代永霞，馬記平，高青

鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南鄭州450064

復(fù)方中藥對免疫抑制小鼠的免疫功能的影響研究

代永霞，馬記平，高青

鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，河南鄭州450064

目的 是探索復(fù)方中藥（黃芪、當(dāng)歸和炙甘草）對免疫功能的影響與作用。方法選擇小鼠50只，隨機(jī)分為5組。按照復(fù)方中藥的給藥劑量依次分為高劑量組、中劑量組、低劑量組、對照組、模型對照組。然后環(huán)磷酰胺抑制小鼠免疫功能制作免疫抑制模型，對實(shí)驗(yàn)及對照組小鼠給藥，觀察各組小鼠用藥后的小鼠IgG、T淋巴細(xì)胞亞群CD4+和CD8+的測定、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的指數(shù)。結(jié)果對照組和中藥組相比小鼠IgG、T淋巴細(xì)胞亞群CD4+和CD8+、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的指數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論實(shí)驗(yàn)未能證實(shí)復(fù)方中藥可以促進(jìn)特異性細(xì)胞和體液免疫功能，但在復(fù)方中藥的劑量范圍使用下對非特異性和體液免疫具有顯著促進(jìn)作用。

小鼠；免疫促進(jìn)；復(fù)方中藥

近幾年來免疫學(xué)在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中發(fā)展較為迅速，然而能夠有效地提高免疫功能的藥物卻較少，在處方研究中利用扶正祛邪的治療理念在臨床治療中取得了較理想的效果。該實(shí)驗(yàn)從細(xì)胞分子學(xué)水平出發(fā)，研究復(fù)方中藥在免疫功能上表現(xiàn)出的影響效果，從而為免疫學(xué)的中藥遴選奠定一定的理論與實(shí)踐支持。

根據(jù)中醫(yī)中的理論與藥理研究可知：西洋參的主要活性成分為皂苷類、多糖類、氨基酸等，這些成分對補(bǔ)體、巨噬細(xì)胞、T、B淋巴細(xì)胞具有激活的影響作用。補(bǔ)體C3是補(bǔ)體激活的三個(gè)級聯(lián)的關(guān)鍵組成部分，故將其作為觀察實(shí)驗(yàn)補(bǔ)體系統(tǒng)水平的指標(biāo)。該研究的起止時(shí)間為2014年6月25日—9月30日。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 復(fù)方中藥制備該實(shí)驗(yàn)的復(fù)方中藥主要由西洋參、黃芪、枸杞、當(dāng)歸等中藥成分組成。按照復(fù)方中藥的制定比例，并將原藥液濃縮成400 mL，滅菌后保存在4℃冰箱內(nèi)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物6 wk齡昆明系小白鼠50只，雌雄各半，體重（18±22）g。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器免疫抑制劑環(huán)磷酰胺用生理鹽水將注射用環(huán)磷酰胺（0.2 g）配成濃度為3 g/mL；AL204型電子天平；臺式離心機(jī)；搖擺式高速粉碎機(jī)HK-04B/06B；光學(xué)顯微鏡；分選式流式細(xì)胞儀-Aira；電熱恒溫培養(yǎng)箱。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

將50只小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半。在環(huán)磷酰胺造模后第2天分別進(jìn)行小鼠復(fù)方中藥應(yīng)用試驗(yàn)，小鼠的灌量均為0.04 mL/g，其中高、中、低、對照組、模型對照組的復(fù)方中藥給藥劑量分別為0.04 mL/g、配置參半的0.02 mL/g蒸餾水和0.02 mL/g中藥、0.01 mL/g中藥和0.03 mL/g的蒸餾水、蒸餾水0.04 mL/g、蒸餾水0.04 mL/g，對小鼠喂服14 d。

試驗(yàn)的15 d，于小鼠眼球處取血，經(jīng)過離心將血清與紅細(xì)胞分離，分離后的血清嚴(yán)格按照檢測方法測量小鼠血清IgG和補(bǔ)體C3水平。在無污染條件下，取小鼠脾臟進(jìn)行研磨，經(jīng)篩網(wǎng)過濾后放入ACK瓶皿中，經(jīng)細(xì)胞液裂解后過濾于離心管中離心。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

