魏紅 付玉靜 翟建軍

1.首都醫(yī)科大學附屬北京同仁醫(yī)院兒科，北京100730；2.首都醫(yī)科大學附屬北京同仁醫(yī)院婦產(chǎn)科，北京100730

臍帶血檢測在變態(tài)反應(yīng)性疾病預(yù)防中的應(yīng)用

魏紅1付玉靜2翟建軍2

1.首都醫(yī)科大學附屬北京同仁醫(yī)院兒科，北京100730；2.首都醫(yī)科大學附屬北京同仁醫(yī)院婦產(chǎn)科，北京100730

目的探討臍帶血檢測在變應(yīng)性疾病預(yù)防中的作用。方法選擇2014年1～4月在首都醫(yī)科大學附屬北京同仁醫(yī)院分娩的新生兒300例為研究對象，出生后隨訪42 d，根據(jù)是否發(fā)生新生兒皮疹將105例發(fā)生新生兒皮疹的新生兒作為過敏組，195例未發(fā)生新生兒皮疹的作為未過敏組。收集臍帶血，檢測臍帶血中T淋巴細胞亞群及其相關(guān)細胞因子如白細胞介素-4（IL-4）、γ-干擾素（INF-γ）、白細胞介素-10（IL-10）、白細胞介素-12（IL-12）。分析變態(tài)反應(yīng)性疾病與臍帶血中T淋巴細胞亞群及其相關(guān)細胞因子的相關(guān)性。結(jié)果單因素分析結(jié)果顯示，新生兒出生42 d是否發(fā)生過敏反應(yīng)與母親是否有過敏史、新生兒性別、母親IgE、抑制T細胞（Ts）%、IL-4/CD4%、IFN/CD4%和Th1/Th2有關(guān)（P＜0.05或P＜0.01）；相關(guān)性分析結(jié)果顯示，母親IgE、總T淋巴細胞、Ts%、IL-4/CD4%、IFN/CD4%、Th1/Th2、喂養(yǎng)方式與生后42 d出現(xiàn)過敏具有相關(guān)性（P＜0.05或P＜0.01）。多因素回歸分析結(jié)果顯示，母親有過敏史是危險因素，IFN/CD4、母乳喂養(yǎng)是保護因素（P＜0.01）；IL-4/CD4、IFN/CD4之間ROC曲線下面積分別為0.589和0.433。結(jié)論發(fā)生變態(tài)反應(yīng)性疾病的新生兒臍帶血T淋巴細胞亞群及其相關(guān)細胞因子（IL-4、INF-γ、IL-10、IL-12）水平與未發(fā)生變態(tài)反應(yīng)性疾病的新生兒存在差異。IL-4/CD4的診斷準確性高于IFN/CD4。

臍帶血；變應(yīng)性疾??；預(yù)防

變態(tài)反應(yīng)性疾病是指機體再次接觸相同抗原時，發(fā)生以生理功能紊亂和/或組織細胞損傷為表現(xiàn)的特異性免疫應(yīng)答，其實質(zhì)為異?；蛘卟±硇缘拿庖邞?yīng)答[1]。新生兒變態(tài)反應(yīng)性疾病主要表現(xiàn)為新生兒皮疹。而目前研究顯示，嬰幼兒期濕疹與哮喘病的發(fā)生具有內(nèi)在的關(guān)系[2-3]。臍帶血相較于靜脈血，標本采集更方便，并且便于早期對疾病進行診斷與治療，因此目前對于臍帶血的研究成為預(yù)防、治療疾病的熱點。本研究通過采集首都醫(yī)科大學附屬北京同仁醫(yī)院（以下簡稱“我院”）300名新生兒的臍帶血，檢測T淋巴細胞亞群及其相關(guān)細胞因子，分析臍帶血檢測在變態(tài)反應(yīng)性疾病預(yù)防中的臨床意義，現(xiàn)將結(jié)果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年1～4月在我院分娩的新生兒300例為研究對象。其中男151例，女149例。所有納入研究的新生兒均為足月產(chǎn)，無先天性疾病。新生兒自出生后42 d隨訪，根據(jù)是否發(fā)生新生兒皮疹進行分組。其中105例發(fā)生新生兒皮疹（過敏組），195例未發(fā)生新生兒皮疹（未過敏組）。

