郭玲，李維英，劉海燕

濰坊市婦幼保健院婦產(chǎn)科，山東濰坊 261011

C-erbB-2和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及意義

郭玲，李維英，劉海燕

濰坊市婦幼保健院婦產(chǎn)科，山東濰坊 261011

目的研究子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma，EC)組織中癌基因C-erbB-2、Ki-67的表達(dá)，探討兩者與臨床病理特征之間的關(guān)系。方法用免疫組化法分別檢測C-erbB-2、Ki-67在63例子宮內(nèi)膜癌組織和20例子宮內(nèi)膜不典型增生組中的表達(dá)。結(jié)果C-erbB-2、Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性率分別為82.5%、76.2%,明顯高于子宮內(nèi)膜不典型增生組的20.0%、15.0%（P<0.05）。 C-erbB-2、Ki-67的表達(dá)和手術(shù)病理分期、組織學(xué)分級及浸潤肌層深度有關(guān)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Ki-67的陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，C-erbB-2的陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論在子宮內(nèi)膜癌中C-erbB-2、Ki-67過度表達(dá)，與子宮內(nèi)膜癌的侵襲性有關(guān)，可作為臨床醫(yī)師評估子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的重要指標(biāo)。

子宮內(nèi)膜癌；原癌基因C-erbB-2；細(xì)胞核增殖抗原Ki-67;免疫組化

子宮內(nèi)膜癌在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率僅次于宮頸癌。子宮內(nèi)膜癌在美國新發(fā)婦科惡性腫瘤中約占50%，位居女性惡性腫瘤第四，并且近幾年發(fā)病率越來越高，發(fā)病人群也越來越年輕[1]。子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和人體內(nèi)雌激素水平以及體內(nèi)各種癌基因的表達(dá)異常密切相關(guān)。該研究收集濰坊市婦幼保健院、濰坊市人民醫(yī)院2011年7月—2013年10月收入院的63例EC患者的石蠟標(biāo)本對C-erbB-2、Ki-67在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)進(jìn)行分析，研究兩者引起子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的原理，為臨床醫(yī)師正確分期和制定治療方案提供幫助。

1 資料與方法

1．1一般資料

收集濰坊市婦幼保健院、濰坊市人民醫(yī)院2011年7月—2013年10月收入院的63例EC患者的石蠟標(biāo)本，年齡43～68.5歲，平均(56.6±1.08)歲；術(shù)前均未行放、化療以及激素治療，所有診斷均經(jīng)手術(shù)后病理組織學(xué)確定。參照國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(Federation International of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO)2009年手術(shù)病理分期標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行臨床分期：0-I期25例，Ⅱ至Ⅳ期38例；其中高分化(G1)30例，中分化(G2)、低分化(G3)共33例。選取同期門診行官腔鏡檢查，經(jīng)病理檢查為子宮內(nèi)膜不典型增生的病例共20例作對照組，年齡為46～58歲，平均年齡(50.4±1.35)歲。比較所有患者的年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 方法

取標(biāo)本固定于10%福爾馬林液溶液中，采用石蠟包裹，持續(xù)切片5μm，并通過免疫組化S-P法即鏈霉菌抗生物素蛋白一過氧化物酶連接法,分別檢測存在于子宮內(nèi)膜癌組織及子宮內(nèi)膜不典型增生組織中的C-erbB-2和Ki-67的表達(dá)。從上海博谷公司購進(jìn)免疫組化試劑，操作時嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，用PBS代替一抗作為陰性對照。

免疫組化結(jié)果的觀察及判斷：應(yīng)用顯微鏡觀察全部染色切片，其中黃色或棕黃色染色提示陽性。Ki-67基因的蛋白產(chǎn)物位于細(xì)胞核，C-erbB-2基因的蛋白產(chǎn)物位于細(xì)胞膜及胞漿內(nèi)。采用400倍顯微鏡觀察切片，隨機(jī)選取每張切片中的10個切片（一個視野計數(shù)細(xì)胞100個）進(jìn)行觀察，然后將陽性細(xì)胞的百分比(%)計算出來求平均值。依據(jù)染色范圍分4級：其中陽性細(xì)胞低于10%為陰性(-)；陽性細(xì)胞數(shù)位于10%~49%之間為弱陽性(+)；陽性細(xì)胞數(shù)位于50%～89%之間為陽性(++)；陽性細(xì)胞數(shù)不低于90%為強(qiáng)陽性(+++)。結(jié)果：(+～+++)列為陽性表達(dá)，(-)表示無表達(dá)，列為陰性表達(dá)。