對實(shí)驗(yàn)小組進(jìn)行數(shù)據(jù)搜集與統(tǒng)計(jì)見表1所示：模型對照組的IgG含量明顯高于正常對照組(P=0.002＜0.01),而C3呈明顯降低(正態(tài)分布方差不齊t檢驗(yàn)，P=0.011＜0.05)，與低劑量中藥組相比而言差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001＜0.01)，這也說明了低劑量中藥組可以有效地抑制小鼠抗體IgG的濃度，且顯著地增加免疫抑制小鼠補(bǔ)體C3濃度。

表1 抗體、補(bǔ)體及B淋巴細(xì)胞表面抗原CD19結(jié)果比較

表1 抗體、補(bǔ)體及B淋巴細(xì)胞表面抗原CD19結(jié)果比較

注:與模型對照組比較，*P＜0.05,#P＜0.01。

組別IgG(g/L)C3(g/L)CD19(%)正常對照組(n=10)模型對照組(n=10)高劑量中藥組(n=10)中劑量中藥組(n=10)低劑量中藥組(n=10)（125.79±42.02）#184.98±31.02 170.14±35.99 160.20±30.12（176.79±44.86）#（363.0±166.2）*192.0±56.67 186.9±50.4 235.98±62.05（293.78±60.98）#（41.21±10.0）*29.82±6.84 33.21±8.23 32.32±12.91 30.25±12.04

表2 T淋巴細(xì)胞表面抗原結(jié)果比較

表2 T淋巴細(xì)胞表面抗原結(jié)果比較

注:與模型對照組比較，*P＜0.05。

組別CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)CD4+/CD8+正常對照組(n=10)模型對照組(n=10)高劑量中藥組(n=10)中劑量中藥組(n=10)低劑量中藥組(n=10) (38.16±8.02)*26.97±8.35 34.08±6.01 32.30±11.05 26.88±7.96 (34.21±10.13)*22.05±7.91 16.96±7.0 21.70±12.29 21.29±8.24 (32.50±4.38)*19.74±7.36 26.06±10.97 21.35±7.41 16.01±6.32 1.02±0.30 1.18±0.39 1.12±1.22 1.61±2.05 1.59±0.86

由表2所示CD3+,CD4+,CDB+,模型組的含量低于正常對照，(P＜0.05),CD3+,CD4+,CDB+,CD4+/CD8+模型對照組與高、中、低3組劑量組相比也較低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，這說明了實(shí)驗(yàn)中復(fù)方中藥對特異性T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞免疫無促進(jìn)作用。由實(shí)驗(yàn)后的補(bǔ)體C3、CD3+,CD4+,CDB+,CD4+/CD8+含量均有所降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這也正表明了實(shí)驗(yàn)建立了成功的免疫抑制動(dòng)物模型。

3 討論

該實(shí)驗(yàn)觀察復(fù)方中藥各劑量組與模型組的對比過程中發(fā)現(xiàn)C3、CD3+,CD4+,CDB+,CD4+/CD8+均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），因此未能證實(shí)其對特異性細(xì)胞免疫具有促進(jìn)作用。機(jī)體的免疫功能主要與T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、補(bǔ)體（C3、CD3+等）、免疫細(xì)胞因子等相關(guān)。由表1所知低劑量中藥組明顯高于對照組中補(bǔ)體C3的量(P=0.001＜0.01)，這就表明低劑量中藥組顯著地提升了C3的濃度，有效地促進(jìn)免疫抑制小鼠補(bǔ)體系統(tǒng)的功能。另外，組別之間的IgG濃度由高到低依次與對照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001），這也充分說明了低劑量中藥可以有效地降低免疫抑制小鼠的IgG濃度,結(jié)果表明：復(fù)方中藥可以增加正常小鼠和免疫抑制小鼠IgM的含量和吞噬細(xì)胞的吞噬功能，且存在顯著性差異，對免疫抑制組小鼠的增強(qiáng)作用更強(qiáng)。這與劉廷[1]的研究結(jié)果相似，說明復(fù)方中藥可以提升吞噬細(xì)胞能力，可以有效地提高非特異性細(xì)胞免疫力。