1.2 研究方法

記錄所有新生兒母親過敏史、新生兒性別、分娩方式、母親年齡、妊娠周術(shù)、母親IgE、新生兒出生體重等資料。采集臍帶血，檢測臍帶血T淋巴細胞亞群及其相關(guān)細胞因子如白細胞介素-4（IL-4）、γ-干擾素（INF-γ）、白細胞介素-10（IL-10）、白細胞介素-12（IL-12）水平，分析以上因素與新生兒變態(tài)反應(yīng)性疾病的相關(guān)性。計算陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、陽性似然比、陰性似然比。陽性預(yù)測值=a/（a+b）；陰性預(yù)測值=d/（c+d）；陽性似然比=[a/（a+c）]/[b/（b+d）]；陰性似然比= [c/（a+c）]/[d/（b+d）]，其中a為金標準及診斷試驗均為陽性的例數(shù)；b為金標準為陰性，診斷試驗為陽性例數(shù)；c為金標準為陽性，而診斷試驗為陰性例數(shù)；d為金標準和診斷試驗均為陰性例數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布計量資料采用均數(shù)用均數(shù)±標準差表示，兩組間比較采用t檢驗；不符合正態(tài)分布的改用中位數(shù)（M）及四分位數(shù)Q（P25，P75）表示；計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Spearman相關(guān)系數(shù)分析過敏反應(yīng)發(fā)生與各指標的相關(guān)性；影響因素分析采用非條件二分類Logistic回歸分析，并對影響因素進行ROC曲線分析；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 描述性分析

新生兒出生42 d是否發(fā)生過敏反應(yīng)與母親是否有過敏史、新生兒性別、母親IgE、Ts%、IL-4/CD4%、IFN/CD4%和Th1/Th2有關(guān)（P＜0.05或P＜0.01），與總T淋巴細胞、分娩方式、母親年齡、妊娠周數(shù)、輔助T細胞（Th）%、Th/抑制T細胞（Ts）、出生體重、IL-12/ CD4+%、CD4+/淋巴%和IL-10/CD4+%等因素無關(guān)。見表1。

表1 出生42 d發(fā)生變態(tài)反應(yīng)性疾病單因素分析結(jié)果[M（P25，P75）]

2.2 相關(guān)性分析

Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示母親IgE、總T淋巴細胞、Ts%、IL-4/CD4%、IFN/CD4%、Th1/Th2、喂養(yǎng)方式與生后42 d出現(xiàn)過敏具有相關(guān)性（P＜0.05或P＜0.01）。見表2。

表2 出生42 d是否發(fā)生過敏與各個指標的Spearman相關(guān)分析

2.3 Logistic回歸分析結(jié)果

以正常組為對照，異常組為病例組進行多因素Logistic回歸分析，將單因素有意義的變量放入模型中，母親有過敏史是危險因素，IFN/CD4、母乳喂養(yǎng)是保護因素（P＜0.01）。見表3。

表3 出生42 d發(fā)生變態(tài)反應(yīng)性疾病多因素Logistic回歸分析結(jié)果

2.4 ROC曲線分析

IL-4/CD4、IFN/CD4之間ROC的曲線下面積（AUC）、不同截點，靈敏性、特異性、陰性預(yù)測值、陽性預(yù)測值，ROC曲線分析結(jié)果顯示，IL-4/CD4 ROC的AUC為0.589，IFN/CD4 ROC的AUC為0.433。見表4。