1．3 統(tǒng)計方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料運(yùn)用χ2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 C-erbB-2、Ki-67表達(dá)的免疫組化結(jié)果

C-erbB-2蛋白在細(xì)胞膜上表達(dá)。63例子宮內(nèi)膜癌組織和20例子宮內(nèi)膜不典型增生組織，C-erbB-2的陽性率和陰性率分別是82.5%和20.0%，因此C-erbB-2在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)陽性率顯著比對照組高差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Ki-67蛋白表達(dá)于細(xì)胞核上。Ki-67的陽性率、陰性率在63例子宮內(nèi)膜癌組織及20例子宮內(nèi)膜不典型增生組織中分別是76.2%、15.0%差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)陽性率顯著高于對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表1 1 Ki-67及C-erbB-2在子宮內(nèi)膜癌和子宮內(nèi)膜不典型增生組織中的表達(dá)[n(%)]

2．2 C-erbB-2、Ki-67的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理因素相關(guān)性

EC手術(shù)病理分期與C-erbB-2的表達(dá)相關(guān)性顯著差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），和腫瘤細(xì)胞組織學(xué)分級、浸潤肌層深度關(guān)系密切差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，C-erbB-2陽性表達(dá)率會根據(jù)細(xì)胞分化程度的降低、肌層浸潤的加深，不斷上升，和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是否發(fā)生無關(guān)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。Ki-67的表達(dá)與EC手術(shù)病理分期、肌層浸潤程度、組織學(xué)病理分級和是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是常見的惡性腫瘤，且發(fā)病年齡也越來越低，對女性的健康產(chǎn)生嚴(yán)重的影響。當(dāng)前研究顯示，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生與雌激素長期刺激并缺乏孕激素的拮抗有關(guān)，該研究探討C-erbB-2、Ki-67在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)，探討兩者與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的機(jī)制。

Ki-67又稱細(xì)胞激活標(biāo)記，是細(xì)胞增殖的標(biāo)志物之一，定位于第10號染色體的長臂上。Ki-67是9768bp和8686多肽鏈連接組成的mRNA，是DNA結(jié)合蛋白的一種。Ki-67能夠識別除G0和G1早期外,其他各期的核抗體。BRUNO[2]等發(fā)現(xiàn),Ki-67蛋白的表達(dá)和細(xì)胞周期關(guān)系密切，僅在G1期的中后期，S、G2、M期表達(dá)。Ki-67在腸道黏膜的上皮細(xì)胞等增殖活性高的細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，而在非增生性組織中幾乎不表達(dá)，是公認(rèn)的的核增殖標(biāo)志物中的一種，用于評價腫瘤生物學(xué)行為[3]。Ki-67在乳腺癌、膀胱癌等惡性腫瘤中的表達(dá)較強(qiáng)烈，說明腫瘤細(xì)胞的增生活性嚴(yán)重影響著惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后[4]。Ki-67經(jīng)過自我調(diào)控，可降低自身轉(zhuǎn)錄，實(shí)現(xiàn)調(diào)控蛋白表達(dá)要求。再利用自身磷酸化引發(fā)核仁的崩解、形成，最終對細(xì)胞周期調(diào)控產(chǎn)生影響。該研究結(jié)果表明，Ki-67蛋白在細(xì)胞核上表達(dá)。在63例子宮內(nèi)膜癌組織及20例子宮內(nèi)膜不典型增生組織中，Ki-67的陽性率、陰性率表達(dá)分別是76.2%、15.0%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)陽性率顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，與子宮內(nèi)膜癌手術(shù)病理分期、肌層組織浸潤、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移相關(guān)，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),符合文獻(xiàn)報道[5]。

表2 C-erbB-2、Ki-67表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系[n（%）]

