錢文慧 陸崟 廖欣 汪玥 蘇華 王曙東

南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科，江蘇南京210002

高效液相色譜法測定金寶腎片中卡托普利的含量

錢文慧 陸崟 廖欣 汪玥 蘇華 王曙東

南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科，江蘇南京210002

目的建立測定金寶腎片中卡托普利含量的分析方法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為Lichrospher C18（4.6 mm×250 mm，5μm）柱，流動相為甲醇-四氫呋喃-0.1%磷酸溶液（30∶0.15∶70，pH=2.6～2.8），檢測波長為215 nm，柱溫為40℃；流速為1.0 mL/min；進樣量為20μL。結果卡托普利濃度在18.964～94.820μg/mL（r=0.9998）范圍內與峰面積線性關系良好，平均加樣回收率為96.97%，RSD=0.60%（n=9）。結論本測定方法操作簡單、準確，重復性好，可用于該制劑的質量控制。

金寶腎片；卡托普利；高效液相色譜法；含量測定

金寶腎片為南京軍區(qū)南京總醫(yī)院（以下簡稱“我院”）與解放軍腎臟病研究所共同研制的院內復方制劑，處方組成為卡托普利及大黃提取物，臨床被廣泛用于慢性腎功能衰竭癥的治療。慢性腎功能衰竭（chronic renalfailure，CRF）是各種因素導致的腎臟疾病進展的最終結果，是一種進行性的、不可逆的腎功能受損綜合征[1-3]。臨床腎組織損傷的形態(tài)和功能特征包括腎小球硬化、腎間質纖維化以及腎小球高濾過、腎小管高代謝等，這些損傷與腎組織內腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS）活性密切相關[4-6]。因此臨床患者常伴隨有代謝產物潴留，水、電解質及酸堿平衡失調，高血壓、心力衰竭等全身系統(tǒng)受累癥狀，嚴重影響患者生活質量[7]。卡托普利是經(jīng)典的血管緊張素轉化酶抑制劑（angiotensin converting enzyme inhibitor，ACEI），多年的臨床實踐也證實其在降低血壓、改善心力衰竭以及調節(jié)腎臟功能等方面療效顯著[8-9]，而大黃提取物近年來被廣泛用于CRF的輔助治療[10-11]，因此金寶腎片臨床用于慢性腎功能衰竭癥的治療。它能夠有效改善慢性腎衰患者高血壓、心力衰竭等并發(fā)癥，減緩患者腎臟的代償損傷，在臨床頗受患者歡迎。由于近期該制劑制備工藝進行了優(yōu)化，部分原料更換廠家，導致原質量標準不夠理想。為進一步保障金保腎片的用藥安全，本研究根據(jù)卡托普利的結構特點和理化性質重新建立了測定金寶腎片中卡托普利含量的方法，該方法準確可行，為金寶腎片的質量控制提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀，KQ-250DB數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司），F(xiàn)A1604S電子天平（上海天平儀器廠），AE240電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）。

1.2 試藥

卡托普利（中國藥品生物制品檢定研究所，批號：100318-200602，含量為99.5%），色譜醇甲醇（美國TEDIA）；金寶腎片（規(guī)格：0.25 g，我院制劑科自制，批號：140730、140818、140909），其余所用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應性實驗

參考《中國藥典》2010年版中關于高效液相色譜法的相關要求進行測定。色譜柱：Lichrospher C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），以甲醇-四氫呋喃-0.1%磷酸溶液（30∶0.15∶70，pH=2.6～2.8）為流動相，檢測波長為215 nm，柱溫：40℃；流速：1 mL/min；進樣量為20μL，理論塔板數(shù)按卡托普利峰計算應不得低于2000。

2.2 檢測波長的選擇

精密量取適量對照品于量瓶中，用流動相定容，進行全波長紫外掃描，紫外圖譜顯示卡托普利的最大吸收為末端吸收，因此筆者參考《中國藥典》2010年版[12]及相關文獻[13]，選取吸收值合適的215 nm為檢測波長。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取卡托普利對照品50 mg置于100 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成含量為0.4741 mg/mL的卡托普利對照品儲備液；精密量取對照品儲備液3 mL，置于25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備

取《中國藥典》2010年版“裝量差異”項下的本品適量，除去薄膜衣，用研缽研細，精密稱取0.25 g至平底燒瓶中，加流動相100 mL，稱定重量，以50℃的溫度回流2 h，放冷，用流動相補足減重，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.5 陰性溶液的制備

