黃金保，徐秀亮，胡義忠，吳芬，蘇靜

(池州市人民醫(yī)院檢驗科，安徽池州247000)

病毒性肝炎患者血清自身抗體的變化

黃金保，徐秀亮，胡義忠，吳芬，蘇靜

(池州市人民醫(yī)院檢驗科，安徽池州247000)

目的探討病毒性肝炎患者自身抗體的變化及其與病毒性肝炎的相關(guān)性。方法采用免疫印跡法檢測370例病毒性肝炎患者(包括甲型肝炎56例、乙型肝炎157例、丙型肝炎115例、丁型肝炎23例、戊型肝炎19例)抗線粒體抗體(AMA)、抗線粒體抗體2型(AMA-2)、抗平滑肌抗體(SMA)、抗肝細胞溶質(zhì)抗原1型抗體(LC-1)、抗肝腎微粒抗體(LKM)、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗體(SLA/LP)，同時采用免疫熒光法檢測抗核抗體(ANA)。結(jié)果病毒性肝炎患者AMA總陽性率為7.03%、AMA-M2總陽性率為3.78%、SMA總陽性率為0.81%、LC-1總陽性率為0.54%、LKM總陽性率為1.89%、SLA/LP總陽性率為0%、ANA總陽性率為18.38%。5種病毒性肝炎中以丙型肝炎患者自身抗體陽性率最高，為62.61%，且以ANA陽性為主(33.91%);乙型肝炎次之，為26.75%，也以ANA陽性為主(15.29%);明顯高于其它3種病毒性肝炎(甲型肝炎8.93%、丁型肝炎4.35%)、戊型肝炎0%)。結(jié)論病毒性肝炎患者血清中存在多種自身抗體，其中又以乙型肝炎、丙型肝炎多見，自身抗體中則以ANA為主。對病毒性肝炎患者進行自身抗體檢測有助于了解患者機體免疫狀況，以便指導臨床用藥。

自身抗體;血清;病毒性肝炎

我國為肝炎高發(fā)地區(qū)，其中以病毒性肝炎最為常見，急性病毒感染后可進展為慢性。慢性病毒性肝炎中則以慢性乙型肝炎和丙型肝炎為主，其產(chǎn)生及發(fā)展可能涉及到患者自身抗原出現(xiàn)的免疫應答及其產(chǎn)生的多種自身抗體。研究顯示嗜肝病毒感染機體與相關(guān)藥物治療均可能會誘發(fā)患者自身免疫[1]，造成肝細胞免疫損傷與炎癥性壞死，長期的自身免疫現(xiàn)象則可能會誘發(fā)肝細胞惡變[2]。近年來，病毒性肝炎的自身免疫現(xiàn)象引發(fā)了諸多研究者的關(guān)注，肝炎病毒性感染者血清存在的自身抗體主要包括抗線粒體抗體(antimitochondrial antibody，AMA)、抗線粒體抗體2型IgG(AMA-M2)、抗平滑肌抗體(anti-smooth muscle antibody，SMA)、抗肝細胞胞質(zhì)抗原1型抗體(anti-liver cytosol type 1 antibody，LC-1)、抗肝腎微?？贵w(anti-liver/kidney microsomal，LKM)、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗體(anti-soluble liver antigen/live pancreatic antigen，SLA/LP)、抗核抗體(anti-nuclear antibody，ANA)等。為了解本地區(qū)病毒性肝炎患者自身抗體的存在狀況，我們對370例病毒性肝炎患者的自身抗體進行了分析。

材料和方法

一、對象

選取2011年1月至2014年12月在池州市人民醫(yī)院就診的病毒性肝炎患者370例，其中男214例、女156例，年齡5～80歲，包括甲型肝炎56例、乙型肝炎157例、丙型肝炎115例、丁型肝炎23例、戊型肝炎19例，全部病例均按《病毒性肝炎防治方案》[3]確診，排除其它自身免疫性疾病。

二、儀器和試劑

奧林帕斯熒光顯微鏡、歐蒙免疫印跡儀。AMA、AMA-M2、SMA、LC-1、LKM、SLA/LP、ANA檢測試劑盒均由北京和杰創(chuàng)新生物醫(yī)學科技有限公司提供。

三、方法

采用免疫熒光法檢測AMA、SMA、ANA。選擇HEp2與猴肝臟冰凍切片作為抗原生物薄片，待測血清均自1∶100開始稀釋，與基質(zhì)溫育、洗滌后，再與異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC)標記的羊抗人IgG繼續(xù)溫育，洗滌，甘油封片，于熒光顯微鏡下觀察，根據(jù)特異性熒光圖形判斷所得結(jié)果，若組織或細胞中出現(xiàn)明顯特異性綠色熒光則判定為陽性。采用蛋白印跡法檢測AMA-M2、LC-1、LKM、SLA/LP。