原癌基因C-erbB-2是表皮生長因子受體(epithelialgrowth factor receptor,EGFR)家族中的一員，能夠激活酪氨酸轉(zhuǎn)氨酶，并經(jīng)過激活信使系統(tǒng)推動細(xì)胞外部信號傳遞到細(xì)胞內(nèi)，對各種基因的轉(zhuǎn)錄C－erbB－2在機(jī)體細(xì)胞的增殖、生長、分化及凋亡過程產(chǎn)生十分重要的影響[5]。一般情況下C－erbB－2均為非激活狀態(tài)，在正常子宮內(nèi)膜表現(xiàn)低表達(dá)或不表達(dá)。若致癌因素作用，C－erbB－2呈現(xiàn)擴(kuò)增或過度表達(dá)則使正常細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，最終引起腫瘤的發(fā)生[6]。C-erbB-2蛋白在正常的子宮內(nèi)膜組織中無表達(dá)或者低表達(dá)，在子宮內(nèi)膜的不典型增生到子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)，呈逐漸增強(qiáng)。Xie[7]等的研究表明，在C-erbB-2癌基因轉(zhuǎn)染的NIH／3T3細(xì)胞核內(nèi)，酪氨酸磷酸化的作用較核外明顯增強(qiáng)，并且直接參與基因調(diào)控，使細(xì)胞出現(xiàn)過度增殖和惡性化。該文顯示，在63例子宮內(nèi)膜癌組織和20例子宮內(nèi)膜不典型增生組織，C-erbB-2的陽性率、陰性率分別為82.5%、20.0%，C-erbB-2在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)陽性率顯著高于對照組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，C-erbB-2的表達(dá)率與子宮內(nèi)膜癌的手術(shù)病理分期密切相關(guān)，Ⅱ-Ⅳ期表達(dá)明顯高于0-I期，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，與腫瘤細(xì)胞分化程度有關(guān)系，腫瘤細(xì)胞分化越差，C-erbB-2陽性表達(dá)率越高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，隨著C-erbB-2基因表達(dá)增高，子宮內(nèi)膜癌的侵襲性增強(qiáng)，提示患者預(yù)后越差，符合文獻(xiàn)報道[8]對治療的抵抗性越強(qiáng)。

C-erbB-2和Ki-67的異常表達(dá)參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展過程，聯(lián)合檢測兩者的表達(dá)，不僅有助于鑒別子宮內(nèi)膜良、惡性病變，也為指導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌的臨床治療，預(yù)后判斷提供幫助，為子宮內(nèi)膜癌防治探索新思路。

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Expression and Clinical Significance of C-erbB-2 and Ki-67 in Endometrial Carcinoma

GUO Ling,LIWei-ying,LIU Hai-yan
Department of Gynaecology and Obstetrics,Maternal and Child Health Hospital ofWeifang,Weifang,Shandong Province,261000 China

ObjectiveTo investigate the expression of C-erbB-2 and Ki-67 in endometrial carcinomAand discuss the relationship of C-erbB-2 and Ki-67 with the clinicopathological features of endometrial carcinoma.MethodsTo detect the expressions of C-erbB-2 and Ki-67 in 63 cases of endometrial carcinomAand 20 cases of endometrial atypical hyperaplasiAtissue by immunohistochemistry.Resu ltsThe positive expression rates of C-erbB-2 and Ki-67 in endometrial carcinomAtissue were 82.5%,76.2% which were significantly higher than that in endometrial atypical hyperaplasiAtissue 20.0%，15.0% (P<0.05)．The expression of C-erbB-2 and Ki-67 were related with pathological staging,histological grade and myometrial invasion depth (P<0.05).The positive expression of Ki-67 was related with lymph nodemetastasis(P<0.05),while the positive expression of C-erbB-2 was irrelevant(P> 0.05).ConclusionThe over expression of C-erbB-2 and Ki-67 are associated with the tumor invasion，and may be an important prognostic factor of endometrial carcinoma.

Endometrial Carcinoma;Proto-oncogene C-erbB-2;Proliferating cell nuclear antigen Ki-67;Immunohistochemistry

R737.33

A

1674-0742（2015）06（b）－0009-02

2015-03-17）

郭玲（1966.1-），女，山東臨朐人，本科，主管護(hù)師，研究方向：專婦科護(hù)理。