楊紅梅，盛 蓉，宋 英，曹 蕾，唐安玲

1成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都 610075;2 成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，成都 610072

吳茱萸堿(Evodiamine，EVO)是中藥吳茱萸的主要活性成分［1］。研究表明EVO 具有抗炎、鎮(zhèn)痛、降血尿酸的作用［2］，但EVO 屬于生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)(BCS)二類的難溶性藥物，溶出速率是制約其生物利用度的關(guān)鍵因素［3］。固體分散體是提高難溶性藥物的溶出速度，改善難溶性藥物生物利用度［4-5］的有效方法之一。本實(shí)驗(yàn)制備了吳茱萸堿分散體并對(duì)其體外溶出進(jìn)行了相關(guān)研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器

HP1100 型高效液相色譜儀(美國惠普)，四元泵，DAD 檢測器，HP 化學(xué)工作站;色譜柱:依利特C18(150 mm×4.6 mm，5 μm);BP211D 型分析天平(德國賽多利斯);DLXW-S-8 電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器廠);JB-3 磁力攪拌器(上海雷磁儀器有限公司)。

1.2 材料

EVO 對(duì)照品(中國藥品生物制品鑒定所，批號(hào)110802-200606);EVO 原料藥(西安冠宇生物技術(shù)有限公司，批號(hào)GY20070603，純度≥98%);泊洛沙姆188(F68，德國巴斯夫(中國)有限公司)，批號(hào)03000242876);十二烷基硫酸鈉(SDS，汕頭市西隴化工廠，批號(hào)090619);輔料均為藥用標(biāo)準(zhǔn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 EVO 固體分散體的制備

取F68 過80 目篩90 g 與10 g EVO 超微粉混合均勻，于水浴鍋上(80 ℃)研磨攪拌30 min，立即倒入預(yù)冷的不銹鋼盤上，迅速放置于-20 ℃冰柜中，冷卻固化4 h，取出放置干燥器中平衡24～48 h，粉碎過篩(60 目)，并同法制備EVO 原料藥-F68 固體分散體備用。另取F68 過80 目篩45 g，與5 g 的EVO超微粉混合均勻，得EVO 超微粉與F681∶9 的物理混合物，于干燥器中備用。

2.2 EVO 不同處理方法水中平衡溶解度的測定

研究表明，吳茱萸堿在不同pH 條件的溶出介質(zhì)中，溶出度較小且無顯著差異［6］，故該試驗(yàn)只考察其在水中的平衡溶解度。取過量的EVO 原料藥、EVO 超微粉、EVO 原料藥-F68 固體分散體、EVO 超微粉-F68 固體分散體各2 份，均置于250 mL 的具塞錐形瓶中，分別加入100 mL 水，置37±0.5 ℃恒溫水浴中，磁力攪拌24 h 后吸取上清液，經(jīng)微孔濾膜濾過(0.45 μm)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 EVO 不同處理方法溶出度的測定

分別取EVO 原料藥、EVO 超微粉約10 mg，EVO 超微粉-F68 固體分散體、EVO 超微粉-F68 物理混合物約50 mg，精密稱定，參照《中國藥典》2010年版二部附錄XC 溶出度測定法第二法(漿法)項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定進(jìn)行測定。以1% SDS 溶液為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min，放入時(shí)開始計(jì)時(shí)，分別于3、5、10、15、30、45、60 min 時(shí)，取溶液10 mL(同時(shí)補(bǔ)液10 mL)，微孔濾膜(0.45 μm)濾過，精密吸取濾液5 mL，用甲醇定容至10 mL 量瓶，微孔濾膜(0.45 μm)濾過，精密吸取續(xù)濾液20 μL 進(jìn)樣，按外標(biāo)法計(jì)算溶出度。

