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（江西省九江市第一人民醫(yī)院，江西 九江 332000）

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是臨床常見(jiàn)惡性腫瘤疾病，由于其發(fā)病隱匿且多數(shù)患者并無(wú)典型臨床表現(xiàn)，為臨床診斷及治療工作造成一定困難。本文將選取我院于2013年10月～2014年9月期間收治的400例鼻咽癌患者給予臨床研究，探討鼻咽癌患者靜脈血、鼻咽分泌物EB 病毒DNA 檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性，為提高鼻咽癌正確檢出率提供可靠依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 400例鼻咽癌患者（均屬于非角化上皮細(xì)胞癌）中男性241 例，女性159 例，年齡36～82歲，平均年齡（59.82±2.11）歲，臨床分期：Ⅰ期26例、Ⅱ期139例、Ⅲ期173例、Ⅳ期62例。

1.2 方法

1.2.1 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) ①經(jīng)臨床病理檢查符合世界衛(wèi)生組織（world health organization，WHO）制定的鼻咽癌診斷標(biāo)準(zhǔn)；②排除合并其他惡性腫瘤情況；③排除精神類(lèi)疾病者；④排除心、肝、腎等機(jī)體重要器官?lài)?yán)重病變者；⑤對(duì)本次研究所需靜脈血、鼻咽分泌物EB 病毒DNA 檢測(cè)具有良好耐受性；⑥意識(shí)清醒，可積極配合本次研究；⑦排除處于妊娠、哺乳、產(chǎn)褥等特殊生理時(shí)期女性人群；⑧排除免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)疾病者；⑨患者及家屬對(duì)本次研究?jī)?nèi)容完全知情。

1.2.2 研究方法 對(duì)400例鼻咽癌患者臨床資料進(jìn)行回顧性分析，指定具有專(zhuān)業(yè)知識(shí)及豐富經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)醫(yī)師完成所有患者靜脈血、鼻咽分泌物EB 病毒DNA 檢測(cè)工作，分析內(nèi)容包括檢測(cè)方法、檢測(cè)結(jié)果等，分析方法為查閱本次就診相關(guān)病歷資料、詢(xún)問(wèn)當(dāng)事接診醫(yī)護(hù)人員、咨詢(xún)患者本人及家屬等。將所得資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后獲得結(jié)論。

1.2.3 檢測(cè)方法 ①儀器及試劑：上海復(fù)星醫(yī)學(xué)科技發(fā)展有限公司提供EB病毒DNA 檢測(cè)試劑盒，北京全式金生物技術(shù)有限公司提供Real－time PCR 試劑盒，中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供DA 7600 型實(shí)時(shí)熒光定量PCR 擴(kuò)增儀，日本TaKaRa Bio株式會(huì)社（日本TaKaRa公司）提供基因組DNA 提取試劑及RT－PCR 試劑盒；②鼻咽分泌物處理：鼻咽分泌物需經(jīng)鼻咽纖維鏡附帶吸引系統(tǒng)吸取獲得，將所得鼻咽分泌物放置于密閉容器（玻璃管）中送檢，于玻璃管中加入滅菌后的0.9%、1ml NaCl溶液，充分震蕩5min后吸取全部液體并放于1.5ml離心管中，經(jīng)5 min離心（每分鐘轉(zhuǎn)速12 000r）后收集沉淀物，加入50μl DNA提取液并將其充分混勻，10 min、100 ℃恒溫處理后再次離心（持續(xù)5min、轉(zhuǎn)速12 000r／min）備用；③靜脈血處理：于清晨空腹采集400例鼻咽癌患者靜脈血液1 ml作為檢測(cè)樣本（放于干燥試管中），加入滅菌后的0.9%、1ml NaCl溶液并輕輕震蕩使之混合均勻，將稀釋的血液標(biāo)本加入存有500μl淋巴細(xì)胞分離液的試管中，經(jīng)每分鐘2 000r速度給予20min離心，將離心后從上至下第二層（白細(xì)胞層）吸取至1.5 ml離心管中，給予5min離心（每分鐘轉(zhuǎn)速12 000r）后取沉淀物并加入50μl DNA 提取液，充分震蕩混勻給予10 min、100 ℃恒溫處理，之后再次離心（持續(xù)5 min、轉(zhuǎn)速12 000r／min）備用；④PCR：將5μl DNA 模板提取液加入PCR 反應(yīng)管中，設(shè)定30μl擴(kuò)增體系總?cè)萘?，?biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)需利用標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照品（已知EB 病毒DNA 含量）制備（設(shè)置陽(yáng)性、陰性對(duì)照），將PCR 反應(yīng)管放于熒光定量PCR 儀器中給予2 min、93 ℃預(yù)變性后進(jìn)入循環(huán)，共四十個(gè)循環(huán)，其中93 ℃45s、55℃60s十個(gè)循環(huán)，93 ℃30s、55 ℃45s三十個(gè)循環(huán)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩組間率的比較，采用χ2檢驗(yàn)，以P ＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

400例鼻咽癌患者經(jīng)靜脈血及鼻咽分泌物分別進(jìn)行EB病毒DNA 檢測(cè)后，鼻咽分泌物EB 病毒DNA檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率高達(dá)96.75%，顯著高于靜脈血EB 病毒DNA 檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率78.50%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 400例鼻咽癌患者靜脈血、鼻咽分泌物EB病毒DNA 檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 （n，%）

