針對(duì)消除中風(fēng)的“風(fēng)火挾痰瘀痹阻腦絡(luò)”病機(jī)而達(dá)到治療急性缺血性腦中風(fēng)病患者，促進(jìn)患者各項(xiàng)功能的恢復(fù)。經(jīng)我院多年臨床觀察，熄風(fēng)通腦膠囊對(duì)腦梗死急性期所致的的肢體偏癱、口角歪斜、語(yǔ)方謇澀等治療有顯著療效，為探討該制劑治療急性缺血性腦中風(fēng)機(jī)理，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)改良線栓法制備腦缺血再灌注損傷大鼠模型，觀察熄風(fēng)通腦膠囊對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠的血液流變學(xué)指標(biāo)的影響，為該藥在急性缺血性腦梗死防治中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性SD 大鼠，體質(zhì)量280 ～350 g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SCXK (粵)2013-0020。

1.2 試劑與儀器 熄風(fēng)通腦膠囊(中山市中醫(yī)院制劑室，批號(hào)20130911);步長(zhǎng)腦心通膠囊(咸陽(yáng)步長(zhǎng)制藥有限公司，批號(hào)130149);釣魚尼龍線，直徑0.26 mm，日本生產(chǎn);LC-N6 型血液流變儀(北京普利生);真空采血管;GL-20G-II 高速冷凍離心機(jī)(上海安亭)。

1.3 動(dòng)物分組、給藥途徑及劑量 健康雄性SD 大鼠120只，隨機(jī)分為6 組，即熄風(fēng)通腦膠囊低劑量組 (0.864 g/kg)、熄風(fēng)通腦膠囊中劑量組(1.728 g/kg)、熄風(fēng)通腦膠囊高劑量組 (3.456 g/kg)、步長(zhǎng)腦心通組 (0.864 g/kg)、模型組和假手術(shù)組。正常飼養(yǎng)7 d 后，給藥組連續(xù)灌胃給藥7 d，1 次/d;模型組和假手術(shù)組給予等量蒸餾水灌胃。

1.4 動(dòng)物模型制備 末次灌胃1 h 后，對(duì)大鼠手術(shù)造模，術(shù)前12 h 禁食，不禁水。

參照Z(yǔ)ea-Longa［7］的大腦中動(dòng)脈線栓法，并加以改良。用魚線制備線栓，頭端燒圓口，并在線栓的1.8 ～2.5 cm處做好標(biāo)記。大鼠腹腔注射10%的水合氯醛(350 mg/kg)麻醉后，采用仰臥位固定，頸部備皮，皮膚消毒，在頸部正中切開，分離皮下筋膜及肌肉組織，使右側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)及頸內(nèi)動(dòng)脈(ECA)、頸外動(dòng)脈(ICA)充分暴露，結(jié)扎頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈，于頸總動(dòng)脈分叉切口處向頸內(nèi)動(dòng)脈插入線栓至之前標(biāo)記處，感覺(jué)有阻力即達(dá)到大腦中動(dòng)脈起始部，使其血流完全阻斷，結(jié)扎頸內(nèi)動(dòng)脈。術(shù)后縫合傷口，用紗布浸泡生理鹽水覆蓋傷口，并于2 h 后拔出魚線。手術(shù)期間及術(shù)后24 h 應(yīng)保持大鼠肛溫維持在37 ℃。假手術(shù)組僅分離右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈，而后縫合傷口［8-10］。

1.5 血液流變學(xué)檢測(cè) 造模后24 h 將大鼠麻醉并于腹主動(dòng)脈取血，全血快速取入綠頭管中并輕輕搖動(dòng)，2 h 內(nèi)測(cè)定全血黏度、血漿黏度和紅細(xì)胞壓積，計(jì)算紅細(xì)胞(RBC)聚集指數(shù)、變形指數(shù)和剛性指數(shù)。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理運(yùn)用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料數(shù)值采用(±s)描述，組間比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA)，組間兩兩比較采用LSD 法進(jìn)行，以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠全血黏度、血漿黏度的影響與假手術(shù)組比較，模型組全血黏度低、中、高切變率在10、60、150 S-1均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);與假手術(shù)組比較，模型組血漿黏度顯著升高(P ＜0.05)。與模型組比較，熄風(fēng)通腦膠囊低、中、高劑量組及步長(zhǎng)腦心通組在低、中、高切變率時(shí)全血黏度均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);與模型對(duì)照組比較，熄風(fēng)通腦膠囊低、中、高劑量組及步長(zhǎng)腦心通組的血漿黏度顯著降低(P ＜0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠全血黏度、血漿黏度的影響(±s，n=10)