2.4 EVO 超微粉-F68 固體分散體配比考察

分別以EVO 超微粉與F68 按1∶2、1∶4、1∶6、1∶9 按“2.1”項(xiàng)方法制備樣品。

供試品溶液的制備 參照《中國藥典》2010年版二部附錄XC 項(xiàng)下“溶出度測定法”的漿法測定EVO 固體分散物的溶出度。溶出介質(zhì)為1% SDS，體積為900 mL，溫度為37±0.5 ℃，轉(zhuǎn)速為100 rpm。取EVO 固體分散物適量(約相當(dāng)于EVO10 mg)，精密稱定，放入時(shí)開始計(jì)時(shí)，于45 min 定位吸取溶液10 mL，吸取液微孔濾膜(0.45 μm)濾過，精密吸取濾液5 mL，用甲醇定容至10 mL，微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.5 固體分散體含量測定

取EVO 超微粉-F68 固體分散體(1 ∶4)約50 mg，共兩份，置100 mL 量瓶中，加甲醇適量，超聲處理30 min，放冷，定容至刻度，微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，精密吸取5 μL，以色譜柱:依利特柱C18(150 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈∶0.1% 磷酸(含2% 的四氫呋喃)(38∶62);柱溫:30 ℃，檢測波長:225 nm 色譜條件測定EVO 含量［7-9］。

3 結(jié)果與討論

3.1 不同處理方法對(duì)EVO 在水中平衡溶解度的影響

EVO 原料藥和超微粉在水中幾乎不溶，EVO 超微粉-F68 固體分散體對(duì)EVO 水中溶解度提高最大，高出EVO 原料藥-固體分散體和EVO 超微粉-F68物理混合物約3～5 倍。由此可見，固體分散體能使藥物保持高度分散狀態(tài)，加快藥物的溶出;F68 是固體分散體中使EVO 增加溶出的主要因素。測定結(jié)果見表1。

表1 不同樣品水中的平衡溶解度測定結(jié)果(n=2)Table 1 Determination results of equilibrium solubility in water of different samples (n=2)

3.2 不同處理方法對(duì)EVO 溶出度的影響

EVO 超微粉-F68 固體分散體與其余三個(gè)樣品的溶出行為有差異;EVO 超微粉-F68 物理混合物和EVO 原料藥溶出行為有差異;EVO 原料藥和EVO超微粉溶出行為相似，EVO 超微粉-F68 物理混合物和EVO 超微粉溶出行為相似。F68 的加入能促進(jìn)原料藥EVO 的體外溶出，F(xiàn)68 與EVO 超微粉形成固體分散體之后，溶出度大為改觀，在1%SDS 溶液溶出度提高到60%以上。上述四個(gè)樣品在45 min時(shí)溶出已不再變化，EVO 超微粉-F68 固體分散體60 min 累積溶出度為65%，較EVO 原料藥提高近60倍。根據(jù)溶出度結(jié)果繪制溶出曲線，結(jié)果如圖1。

圖1 EVO 不同處理方法的溶出曲線圖Fig.1 Dissolution curves of EVO with different processing methods

參考《口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》，采用非模型依賴的f2相似因子法對(duì)溶出曲線進(jìn)行比較。相似因子(f2)是衡量兩條溶出曲線相似度的參數(shù)，計(jì)算公式如下:

n:試驗(yàn)點(diǎn)數(shù);Rt、Tt:t 時(shí)刻參比制劑和被試制劑的釋放度;f2值得大小可用來表征被試制劑與參比制劑釋藥之間的近似程度。若兩條曲線完全相同，f2值為100;隨著兩條曲線近似程度的降低，f2值趨近于0。一般認(rèn)為，50≤f2≤100，制劑具有相似的體外釋放度。

分別計(jì)算EVO 超微粉-F68 固體分散體、EVO原料藥、EVO 超微粉、EVO 超微粉-F68 物理混合物四者的f2值，結(jié)果見表2。

表2 f2相似因子比較Table 2 Comparison of similarity factor

3.3 溶出度的測定

精密吸取上述對(duì)照品溶液(0.0345 mg/mL)和“2.4”項(xiàng)供試品溶液各20 μL，按色譜條件注入液相色譜儀，按外標(biāo)法計(jì)算溶出度，結(jié)果見表3。