表4 IL-4/CD4、IFN/CD4之間ROC曲線下面積、不同截點，靈敏性、特異性、陰性預(yù)測值、陽性預(yù)測值

3 討論

變態(tài)反應(yīng)是機體再次解除相同的抗原時所發(fā)生的反應(yīng)，這個反應(yīng)或者對機體有利，或者對機體組織會造成損傷。變態(tài)反應(yīng)性疾病主要表現(xiàn)為濕疹、過敏性鼻炎、特異性皮炎、過敏性哮喘等。新生兒主要表現(xiàn)為濕疹，而眾多研究顯示，嬰幼兒期濕疹與哮喘有內(nèi)在的關(guān)系。目前全球有2.5億人患者有變態(tài)反應(yīng)性疾病，我國也有大約1/3的人患有變態(tài)反應(yīng)性疾病。變態(tài)反應(yīng)性疾病病因復(fù)雜，治療效果較差，一直都是臨床的一大難題。變態(tài)反應(yīng)是獲得性免疫反應(yīng)的表現(xiàn)，與抗體和/或T細胞有關(guān)。Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)是指速發(fā)性超敏反應(yīng)，IgE抗體的產(chǎn)生是其主要的特征，最嚴重的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)是過敏性休克，呼吸道過敏表現(xiàn)為哮喘，皮膚過敏表現(xiàn)為蕁麻疹、異位性皮炎等[4-5]。本次研究中，單因素分析結(jié)果顯示，發(fā)生變態(tài)反應(yīng)嬰兒母親IgE抗體水平要高于無變態(tài)反應(yīng)性疾病的嬰兒。Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)患者以Th2細胞活化為主[6]。Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)有導(dǎo)致變態(tài)反應(yīng)的抗原，其具有高度特異性的特點，引發(fā)變態(tài)反應(yīng)的抗原與初次致敏的抗原相同，初次基礎(chǔ)抗原導(dǎo)致機體致敏，而變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生需經(jīng)過潛伏期才會發(fā)生，變態(tài)反應(yīng)的程度與機體的免疫狀態(tài)以及變應(yīng)原的量、質(zhì)和途徑有關(guān)，而機體的免疫應(yīng)答差異發(fā)揮主要作用。Ⅱ型變態(tài)反應(yīng)與結(jié)合在細胞或者組織上的IgG及IgM介導(dǎo)，Ⅱ型變態(tài)反應(yīng)僅發(fā)生于含有該抗原的細胞及組織。抗原誘發(fā)抗體，結(jié)合在細胞膜上的抗原通過固定激活補體、裂解靶細胞、免疫調(diào)理、免疫黏附作用促進吞噬細胞破壞靶細胞，IgG一段與靶細胞抗原結(jié)合，另一端與自然殺傷（NK）細胞結(jié)合，激活NK細胞發(fā)揮殺傷作用?？乖贵w復(fù)合物而知的變態(tài)反應(yīng)為Ⅲ型變態(tài)反應(yīng)，致敏抗體結(jié)合細胞外的抗原，沉積在局部或者全身血管壁的基底膜或組織間隙，激活血小板、補體等，誘發(fā)變態(tài)反應(yīng)。Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)又稱為遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，試劑細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，T淋巴細胞致敏后與相應(yīng)的抗原相互作用而引發(fā)。

免疫系統(tǒng)是機體的防衛(wèi)機制，能夠產(chǎn)生快速、特異性的反應(yīng)，通常是保護性反應(yīng)。T淋巴細胞以及B淋巴細胞目前是最主要的淋巴細胞，與巨噬細胞等構(gòu)成血液及淋巴細胞的再循環(huán)庫。T淋巴細胞具有重要的免疫功能，包括輔助功能，參與直接交叉反應(yīng)等。Th在免疫過程中發(fā)揮重要的作用，可激活其他免疫細胞，而這些免疫細胞能夠產(chǎn)生直接免疫反應(yīng)[7-8]。Th細胞表面標準主要是CD4。Ts主要對機體的免疫反應(yīng)發(fā)揮調(diào)節(jié)的作用，對自身耐受的維持以及避免免疫反應(yīng)造成過度損傷具有重要的作用[9-10]。