注:與假手術(shù)組比較，△P ＜0.05;與模型組比較，* P ＜0.05

組別 劑量/(g·kg -1) 全血黏度/(mPa·s)低切(10 S -1) 中切(60 S -1) 高切(150 S -1) 血漿黏度/(mPa·s)熄風(fēng)通腦膠囊低劑量組 0.864 11.30 ±1.07* 5.73 ±0.53* 4.53 ±0.36* 1.38 ±0.10*熄風(fēng)通腦膠囊中劑量組 1.728 10.90 ±1.19* 5.69 ±0.48* 4.56 ±0.39* 1.37 ±0.07*熄風(fēng)通腦膠囊高劑量組 3.456 10.82 ±1.01* 5.17 ±0.57* 4.38 ±0.45* 1.36 ±0.08*步長(zhǎng)腦心通組 0.864 10.88 ±1.16* 5.50 ±0.50* 4.36 ±0.39* 1.38 ±0.07*模型組 - 12.53 ±1.71△ 6.50 ±0.76△ 5.13 ±0.68△ 1.62 ±0.27△假手術(shù)組10.23 ±0.71 5.43 ±0.40 4.14 ±0.36 1.23 ±0.12-

2.2 對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠紅細(xì)胞聚集指數(shù)、紅細(xì)胞變形指數(shù)和紅細(xì)胞剛性指數(shù)的影響 與假手術(shù)組比較，模型組的紅細(xì)胞剛性指數(shù)和紅細(xì)胞聚集指數(shù)顯著升高，紅細(xì)胞變形指數(shù)則顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);與模型組比較，熄風(fēng)通腦膠囊各劑量組及步長(zhǎng)腦心通組的紅細(xì)胞剛性指數(shù)、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、紅細(xì)胞變形指數(shù)均有顯著改善(P ＜0.05)。提示熄風(fēng)通腦膠囊可明顯改善腦缺血再灌注損傷后紅細(xì)胞應(yīng)激能力。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠紅細(xì)胞聚集指數(shù)、紅細(xì)胞變形指數(shù)和紅細(xì)胞剛性指數(shù)的影響(±s，n=10)

表2 對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠紅細(xì)胞聚集指數(shù)、紅細(xì)胞變形指數(shù)和紅細(xì)胞剛性指數(shù)的影響(±s，n=10)

注:與假手術(shù)組比較，△P ＜0.05;與模型組比較，* P ＜0.05

組別 劑量/(g·kg -1)紅細(xì)胞聚集指數(shù) 紅細(xì)胞變形指數(shù) 紅細(xì)胞剛性指數(shù)熄風(fēng)通腦膠囊低劑量組 0.864 2.53 ±0.27* 0.79 ±0.06* 5.08 ±0.38*熄風(fēng)通腦膠囊中劑量組 1.728 2.45 ±0.29* 0.82 ±0.05* 4.94 ±0.80*熄風(fēng)通腦膠囊高劑量組 3.456 2.37 ±0.33* 0.82 ±0.07* 4.55 ±0.56*步長(zhǎng)腦心通組 0.864 2.44 ±0.27* 0.82 ±0.07* 4.39 ±1.59*模型組 - 3.02 ±0.44△ 0.59 ±0.08△ 5.98 ±0.79△假手術(shù)組2.26 ±0.17 0.96 ±0.08 4.79 ±0.58-

2.3 對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠紅細(xì)胞壓積、血沉的影響與假手術(shù)組比較，模型組血沉、紅細(xì)胞壓積顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);與模型組比較，熄風(fēng)通腦膠囊各劑量組及步長(zhǎng)腦心通組的紅細(xì)胞壓積、血沉均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠紅細(xì)胞壓積、血沉的影響(±s，n=10)

表3 對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠紅細(xì)胞壓積、血沉的影響(±s，n=10)