表3 固體分散體輔料比例的篩選Table 3 Screening of solid dispersion excipient

結(jié)果表明，EVO 與F68 比例為1∶4 的溶出度與1∶9 的溶出度差異不大，因此為減少輔料用量，確定EVO 與F68 按1∶4 的比例，采用熔融法制備固體分散體。

3.4 EVO 超微粉-F68 固體分散體(1∶4)含量測定

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，EVO 含量分別為97.695%、98.807%(圖2)。固體分散體技術(shù)對(duì)藥物的含量無影響。

3.5 討論

固體分散體也存在一定的局限性，在固體分散體中，藥物可達(dá)到高度分散的狀態(tài)，但其分散狀態(tài)的穩(wěn)定性不好，長時(shí)間貯存往往會(huì)發(fā)生老化現(xiàn)象，應(yīng)考察其在高溫強(qiáng)光下的穩(wěn)定性，為以后的儲(chǔ)存條件提供依據(jù)。

經(jīng)X-衍射鑒定顯示EVO 原料藥在7.760°、8.694°、18.480°、26.107°有的特異性的晶體衍射峰;在19.217°和23.360°有泊洛沙姆188 的特征衍射峰;在固體分散體中仍可見F68 衍射峰和EVO 衍射峰，EVO 特征衍射峰峰強(qiáng)度大大減小，說明制備的載藥固體分散體并未改變EVO 的晶體特征，絕大部分藥物以微晶形式分散于載體中;紅外圖譜顯示EVO 沒有發(fā)生太大的變化，可以認(rèn)為EVO 在F68固體分散體中沒有發(fā)生化學(xué)變化;掃描電鏡結(jié)果顯示已無可見吳茱萸堿晶體存在于載體中，推測吳茱萸堿以微晶或無定形狀態(tài)存在于載體中。故此固體分散體技術(shù)適于吳茱萸堿的工藝成型.

圖2 EVO 對(duì)照品(A)、EVO 固體分散體陰性樣品(B)及EVO 分散體樣品(C)的HPLC 色譜圖Fig.2 HPLC chromatograms of EVO control (A)，negative control (B)and EVO dispersion sample (C)

考慮到生物堿和酸生成鹽能大大增加其溶出度，我們在前期實(shí)驗(yàn)中考察了吳茱萸堿和不同酸制備成鹽的溶出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:吳茱萸堿溶出度較小且無顯著性差異。從結(jié)構(gòu)上分析，吳茱萸堿屬于吲哚喹寧類生物堿，氮原子上的孤對(duì)電子能接受氫離子而表現(xiàn)堿性，但吸電子基團(tuán)的誘導(dǎo)效應(yīng)及鄰近苯環(huán)p-π 共軛效應(yīng)均能降低氮原子的電荷密度，堿性降低，這可能是吳茱萸堿成鹽溶出依然較小的原因;同時(shí)我們也考察了把吳茱萸堿制備成更小粒徑的粉末，加入潤滑劑等輔料壓片及調(diào)節(jié)不同比例的輔料量壓片，結(jié)果顯示吳茱萸堿的溶出效果依然沒有改善;最終選用強(qiáng)親水性載體聚乙二醇類(PEG)、聚維酮類(PVP)、泊洛沙姆(pluronic F68)制備成分散片，其中以泊洛沙姆最優(yōu)。

4 結(jié)論

試驗(yàn)分別考察了不同處理方法對(duì)EVO 在水中平衡溶解度的影響，結(jié)果顯示以泊洛沙姆188(F68)為載體，熔融法制備吳茱萸堿固體分散體能顯著提高吳茱萸堿的溶出，也使用了X-衍射、紅外圖譜、掃描電鏡法測得所制備的分散體不影響EVO 藥物的含量和形態(tài)，該制備方法穩(wěn)定可行，為工業(yè)化大生產(chǎn)提供依據(jù)。

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