王 剛，劉力婕，郝 光

鼠神經(jīng)生長因子聯(lián)合激素治療對格林巴利綜合征患者血清IL-12、IL-18的影響

王 剛，劉力婕，郝 光

目的 探討鼠神經(jīng)生長因子聯(lián)合激素治療對格林巴利綜合征患者血清白細(xì)胞介素(IL)-12、IL-18的影響。方法 采用雙盲法將我院2013年10月—2014年10月收治的格林巴利綜合征患者80例隨機(jī)分為觀察組和對照組，各40例。觀察組采用鼠神經(jīng)生長因子聯(lián)合激素進(jìn)行治療，對照組單純采用甲潑尼松龍進(jìn)行治療。觀察對比兩組患者治療前后血清中IL-12、IL-18的蛋白表達(dá)情況和淋巴白皮細(xì)胞IL-12、IL-18受體的mRNA表達(dá)情況，分析兩種治療方法對二者的影響。結(jié)果 兩組患者治療后IL-12和IL-18蛋白表達(dá)均有所降低(P<0.05)，觀察組降低水平明顯比對照組低(P<0.05)。而且二者蛋白表達(dá)和受體mRNA的蛋白表達(dá)都具有正相關(guān)性。觀察組治療總有效率為95.0%，明顯高于對照組的80.0%(χ2=3.645，P<0.05)，觀察組患者不良反應(yīng)發(fā)生率為2.5%，對照組為5.0%，兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.985，P>0.05)。結(jié)論 鼠神經(jīng)生長因子聯(lián)合激素治療格林巴利綜合征患者可以有效抑制IL-12和IL-18的蛋白表達(dá)，從而抑制促炎癥因子，療效顯著。

格林巴利綜合征；鼠神經(jīng)生長因子；激素；白細(xì)胞介素-12；白細(xì)胞介素-18

格林巴利綜合征(GBS)是兒童中比較常見的周圍神經(jīng)性疾病，又被稱為急性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)根炎[1]，其特點是周圍神經(jīng)急性炎性脫髓鞘。格林巴利綜合征的臨床表現(xiàn)為四肢麻痹、無力，且呈對稱性；嚴(yán)重的經(jīng)常累計顱神經(jīng)支配的肌肉，甚至出現(xiàn)呼吸肌無力，死亡等[2]。白細(xì)胞介素(IL)-12和IL-18都是促炎癥因子，IL-12誘導(dǎo)Th0細(xì)胞分化成為Th1細(xì)胞，并最終成長為炎癥效應(yīng)細(xì)胞，而IL-18的作用是協(xié)同并增強IL-12的誘導(dǎo)分化作用[3]。目前格林巴利綜合征的主要治療方法是血漿置換、丙種球蛋白、激素療法等。其中丙種球蛋白可以縮短療程，減緩病情。有學(xué)者研究表明[4]，鼠神經(jīng)生長因子(MNGF)可以對周圍神經(jīng)損傷進(jìn)行修復(fù)，并且可以促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的生長、發(fā)育。為了更好的治療格林巴利綜合征患者，同時探究格林巴利綜合征患者治療前后血清白介素IL-12、IL-18的改變狀況。本研究選取2013年10月—2014年10月收治的格林巴利綜合征為研究對象，探討研究鼠神經(jīng)生長因子聯(lián)合激素對格林巴利綜合征患者血清IL-12、IL-18的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)抽取我院2013年10月—2014年10月收治的確診為格林巴利綜合征的患者共80例，男46例，女34例，年齡1歲～11歲(5.3歲±1.2歲)。所有患者病歷均符合公認(rèn)的Asbury標(biāo)準(zhǔn)，并且沒有其他炎癥、腫瘤、風(fēng)濕疾病，血細(xì)胞沉降率指標(biāo)在正常范圍內(nèi)，無外傷和應(yīng)激反應(yīng)等。將80例患者平均分為兩組，觀察組40例，男23例，女17例；年齡5.2歲±1.3歲；病程7.8月±2.1月。對照組40例，男23例，女17例；年齡5.4歲±1.1歲；病程7.9月±2.3月。兩組患者在年齡、性別、文化程度、家庭狀況、臨床表現(xiàn)、平均病程等方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 方法 兩組患者入院之后都需要接受相應(yīng)的治療，包括應(yīng)用抗菌藥物，使呼吸道保持順暢，還有各種維生素和能量支持治療方法。對照組采用單純的激素治療方法：給予甲潑尼松龍(Upjon公司生產(chǎn))15 mg/kg～30 mg/kg，溶于150 mL～250 mL 5%的葡萄糖注射液中靜脈輸注，連續(xù)輸注5 d后，改為每天口服潑尼松1.5 mg～2.0 mg，需要持續(xù)2周～3周，具體需要根據(jù)實際病情酌量減少或者停用。觀察組在對照組的基礎(chǔ)上每天肌肉注射鼠神經(jīng)生長因子30 μg。兩組均治療1個月。

1.3 檢測指標(biāo)及方法 觀察兩組IL-12和IL-18的蛋白表達(dá)情況、淋巴細(xì)胞表面IL-12和IL-18受體mRNA的表達(dá)情況以及治療效果、不良反應(yīng)發(fā)生情況。