臨床上的變態(tài)反應(yīng)性疾病大多為Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，與IgE高水平相關(guān)，由Th2細胞引發(fā)，導(dǎo)致一系列免疫反應(yīng)，免疫反應(yīng)的強度與過敏原刺激的量和途徑有關(guān)，與單次短暫刺激或者是持續(xù)刺激有關(guān)。另外組織反應(yīng)強度也受遺傳及非遺傳因素影響。IgE相關(guān)的變態(tài)反應(yīng)有3個時相，接觸過敏原后數(shù)秒內(nèi)或數(shù)分鐘內(nèi)發(fā)生急性反應(yīng)時相，過敏原解除后數(shù)小時內(nèi)產(chǎn)生晚期反應(yīng)時相，其大多是在急性反應(yīng)相消失后出現(xiàn)，持續(xù)時間數(shù)天或數(shù)年。Th細胞包括Th1和Th2兩個亞群。Th1產(chǎn)生IL-2、IL-3、IFN-γ、淋巴毒素、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）[11]。Th2分泌IL-3、TNF-α、GM-CSF、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13。IL-4具有促進B細胞合成分泌IgE的作用[12]。少量的IFN-γ就能陰斷IL-4促進IgE合成的作用。Th2產(chǎn)生的IL-4能夠調(diào)節(jié)IgE的合成，Th1產(chǎn)生的IFN-γ具有負調(diào)節(jié)作用[13]。Th2分泌的IL-4及IL-5還能夠輔助IgA的合成，分泌的IL-10對Th1合成細胞因子具有抑制作用，Th1能夠抑制IgG1的合成，但是能夠輔助其它類型抗體的合成。IL-3、IL-4對肥大細胞的增殖有促使作用，并且具有協(xié)同作用，IL-5對B細胞合成IgA具有輔助作用，能刺激嗜酸性粒細胞集落形成，與速發(fā)型超敏反應(yīng)具有密切的關(guān)系。Th1產(chǎn)生IFN-γ能夠阻斷IgE的合成，抑制速發(fā)型超敏反應(yīng)。Th1分泌IL-2、IFN-γ促進巨噬細胞的活化以及CTL的分化，與遲發(fā)型超敏反應(yīng)有關(guān)。在本次研究中，單因素分析結(jié)果顯示發(fā)生變態(tài)反應(yīng)性疾病的嬰兒Th1/Th2下降。

T細胞活化后分泌IL-4對T細胞、B細胞、肥大細胞、巨噬細胞和造細胞均具有調(diào)節(jié)作用[14-15]。IL-4能夠增強B細胞的抗原提呈能力。增加FcεRⅡ/CD23的表達，釋放可溶性CD23/IgE結(jié)合因子，結(jié)合病誘導(dǎo)mIgE陽性細胞。IL-4能夠刺激小鼠B細胞IgG1及IgE產(chǎn)生水平分別升高8～10倍及10～100倍，降低IgG3分泌水平6～10倍。IL-4升高IgG1及IgE水平的機制[16-17]：①促使能夠產(chǎn)生IgG1或者IgE的B細胞增殖及分化；②增加特異重鏈穩(wěn)定區(qū)Ig的轉(zhuǎn)換，促使IgG1合成及分泌。IFN-γ抑制IL-4以上功能。同時IL-4有抑制IFN-γmRNA的轉(zhuǎn)錄，抑制IFN-γ對IgG2a產(chǎn)生的誘導(dǎo)作用。IL-4對休止期B細胞的活化具有促進作用。IL-4對Th2的增殖有維持作用，IL-2對T細胞的增殖有維持作用，IL-4生長信號的傳遞與IL-2存在差異。高劑量IL-4能夠誘導(dǎo)CD4-CD8+、CD4+CD8-、CD4-CD8-細胞增殖。IL-4對PHA刺激T細胞釋放GM-CSF、G-CSF的作用具有增強作用。IL-4能夠正調(diào)節(jié)CTL和LAK細胞的分化，負調(diào)節(jié)人殺傷細胞。IL-4對IL-2誘導(dǎo)NK白血病細胞LAK活性具有抑制作用。IL-4對肥大細胞的增殖具有刺激作用，還與IL-3具有協(xié)同作用。IL-12是一種異源二聚體，主要由樹突狀細胞、巨噬細胞、B淋巴細胞等產(chǎn)生，對Th1的增殖具有刺激作用，誘導(dǎo)T細胞及自然殺傷細胞產(chǎn)生INF-γ。IL-12可誘導(dǎo)早期輔助性T母細胞分化為Th1細胞。在本次研究中，臍帶血IL-12/CD4+%以及IL-10/CD4+%水平與新生兒出生后42 d內(nèi)發(fā)生變態(tài)反應(yīng)性疾病沒有明顯的相關(guān)性。