注:與假手術(shù)組比較，△P ＜0.05;與模型組比較，* P ＜0.05

組別 劑量/(g·kg -1)紅細(xì)胞壓積/%血沉/(mm·h -1)熄風(fēng)通腦膠囊低劑量組 0.864 2.53 ±0.27* 0.83 ±0.05*熄風(fēng)通腦膠囊中劑量組 1.728 2.45 ±0.29* 0.82 ±0.07*熄風(fēng)通腦膠囊高劑量組 3.456 2.37 ±0.33* 0.79 ±0.06*步長(zhǎng)腦心通組 0.864 2.44 ±0.27* 0.82 ±0.07*模型組 - 3.02 ±0.44△ 0.96 ±0.08△假手術(shù)組- 2.26 ±0.17 0.77 ±0.05

3 討論

腦缺血再灌注導(dǎo)致腦組織繼發(fā)性損傷的病理生理過(guò)程是一個(gè)多環(huán)節(jié)、多途徑損傷的復(fù)雜酶促級(jí)聯(lián)反應(yīng)，其病理機(jī)制非常復(fù)雜，與多種因素有關(guān)，其中一個(gè)的重要因素就是血液流變學(xué)改變。腦缺血再灌注時(shí)可耗竭三磷酸腺苷(ATP)，堆積大量乳酸，降低紅細(xì)胞膜ATP 活性，顯著降低紅細(xì)胞變形能力，升高血黏度，增強(qiáng)凝血活性及血小板聚集性，進(jìn)而阻塞微血管、使血流不暢，進(jìn)一步加重腦部微循環(huán)障礙，導(dǎo)致腦組織的缺血缺氧現(xiàn)象加重［11］。

在疾病的預(yù)防、診斷、預(yù)后判斷中，對(duì)血液流變學(xué)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值，尤其是在對(duì)致死率和致殘率高的心腦血管病應(yīng)用中顯得更為重要［12］。作為血液流變特性最基本的指標(biāo)——血黏度，主要包括全血黏度和血漿黏度，是研究血液流變學(xué)的最主要指標(biāo)，它與血液流動(dòng)性呈負(fù)相關(guān)，而與缺血性腦血管病的發(fā)生率呈正相關(guān)。血黏度增高不僅可造成血流緩慢，直接導(dǎo)致腦組織灌注不足而發(fā)生缺氧及代謝障礙，還可導(dǎo)致血管壁物理性損傷和內(nèi)皮細(xì)胞損傷，為血小板聚集提供機(jī)會(huì)，促進(jìn)血栓形成［13］。另外，紅細(xì)胞聚集性和變形性則分別對(duì)低切變率血黏度和高切變率血黏度具有重要影響，紅細(xì)胞聚集性增加，可使紅細(xì)胞變形能力和血液流動(dòng)性降低，從而升高血黏度。紅細(xì)胞變形性增加，則降低紅細(xì)胞的聚集性，增加血液流動(dòng)性而降低血液黏度［14］。作為血液流變學(xué)主要指標(biāo)的血黏度、紅細(xì)胞變形性指數(shù)和紅細(xì)胞聚集性指數(shù)等也是腦缺血再灌注損傷的病理生理過(guò)程中一個(gè)重要考察指標(biāo)，通過(guò)考察預(yù)防性用藥對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠血液流變學(xué)主要指標(biāo)變化情況，可初步了解該藥物對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。

本實(shí)驗(yàn)證實(shí)，腦缺血2 h、再灌注24 h 后，大鼠全血黏度、血漿黏度、血沉、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞剛性指數(shù)和紅細(xì)胞聚集指數(shù)均有不同程度升高，紅細(xì)胞變形性指數(shù)則降低。熄風(fēng)通腦膠囊能有效抑制腦缺血再灌注大鼠全血黏度、血漿黏度、血沉、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞剛性指數(shù)和紅細(xì)胞聚集指數(shù)升高，升高紅細(xì)胞變形性指數(shù)。表明熄風(fēng)通腦膠囊能改善腦缺血再灌注損傷大鼠血液流變性，進(jìn)而改善微循環(huán)、使腦血流量增加、保護(hù)缺血再灌注損傷腦組織，為該藥的開發(fā)和臨床應(yīng)用該藥防治急性缺血性腦梗塞方面提供理論依據(jù)。

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