綜上所述，復(fù)方中藥(由西洋參、黃茂、構(gòu)祀、當(dāng)歸等多味藥組成)在一定劑量范圍內(nèi)，雖然還未能證實(shí)對機(jī)體特異性細(xì)胞免疫和體液免疫有促進(jìn)作用，但對非特異性細(xì)胞免疫及體液免疫有顯著促進(jìn)作用。從而為進(jìn)一步開展復(fù)方中藥其保健作用及合理開發(fā)利用提供理論依據(jù)。有關(guān)復(fù)方中藥促進(jìn)非特異性細(xì)胞免疫和體液免疫的作用機(jī)理,有待于進(jìn)一步研究。

[1]劉廷，鞠玉林，等.中藥復(fù)方連黃對小鼠T淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+的影響[J].四川動(dòng)物，2009，28（1）：115-117.

[2]郭曦，王繼宏，肖雪珍，等.4種中藥多糖對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響[J].中國獸醫(yī)雜志，2011,47(8):56-59.

[3]劉仰斌，李啟華.小鼠胸腺形態(tài)結(jié)構(gòu)的增齡性變化[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2010，14（31）：5805-5808.

[4]于永超，張佳麗，林兵，等.西洋參多糖對鉆-60輻照小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2012,39(11):2685-2687.

[5]韓潔，岳文鵬，何光志，等.八種中藥多糖對小鼠巨噬細(xì)胞釋放細(xì)胞因子的影響[J].現(xiàn)代免疫學(xué)，2011,31(6)：495-498.

[6]劉英姿，羅有梁，周鐵忠.原花青素A-1調(diào)節(jié)ConA刺激小鼠脾細(xì)胞分泌Th1/Th2細(xì)胞因子的影響[J].免疫學(xué)雜志，2012,28(11):942-945.

[7]Schwab J,Hammerschmidl C,Richter D,et al.Borreliavalaisiana Resist Complement-Mediated Killing Independenlly of Lhe Recruitment of Immune Regulators and Inactivation of Complement Components[J]. PLoS One，2013,8(1)：e53659.

[8]耿衛(wèi)樸，徐曼，羅補(bǔ)，等.靈芝多糖和當(dāng)歸多糖促進(jìn)人外周血T淋巴細(xì)胞增殖和分泌IFN-y[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2012,28(5):655-658.

Effect on Immune Function of Mice Immune Suppression of Compound Prescription of Traditional Chinese Medicine

DAI Yong-xia，MA Ji-ping，GAO Qing
Zhengzhou Shuqing Medical College，Zhengzhou，Henan Province,450064 China

The purpose of this study is explore the compound Chinese traditional medicine(Huang Qi,angelica and licorice)influence and effect on immune function of the compound traditional Chinese medicine.Methods:50 mice,were randomly divided into 5 groups.According to the compound traditional Chinese medicine dosage is divided into high dose group,middle dose group, low dose group,control group,model control group.Then cyclophosphamide immunosuppressed mice produce immunosuppression model,the experimental and the control group mice,the mice were observed after administration of mouse IgG,T lymphocyte subsets CD4+and CD8+determination,celiac macrophage phagocytic ability index.The statistical results from the data analysis:the control group and Chinese medicine group than in the phagocytosis of mouse IgG,T lymphocyte subsets,CD4+and CD8+in peritoneal macrophages index has significant difference(P＜0.01).Conclusion:the experiment failed to confirm that the compound Chinese medicine can promote specific cellular and humoral immune function of specific,but has significant promoting effect on nonspecific and humoral immunity in the dose range of compound Chinese medicine use.

Mice；Immune promoting；Compound traditional Chinese Medicine

R28

A

1674-0742（2015）05（a）－0164-02

2015-02-10）

代永霞（1982.1-），女，河南新鄭人，中藥學(xué)碩士，研究生，講師，現(xiàn)從事基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的教學(xué)和科學(xué)研究工作。