1.3.1 IL-12和IL-18的蛋白表達(dá) 所有患者第2天早晨空腹情況下抽取10 mL靜脈血，然后取出淋巴細(xì)胞分離液10 mL加入到試管中，取5 mL抗凝血劑沿著試管壁小心地加入到上層的分離液中，離心5 min，對上層血清進(jìn)行分裝，放置在-20 ℃的環(huán)境下保存?zhèn)溆谩Ｓ梦苄⌒牡匚? mL中間白膜層即淋巴細(xì)胞[5]，置入10 mL含有10%胎牛血清的PBS中，離心5 min，撇去上層清液，置入50 μL PBS懸浮淋巴細(xì)胞(總數(shù)約為6×106/L)。嚴(yán)格按照血清蛋白試劑盒(由美國Sigma公司生產(chǎn))的使用說明書，逐步測定IL-12和IL-18的蛋白表達(dá)情況。

1.3.2 淋巴細(xì)胞表面IL-12和IL-18受體mRNA的表達(dá) 利用Trizol方法[6]提取出細(xì)胞總RNA，取其逆轉(zhuǎn)錄2 μg，PCR反應(yīng)條件分別為：94 ℃預(yù)變性5 min，55 ℃，45 s；95℃，45 s；72 ℃，90 s。引物由杭州聯(lián)科生物技術(shù)有限公司設(shè)計合成：其中β-actin共20個循環(huán)；IL-12受體mRNA共30個循環(huán)；IL-18受體mRNA共30個循環(huán)。然后取出5 μL PCR的樣品，使用2%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳。依據(jù)公式[7]：蛋白表達(dá)強度Rv=ILR/β-actin。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者IL-12、IL-18蛋白表達(dá)情況 兩組治療后外周血清中和腦脊液中兩種蛋白表達(dá)情況都比治療前有所降低，但是觀察組的效果更為顯著。而且IL-12與IL-18在外周血清和腦脊液中的蛋白表達(dá)都呈正相關(guān)性(r值分別為0.865，0.754，P<0.05)。詳見表1。

表1 兩組患者IL-12、IL-18蛋白表達(dá)情況(±s) pg/mL

2.2 兩組淋巴細(xì)胞表面IL-12和IL-18受體mRNA表達(dá)情況 治療后兩組患者外周血淋巴細(xì)胞表面IL-12、IL-18受體的mRNA表達(dá)均比治療前有所降低(P<0.05)，且兩者的蛋白表達(dá)呈現(xiàn)顯著的正向相關(guān)性(r=0.848)。詳見表2。

表2 兩組治療前后IL-12、IL-18受體的mRNA蛋白表達(dá)(±s)

2.3 兩組患者治療效果及不良反應(yīng)情況 觀察組患者痊愈12例，明顯好轉(zhuǎn)15例，好轉(zhuǎn)10例，無效2例，總有效率95.0%；對照組患者痊愈8例，明顯好轉(zhuǎn)10例，好轉(zhuǎn)14例，無效8例，總有效率80.0%。觀察組總有效率明顯高于對照組(χ2=3.645，P<0.05)。觀察組患者不良反應(yīng)發(fā)生率為2.5%，對照組為5.0%，兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.985，P>0.05)。

3 討 論

格林巴利綜合征是自身免疫系統(tǒng)性周圍神經(jīng)病，其發(fā)病率為0.6/10萬～4.0/10萬[8]。目前為止，其發(fā)病機(jī)制尚未明確，也沒有顯著的治療方法。有研究表明[9]，格林巴利綜合征是因為感染或者其他原因?qū)е聶C(jī)體免疫系統(tǒng)功能損壞，從而對周圍神經(jīng)免疫的耐受性進(jìn)行破壞，T細(xì)胞被激活，成為自身的免疫應(yīng)答細(xì)胞，然后釋放出大量的促炎癥因子，使得周圍神經(jīng)的脫髓鞘炎癥受損，包括IL-12和IL-18在內(nèi)的大量Th1細(xì)胞因子增強表達(dá)，而包括IL-4、IL-6、IL-10等在內(nèi)的拮抗細(xì)胞因子Th2的蛋白表達(dá)則顯著下降。促炎癥因子和抑炎癥因子協(xié)調(diào)失衡，導(dǎo)致炎癥的發(fā)生。IL-12在Th1細(xì)胞因子的活化增強過程中，起到了至關(guān)重要的促進(jìn)作用，同時IL-18起到輔助增強的作用。有研究認(rèn)為鼠神經(jīng)生長因子可以對周圍神經(jīng)損傷進(jìn)行修復(fù)，并且可以促進(jìn)生精細(xì)胞的生長、發(fā)育，有效抑制IL-12、IL-18的蛋白表達(dá)，以及兩者受體的mRNA的蛋白表達(dá)，從而抑制促炎癥因子的作用[10-12]。有文獻(xiàn)指出，激素可以促進(jìn)IL-4、IL-6、IL-10等Th2細(xì)胞因子的表達(dá)，增強抑炎癥因子的作用[13，14]。本研究通過對比鼠神經(jīng)生長因子聯(lián)合激素的治療方法和單純地使用鼠神經(jīng)生長因子對格林巴利綜合征患者進(jìn)行治療，結(jié)果顯示，鼠神經(jīng)生長因子聯(lián)合激素療法可以有效抑制IL-12和IL-18的蛋白表達(dá)，對治療格林巴利綜合征效果顯著，而且IL-12、IL-18兩者的蛋白表達(dá)具有一定的正相關(guān)性。但是本研究中由于所取患者有一定的局限性，而且樣本稍少，難免存在一定的偏頗，還需要廣大學(xué)者進(jìn)一步來完善結(jié)論，為格林巴利綜合征患者的治療提供新的可行方案。

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(本文編輯 郭懷印)

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10．3969/j．issn．1672-1349．2015．10．031

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2015-04-06)