按照供試品溶液的制備方法，按處方比例和樣品制備工藝制備成不加卡托普利的陰性樣品溶液。

2.6 測定法

精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算，即得。

2.7 專屬性

精密吸取對照品溶液、供試品溶液與陰性對照各20μL，按上述方法進行測定，記錄色譜圖，由圖1可知，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的保留時間處，均有與對照品色譜相對應的色譜峰出現(xiàn)，而陰性對照溶液在相應保留時間處則無峰出現(xiàn)，表明其對樣品的測定無干擾。

圖1 金寶腎片高效液相色譜圖

2.8 線性關系考察

分別精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL的對照儲備液至25 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，按“2.6”項下方法進行測定，橫坐標（X）為對照品濃度，縱坐標（Y）為峰面積，進行線性方程回歸，得到回歸方程：Y=22 296X-7.13，r=0.9998（n=5），結果表明卡托普利的濃度在0.018 964～0.094 820 mg/mL之間，與峰面積的線性關系良好。

2.9 精密度試驗

精密移取對照品溶液20μl，按照上述色譜條件連續(xù)進樣5次，卡托普利峰面積的RSD為0.83%，結果表明該方法的精密度良好。

2.10 穩(wěn)定性試驗

取同一批號（批號：140818）下的樣品，按“2.4”項下的樣品溶液的制備方法進行測定，分別于常溫下的0、1、2、4、8 h后進樣，記錄卡托普利的峰面積，計算其RSD為1.10%，表明該制劑的樣品溶液在8 h內穩(wěn)定性良好。

2.11 重復性試驗

取同一批號（批號：140818）下的金保腎片樣品5份，按“2.4”項下的樣品溶液制備方法進行測定，因其平均片重為0.2511 g，計算得卡托普利的含量為4.82 mg/片，其峰面積的RSD為0.51%，說明方法重復性良好。

2.12 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的金保腎片樣品0.0125 g（批號：140818），共9份，分別置于平底燒瓶中，按低、中、高3個濃度分別精密加入3、5、7 mL的對照儲備液，按“2.4”項下樣品制備方法即得。精密吸取上述供試液各20μL注入色譜儀，測定含量，計算其回收率。結果金寶腎片中卡托普利的平均回收率為96.97%，RSD為0.60%（n=9）。

表1 卡托普利回收率試驗

2.13 樣品含量測定

取3批金寶腎片（批號：140730、140818、140909），分別按“2.4”項下方法制備供試品溶液，依法測定3次，結果見表2。綜合3批樣品測定結果，確定本品含卡托普利應為標示量的85.0%～115.0%。

表2 卡托普利含量測定結果（n=3）

3 討論

金保腎片為復方制劑，其中藥材原料的變化會直接影響到主要成分的檢測。卡托普利為經(jīng)典的血管緊張素轉移酶抑制劑，其結構為1-[（2S）-2-甲基-3-巰基氧代丙基]-L-脯氨酸，呈弱酸性，易氧化，且對光、對熱均不穩(wěn)定[14-15]。因此筆者根據(jù)卡托普利以上的理化性質，重新建立了其含量測定的方法，以期為控制金寶腎片的質量及提高制劑的臨床藥效提供良好的依據(jù)。

3.1 流動相的選擇

根據(jù)卡托普利呈弱酸性，筆者經(jīng)過摸索發(fā)現(xiàn)流動相pH在2.6～2.8之間，樣品比較穩(wěn)定。因此，在此基礎上，試用了不同類別的流動相，發(fā)現(xiàn)0.01 mol/L磷酸二氫鈉-甲醇-乙腈（70∶25∶5）樣品峰形過寬，且樣品峰與雜質峰分離度欠佳；甲醇-0.1%磷酸（70∶30）樣品出峰時間，分離度均不好；最后采用甲醇-四氫呋喃-0.1%磷酸溶液（30∶0.15∶70），樣品峰形以及分離度均較好，故選其為卡托普利的流動相。

3.2 提取條件的選擇

金寶腎片中卡托普利的提取方法，筆者參閱相關文獻[16-18]，進行了提取方法的比較。首先比較了回流提取法和超聲提取法，發(fā)現(xiàn)回流提取法的提取效率更高，并且比超聲提取法重復性更好?？赡苁怯捎诳ㄍ衅绽Y構的特殊性，對熱不穩(wěn)定，因此回流的熱對流方式更加平穩(wěn)，更適于卡托普利的提取。進一步對回流提取條件進行優(yōu)化，比較了回流提取的溫度（40、50、60℃）和提取時間（1、2、3 h），發(fā)現(xiàn)卡托普利的回流溫度不能過高，50℃提取2 h提取效率最高。此外，由于卡托普利對光的不穩(wěn)定性，因此所有的提取和測定操作應盡量避光進行。

[1]簡宇，馬進.慢性腎衰竭中西醫(yī)治療進展[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報，2014，16（11）：198-201.