遺傳是變態(tài)反應(yīng)性疾病的基礎(chǔ)。研究顯示父母雙方患有過敏性疾病者，子女患變態(tài)反應(yīng)性疾病的概率70%，一方患有過敏性疾病者，子女患變態(tài)反應(yīng)性疾病的概率為50%。本次研究中，發(fā)生變態(tài)反應(yīng)性疾病的嬰兒中，有60%的嬰兒母親有過敏史。性別對變態(tài)反應(yīng)性疾病的影響目前的報道并不統(tǒng)一。韓國的一項研究顯示，變應(yīng)性鼻炎患者男性和女性發(fā)病率沒有顯著差異[19]。然而也有研究顯示男性變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病率稍高于女性[20]。在本次研究中，女性發(fā)生濕疹的比例高于男性。本研究對可能的因素進行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，母親IgE、總T淋巴細胞、Ts%、IL-4/CD4%、IFN/CD4%、Th1/Th2、喂養(yǎng)方式與生后42 d出現(xiàn)過敏具有相關(guān)性（P＜0.05或P＜0.01）。多因素回歸分析顯示母親有過敏史是變態(tài)反應(yīng)性疾病的危險因素，而IFN/CD4%、母乳喂養(yǎng)是保護因素（P＜0.01）。

ROC曲線及ROC曲線下面積是對一種診斷方法準確性評價方法，通過對同一疾病的多種診斷試驗分析比較，這些指標可幫助臨床醫(yī)生篩選出最佳診斷方案。本次研究對IL-4/CD4、IFN/CD4進行ROC曲線分析，結(jié)果顯示IFN/CD4%AUC為0.433，IL-4/CD4 AUC為0.589。IL-4/CD4的靈敏度相對較高。

綜上所述，發(fā)生變態(tài)反應(yīng)性疾病的新生兒臍帶血T淋巴細胞亞群及其相關(guān)細胞因子（IL-4、INF-γ、IL-10、IL-12）水平與未發(fā)生變態(tài)反應(yīng)性疾病的新生兒存在差異。IL-4/CD4的診斷準確性高于IFN/CD4。

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Application of cord blood detection in the prevention of allergic diseases

WEI Hong1FU Yujing2ZHAI Jianjun2
1.Department of Pediatrics,Beijing Tongren Hospital,Capital Medical University,Beijing 100730,China;2.Department of Obstetrics and Gynecology,Beijing Tongren Hospital,Capital Medical University,Beijing 100730,China

ObjectiveTo investigate the application of cord blood detection in the prevention of allergic diseases.MethodsCord blood of 300 neonatal from January to April 2014 in Beijing Tongren Hospital,Capital Medical University was collected,after 42 days of follow-born baby were divided into two groups according to whether with skin rash, 105 newborns with skin rash were as allergic group,195 newborns without skin rash were as non-allergic group.T lymphocyte subsets and related cytokines such as IL-4,INF-γ,IL-10,IL-12 were detected.Correlation between allergic diseases with T lymphocyte subsets and related cytokines was analyzed.ResultsUnivariate analysis showed that mother allergies,neonatal sex,mother IgE,Ts%、IL-4/CD4%,IFN/CD4%and Th1/Th2 associated with allergic diseases(P＜0.05 orP＜0.01);Spearmananalysis showed mother IgE,total T lymphocytes,Ts%,IL-4/CD4%,IFN/CD4%,Th1/Th2, feeding associated with allergic diseases(P＜0.05 orP＜0.01).Multivariate regression analysis showed mother allergies was risk factor,and IFN/CD4,breastfeeding were protective factors(P＜0.01).AUCof IL-4/CD4 was 0.589 and IFN/ CD4 was 0.433.ConclusionCord blood T lymphocyte subsets and related cytokines(IL-4,INF-γ,IL-10,IL-12)of newborn with allergic diseases are different with newborn without allergic diseases.Diagnostic accuracy of IL-4/CD4 is higher than IFN/CD4.

Cord blood;Allergic diseases;Prevention

R725.6

A

1673-7210（2015）07（b）-0065-05

2015-03-14本文編輯：任念）

首都醫(yī)科大學基礎(chǔ)臨床科研合作立項課題（13JL78）。

▲通訊作者