3 討論

研究表明［1］，盡早發(fā)現(xiàn)并給予積極治療是保障鼻咽癌患者療效及預(yù)后的關(guān)鍵因素，而復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移則是導(dǎo)致此類(lèi)患者無(wú)法獲得滿(mǎn)意治療及預(yù)后效果的主要原因。近年來(lái)，由于多種因素（生活環(huán)境、壓力、結(jié)構(gòu)、習(xí)慣等）不斷改變，鼻咽癌發(fā)生率呈顯著上升趨勢(shì)，如何準(zhǔn)確判斷病情是廣大醫(yī)務(wù)工作者共同關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題。

EB病毒屬于嗜人類(lèi)B淋巴細(xì)胞皰疹病毒，具有約172kb長(zhǎng)基因組，存在形式為線(xiàn)性雙鏈DNA。研究表明［2］，EB病毒最初由Barr及Epstein聯(lián)合發(fā)現(xiàn)，以往常認(rèn)為是導(dǎo)致傳染性單核細(xì)胞增多癥的主要原因。隨著臨床醫(yī)學(xué)水平不斷提高，有學(xué)者提出EB 病毒與Hodgkin’s病、Burkitt’s淋巴瘤、低分化鼻咽癌、胃癌等疾病發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)［3］。有研究顯示［4］，由于EB病毒長(zhǎng)期潛伏于B 淋巴細(xì)胞、口咽部上皮細(xì)胞中，且以游離環(huán)狀DNA 形式于胞漿中存在，機(jī)體發(fā)生EB病毒感染后，其首先于口咽部上皮細(xì)胞內(nèi)發(fā)生增殖，之后對(duì)B 淋巴細(xì)胞造成感染，發(fā)生感染的B 淋巴細(xì)胞進(jìn)入人體血液循環(huán)后進(jìn)而引發(fā)全身感染。Mutirangura等［5］研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)鼻咽癌患者給予血清EB 病毒DNA檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，而對(duì)具有EB 病毒感染史的健康人群給予血清EB病毒DNA 檢測(cè)結(jié)果則呈陰性，提示血清中EB病毒DNA 具有腫瘤源性，對(duì)疑似鼻咽癌患者血清中EB病毒DNA 進(jìn)行有效檢測(cè)可準(zhǔn)確判斷病情。熒光定量聚合物酶鏈反應(yīng)技術(shù)（fluorescence quantitative polymerase chain reaction，F(xiàn)QPCR）是近年來(lái)應(yīng)用于臨床疾病診斷的新方法，通過(guò)對(duì)EB 病毒DNA（EBV－DNA）進(jìn)行準(zhǔn)確檢測(cè)可顯著提高鼻咽癌患者早期確診率及療效評(píng)估準(zhǔn)確性，已引起相關(guān)醫(yī)務(wù)工作者高度重視［6］。

吳敬波等［7］提出，機(jī)體中僅少量EB 病毒分布于外周血液白細(xì)胞中，而大量EB 病毒均存在于唾液及唾液腺內(nèi)，因此對(duì)疑似鼻咽癌患者鼻咽分泌物EB 病毒DNA 進(jìn)行有效檢測(cè)，可顯著提高EB 病毒檢出率，對(duì)獲得準(zhǔn)確臨床診斷結(jié)果具有積極意義。本文研究可知，400例鼻咽癌患者經(jīng)靜脈血EB 病毒DNA 檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率僅為78.50%，而經(jīng)鼻咽分泌物EB 病毒DNA 檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率則高達(dá)96.75%，提示鼻咽分泌物EB病毒DNA 檢出率顯著高于靜脈血，與上述研究結(jié)果相符。

綜上所述，臨床醫(yī)生應(yīng)準(zhǔn)確掌握EB 病毒相關(guān)特征，對(duì)疑似患者積極給予鼻咽分泌物EB病毒DNA 檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果可顯著提高疾病檢出率，有利于保障患者生活質(zhì)量及生命安全，值得今后推廣。

［1］ 文忠，肖健云，唐發(fā)清，等.鼻咽癌活檢組織及外周血白細(xì)胞EB病毒DNA 的檢測(cè)機(jī)其意義［J］.中國(guó)耳鼻咽喉顱底外科雜志，2013，5（2）：90－94.

［2］ 吳玉紅.兩種不同方法檢驗(yàn)EB病毒的臨床效果分析［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（6）：24－26.

［3］ 張華，孟敏華，王為，等.鼻咽癌組織中EB病毒DNA 檢測(cè)的臨床意義［J］.浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，2014，5（3）：58－59.

［4］ 廖勇，羅志強(qiáng).血漿髓病毒DNA 定量測(cè)定對(duì)鼻咽癌的診斷價(jià)值［J］.中國(guó)耳鼻咽喉顱底外科雜志，2013，13（3）：186－188.

［5］ Mutirangura A，Pornthanakasem W，Theamboonlers A，et a1.Epstein－barr viral DNA in serum of patients with nasopharyngeal carcinoma［J］.Clin Cancer Res，1998，4（3）：665－669.

［6］ 龔曉昌，李金高，袁霞，等.血漿EBV DNA 水平測(cè)定在監(jiān)測(cè)鼻咽癌放療后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移中的臨床意義［J］.實(shí)用癌癥雜志，2014，22（2）：150－153.

［7］ 吳敬波，范娟，任培容.等.鼻咽分泌物EB病毒檢測(cè)與鼻咽癌［J］.四川醫(yī)學(xué)，2012，21（3）：204－206.