三、統(tǒng)計學分析

采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析。所有計數(shù)資料以頻數(shù)(f)表示，無序分類資料比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié)果

病毒性肝炎患者AMA總陽性率為7.03%、AMA-M2總陽性率為3.78%、SMA總陽性率為0.81%、LC-1總陽性率為0.54%、LKM總陽性率為1.89%、sLA/LP總陽性率為0%、ANA總陽性率為18.38%。5種病毒性肝炎中以丙型肝炎患者自身抗體陽性率最高，為62.61%，且以ANA陽性為主(33.91%);乙型肝炎次之，為26.75%，也以ANA陽性為主(15.29%);明顯高于其它3種病毒性肝炎。見表1。

表1 病毒性肝炎患者自身抗體檢測結(jié)果[例(%)]

討論

我國是病毒性肝炎的高發(fā)地區(qū)，其發(fā)病機制一直是醫(yī)學界研究的熱點，而近年來研究發(fā)現(xiàn)，除了自身免疫性肝病，病毒性肝炎患者也存在自身免疫現(xiàn)象，血清中可檢測出各種自身免疫抗體[4-6]。盡管自身免疫是人體正常的生理現(xiàn)象，但過度反應就會引發(fā)自身免疫性疾病。KAMMER等[7]認為病毒感染是自身免疫性疾病的啟動因子，靶細胞內(nèi)抗原成分改變或因病毒蛋白正常組織間存在同源性故可誘發(fā)機體自身免疫。研究顯示慢性肝病患者中約有1/3的患者血清中能檢測出自身抗體，其中以AMA、SMA、ANA為主[8]。丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)感染后可引發(fā)自身免疫性肝炎[9]，而HBV感染患者中可能檢測到ANA[10]。肝炎病毒感染后發(fā)生的多種自身抗體是病毒性肝炎病程進展中的特征性表現(xiàn)，可觸發(fā)自身免疫反應，同時感染發(fā)生后可經(jīng)多種途徑對機體免疫系統(tǒng)形成損傷，導致機體免疫耐受性受到破壞，加重肝臟損傷。病毒性肝炎患者自身抗體的檢測不僅對疾病的認知有重要意義，對其治療也存在一定的指導意義。

本研究結(jié)果顯示370例病毒性肝炎患者中除SLA/LP外，AMA、AMA-M2、SMA、LC-1、LKM、ANA均有檢測到。其中，ANA陽性率最高，占18.38%，其次為AMA和AMA-M2。在病毒性肝炎種類中則以丙型肝炎自身抗體檢出率最高，乙型肝炎次之。丙型肝炎之所以存在較明顯的自身免疫現(xiàn)象，是因為HCV感染可經(jīng)分子模擬現(xiàn)象激活自身免疫反應性CD8+T細胞，進而引發(fā)自身免疫。此外，HCV更易引發(fā)宿主自身免疫反應，也可能與HCV和肝細胞膜靶抗原存在相同抗原決定簇有關(guān)[11]。但這一結(jié)果與自身免疫性肝病患者相比要低得多[12]。可見，自身抗體主要發(fā)生于自身免疫性肝病中，而在少數(shù)病毒性肝炎患者，尤其是乙型肝炎和丙型肝炎患者中也可能會發(fā)生自身免疫反應，或合并自身免疫性肝病，故臨床應引起重視。此外，本研究中自身抗體陽性檢出率與以往報道[2，5]相比存在差異，其原因可能與自身抗體檢測方法及試劑差異有關(guān)，也可能與檢測群體的差異有關(guān)。

目前，有關(guān)慢性病毒性肝炎誘發(fā)自身免疫尚需做進一步研究，如病毒性肝炎伴自身免疫現(xiàn)象還是自身免疫性肝炎，對于這部分患者的診斷鑒別仍十分棘手。對于病毒性肝炎伴有自身免疫現(xiàn)象者，一般認為其并不直接對免疫系統(tǒng)功能產(chǎn)生影響，但高滴度自身抗體則與自身免疫疾病關(guān)系密切。對存在自身免疫現(xiàn)象的病毒性肝炎患者來說，在進行干擾素抗病毒治療之前一定要先排除自身免疫性肝炎，因干擾素多會加重或誘發(fā)自身免疫現(xiàn)象。而激素類治療自身免疫性肝炎時，對合并病毒性肝炎患者則會導致病毒復制增強。故在病毒性肝炎合并自身免疫性肝炎患者的治療過程中，治療方案的選擇應十分慎重[13]。

綜上所述，病毒性肝炎患者中確實存在自身免疫現(xiàn)象，又以ANA及AMA陽性最為多見。故對病毒性肝炎患者進行自身抗體檢測有助于了解患者機體免疫狀況，對于指導臨床合理用藥意義重大。

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(本文編輯:龔曉霖)

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10.3969/j.issn.1673-8640.2015.07.015

2014-12-31)

黃金保，男，1975年生，碩士，主管技師，主要從事臨床生化檢驗工作。