[2]岑文新.慢性腎功能衰竭的中西醫(yī)結合治療進展[J].中國民族民間醫(yī)藥，2014，24（11）：33-34.

[3]黎磊石，劉志紅.中國腎臟病學[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2008：1280.

[4]Brenner BM，Lawler EV，Mackenzie HS.The hyperfiltration theory：aparadigmshiftinnephrology[J].Kidney Int，1996，49：1774.

[5]Mahmood J，Khan F，Okada S，et al.Local delivery of angiotensin receptor blocker in to the kidney ameliorates progression of experimental glomerulonephritis[J].Kidney Int，2006，70：1591.

[6]馮青，萬毅剛，蔣春明，等.中藥延緩慢性腎功能衰竭進展的機制和效果[J].中國中藥雜志，2011，36（9）：1122-1128.

[7]Nahas ME，Bello AK.Chronic kidney disease：the global challenge[J].Lancet，2005，365（68）：331-340.

[8]董培.卡托普利緩釋片采用HPLC法含量測定結果分析[J].藥品鑒定，2011，1（10）：104-106.

[9]鄭夢薇，許曉峰.卡托普利片含量測定方法的研究[J].中國現(xiàn)代藥物應用，2008，7（2）：7-10.

[10]朱偉，王學美.大黃治療慢性腎功能衰竭機制的研究進展[J].中國中西醫(yī)結合雜志，2005，25（5）：471-475.

[11]孫華，潘行山，謝海棠.大黃治療慢性腎功能衰竭的系統(tǒng)評價[J].中國醫(yī)藥指南，2012，10（23）：614-615.

[12]國家藥典委員會.中國藥典[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄Ⅺ.

[13]田雁英.HPLC法測定卡托普利片含量[J].中國藥事，2008，22（5）：409-410.

[14]陳格，李巧雯.卡托普利原料的含量測定方法研究[J].中國實用醫(yī)藥，2012，7（7）：26-28.

[15]Zhong P，Guo MP.Preparation of Disulfides by the Oxidation of Thiols using Trichloroisocyanuric Acid[J].Synth Commun，2001，31（12）：1825-1828.

[16]王璐.高效液相色譜法測定復方卡托普利尼群地平膠囊中卡托普利的含量[J].海峽藥學，2012，24（10）：85-86.

[17]魏峰，裘漢幸.復方卡托普利片含量測定中前處理方法的改進[J].中國藥品標準，2005，6（1）：42.

[18]李驊，謝艷華，張邦樂，等.RP-HPLC法同時測定雙丹口服液中沒食子酸丹參素和原兒茶醛的含量[J].中國醫(yī)藥導報，2012，9（5）：117-119.

Determination of Captopril in Jinbaoshen Tablets by HPLC

QIANWenhuiLUYinLIAOXinWANGYueSUHuaWANGShudong
Department of Preparation Division,Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command,Jiangsu Province,Nanjing 210002,China

ObjectiveTo establish a HPLC method for the determination of Captopril in Jinbaoshen Tablets.MethodsHPLC was performed on Lichrospher C18column(4.6 mm×250 mm,5μm)and the mobile phase was consisted ofmethanoltetrahydrofuran-0.1%phosphoric acid aqueous solution(30∶0.15∶70,pH=2.6-2.8).The flow rate was 1.0 mL/min,the wavelength of detection was 215 nm and the column temperature was 40℃.ResultsThe linear relationship was good for captopril within the range of 18.964-94.820μg/mL(r=0.9998)and the average recovery was 96.97%,RSD=0.60% (n=9).ConclusionThe HPLC method is simple and practical with good reproducibility,which is suitable for the analysis and quality control of captopril in Jinbaoshen Tablets.

Jinbaoshen Tablets;Captopril;HPLC;Content determination

R927.2

A

1673-7210（2015）04（c）-0125-04

2015-01-17本文編輯：衛(wèi)軻）

全軍醫(yī)療機構制劑標準提高科研專項課題重點項目（編號13ZJZ13）。

王曙東（1965-），男，博士，主任藥師；研究方向：中藥制劑。