錢文慧 陸崟 廖欣 汪玥 蘇華 王曙東

南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科，江蘇南京210002

高效液相色譜法測定金寶腎片中卡托普利的含量

錢文慧 陸崟 廖欣 汪玥 蘇華 王曙東

南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科，江蘇南京210002

目的建立測定金寶腎片中卡托普利含量的分析方法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為Lichrospher C18（4.6 mm×250 mm，5μm）柱，流動相為甲醇-四氫呋喃-0.1%磷酸溶液（30∶0.15∶70，pH=2.6～2.8），檢測波長為215 nm，柱溫為40℃；流速為1.0 mL/min；進(jìn)樣量為20μL。結(jié)果卡托普利濃度在18.964～94.820μg/mL（r=0.9998）范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為96.97%，RSD=0.60%（n=9）。結(jié)論本測定方法操作簡單、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

金寶腎片；卡托普利；高效液相色譜法；含量測定

金寶腎片為南京軍區(qū)南京總醫(yī)院（以下簡稱“我院”）與解放軍腎臟病研究所共同研制的院內(nèi)復(fù)方制劑，處方組成為卡托普利及大黃提取物，臨床被廣泛用于慢性腎功能衰竭癥的治療。慢性腎功能衰竭（chronic renalfailure，CRF）是各種因素導(dǎo)致的腎臟疾病進(jìn)展的最終結(jié)果，是一種進(jìn)行性的、不可逆的腎功能受損綜合征[1-3]。臨床腎組織損傷的形態(tài)和功能特征包括腎小球硬化、腎間質(zhì)纖維化以及腎小球高濾過、腎小管高代謝等，這些損傷與腎組織內(nèi)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS）活性密切相關(guān)[4-6]。因此臨床患者常伴隨有代謝產(chǎn)物潴留，水、電解質(zhì)及酸堿平衡失調(diào)，高血壓、心力衰竭等全身系統(tǒng)受累癥狀，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量[7]。卡托普利是經(jīng)典的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（angiotensin converting enzyme inhibitor，ACEI），多年的臨床實(shí)踐也證實(shí)其在降低血壓、改善心力衰竭以及調(diào)節(jié)腎臟功能等方面療效顯著[8-9]，而大黃提取物近年來被廣泛用于CRF的輔助治療[10-11]，因此金寶腎片臨床用于慢性腎功能衰竭癥的治療。它能夠有效改善慢性腎衰患者高血壓、心力衰竭等并發(fā)癥，減緩患者腎臟的代償損傷，在臨床頗受患者歡迎。由于近期該制劑制備工藝進(jìn)行了優(yōu)化，部分原料更換廠家，導(dǎo)致原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不夠理想。為進(jìn)一步保障金保腎片的用藥安全，本研究根據(jù)卡托普利的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和理化性質(zhì)重新建立了測定金寶腎片中卡托普利含量的方法，該方法準(zhǔn)確可行，為金寶腎片的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀，KQ-250DB數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司），F(xiàn)A1604S電子天平（上海天平儀器廠），AE240電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）。

1.2 試藥

卡托普利（中國藥品生物制品檢定研究所，批號：100318-200602，含量為99.5%），色譜醇甲醇（美國TEDIA）；金寶腎片（規(guī)格：0.25 g，我院制劑科自制，批號：140730、140818、140909），其余所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)

參考《中國藥典》2010年版中關(guān)于高效液相色譜法的相關(guān)要求進(jìn)行測定。色譜柱：Lichrospher C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），以甲醇-四氫呋喃-0.1%磷酸溶液（30∶0.15∶70，pH=2.6～2.8）為流動相，檢測波長為215 nm，柱溫：40℃；流速：1 mL/min；進(jìn)樣量為20μL，理論塔板數(shù)按卡托普利峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 檢測波長的選擇

精密量取適量對照品于量瓶中，用流動相定容，進(jìn)行全波長紫外掃描，紫外圖譜顯示卡托普利的最大吸收為末端吸收，因此筆者參考《中國藥典》2010年版[12]及相關(guān)文獻(xiàn)[13]，選取吸收值合適的215 nm為檢測波長。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取卡托普利對照品50 mg置于100 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成含量為0.4741 mg/mL的卡托普利對照品儲備液；精密量取對照品儲備液3 mL，置于25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備

取《中國藥典》2010年版“裝量差異”項(xiàng)下的本品適量，除去薄膜衣，用研缽研細(xì)，精密稱取0.25 g至平底燒瓶中，加流動相100 mL，稱定重量，以50℃的溫度回流2 h，放冷，用流動相補(bǔ)足減重，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.5 陰性溶液的制備

按照供試品溶液的制備方法，按處方比例和樣品制備工藝制備成不加卡托普利的陰性樣品溶液。

2.6 測定法

精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

2.7 專屬性

精密吸取對照品溶液、供試品溶液與陰性對照各20μL，按上述方法進(jìn)行測定，記錄色譜圖，由圖1可知，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的保留時(shí)間處，均有與對照品色譜相對應(yīng)的色譜峰出現(xiàn)，而陰性對照溶液在相應(yīng)保留時(shí)間處則無峰出現(xiàn)，表明其對樣品的測定無干擾。

圖1 金寶腎片高效液相色譜圖

2.8 線性關(guān)系考察

分別精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL的對照儲備液至25 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，按“2.6”項(xiàng)下方法進(jìn)行測定，橫坐標(biāo)（X）為對照品濃度，縱坐標(biāo)（Y）為峰面積，進(jìn)行線性方程回歸，得到回歸方程：Y=22 296X-7.13，r=0.9998（n=5），結(jié)果表明卡托普利的濃度在0.018 964～0.094 820 mg/mL之間，與峰面積的線性關(guān)系良好。

2.9 精密度試驗(yàn)

精密移取對照品溶液20μl，按照上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，卡托普利峰面積的RSD為0.83%，結(jié)果表明該方法的精密度良好。

2.10 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號（批號：140818）下的樣品，按“2.4”項(xiàng)下的樣品溶液的制備方法進(jìn)行測定，分別于常溫下的0、1、2、4、8 h后進(jìn)樣，記錄卡托普利的峰面積，計(jì)算其RSD為1.10%，表明該制劑的樣品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.11 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號（批號：140818）下的金保腎片樣品5份，按“2.4”項(xiàng)下的樣品溶液制備方法進(jìn)行測定，因其平均片重為0.2511 g，計(jì)算得卡托普利的含量為4.82 mg/片，其峰面積的RSD為0.51%，說明方法重復(fù)性良好。

2.12 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的金保腎片樣品0.0125 g（批號：140818），共9份，分別置于平底燒瓶中，按低、中、高3個濃度分別精密加入3、5、7 mL的對照儲備液，按“2.4”項(xiàng)下樣品制備方法即得。精密吸取上述供試液各20μL注入色譜儀，測定含量，計(jì)算其回收率。結(jié)果金寶腎片中卡托普利的平均回收率為96.97%，RSD為0.60%（n=9）。

表1 卡托普利回收率試驗(yàn)

2.13 樣品含量測定

取3批金寶腎片（批號：140730、140818、140909），分別按“2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測定3次，結(jié)果見表2。綜合3批樣品測定結(jié)果，確定本品含卡托普利應(yīng)為標(biāo)示量的85.0%～115.0%。

表2 卡托普利含量測定結(jié)果（n=3）

3 討論

金保腎片為復(fù)方制劑，其中藥材原料的變化會直接影響到主要成分的檢測?？ㄍ衅绽麨榻?jīng)典的血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制劑，其結(jié)構(gòu)為1-[（2S）-2-甲基-3-巰基氧代丙基]-L-脯氨酸，呈弱酸性，易氧化，且對光、對熱均不穩(wěn)定[14-15]。因此筆者根據(jù)卡托普利以上的理化性質(zhì)，重新建立了其含量測定的方法，以期為控制金寶腎片的質(zhì)量及提高制劑的臨床藥效提供良好的依據(jù)。

3.1 流動相的選擇

根據(jù)卡托普利呈弱酸性，筆者經(jīng)過摸索發(fā)現(xiàn)流動相pH在2.6～2.8之間，樣品比較穩(wěn)定。因此，在此基礎(chǔ)上，試用了不同類別的流動相，發(fā)現(xiàn)0.01 mol/L磷酸二氫鈉-甲醇-乙腈（70∶25∶5）樣品峰形過寬，且樣品峰與雜質(zhì)峰分離度欠佳；甲醇-0.1%磷酸（70∶30）樣品出峰時(shí)間，分離度均不好；最后采用甲醇-四氫呋喃-0.1%磷酸溶液（30∶0.15∶70），樣品峰形以及分離度均較好，故選其為卡托普利的流動相。

3.2 提取條件的選擇

金寶腎片中卡托普利的提取方法，筆者參閱相關(guān)文獻(xiàn)[16-18]，進(jìn)行了提取方法的比較。首先比較了回流提取法和超聲提取法，發(fā)現(xiàn)回流提取法的提取效率更高，并且比超聲提取法重復(fù)性更好?？赡苁怯捎诳ㄍ衅绽Y(jié)構(gòu)的特殊性，對熱不穩(wěn)定，因此回流的熱對流方式更加平穩(wěn)，更適于卡托普利的提取。進(jìn)一步對回流提取條件進(jìn)行優(yōu)化，比較了回流提取的溫度（40、50、60℃）和提取時(shí)間（1、2、3 h），發(fā)現(xiàn)卡托普利的回流溫度不能過高，50℃提取2 h提取效率最高。此外，由于卡托普利對光的不穩(wěn)定性，因此所有的提取和測定操作應(yīng)盡量避光進(jìn)行。

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Determination of Captopril in Jinbaoshen Tablets by HPLC

QIANWenhuiLUYinLIAOXinWANGYueSUHuaWANGShudong
Department of Preparation Division,Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command,Jiangsu Province,Nanjing 210002,China

ObjectiveTo establish a HPLC method for the determination of Captopril in Jinbaoshen Tablets.MethodsHPLC was performed on Lichrospher C18column(4.6 mm×250 mm,5μm)and the mobile phase was consisted ofmethanoltetrahydrofuran-0.1%phosphoric acid aqueous solution(30∶0.15∶70,pH=2.6-2.8).The flow rate was 1.0 mL/min,the wavelength of detection was 215 nm and the column temperature was 40℃.ResultsThe linear relationship was good for captopril within the range of 18.964-94.820μg/mL(r=0.9998)and the average recovery was 96.97%,RSD=0.60% (n=9).ConclusionThe HPLC method is simple and practical with good reproducibility,which is suitable for the analysis and quality control of captopril in Jinbaoshen Tablets.

Jinbaoshen Tablets;Captopril;HPLC;Content determination

R927.2

A

1673-7210（2015）04（c）-0125-04

2015-01-17本文編輯：衛(wèi)軻）

全軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項(xiàng)課題重點(diǎn)項(xiàng)目（編號13ZJZ13）。

王曙東（1965-），男，博士，主任藥師；研究方向：中藥制劑。