劉軼華 ，穆曉燕(漯河醫(yī)學高等專科學校第二附屬醫(yī)院藥品科，河南 漯河 462300)

安神膠囊為《中華人民共和國藥典》中收錄的純中藥制劑，主要由酸棗仁(炒)、川芎、知母、麥冬、制何首烏、五味子、丹參、茯苓等組成［1］。本品原質量控制的標準主要針對五味子和川芎進行了薄層色譜(thin layer chromatography，TLC)定性鑒別，采用液相色譜法對安神膠囊中的五味子醇甲進行了定量［2］。為了提高安神膠囊的標準，本研究采用TLC 對麥冬、制何首烏、丹參、茯苓進行定性，采用高效液相色譜法對安神膠囊中丹參酮ⅡA進行定量。

1 儀器與試劑

Agileni 1100 高效液相色譜儀、紫外檢測器(美國Agilen 公司);BS-124S 電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司);MILLI-Q Academic 超純水制備系統(tǒng)(美國密理博公司);RE-52AA旋轉薄膜蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);硅膠G(薄層層析用，青島海洋化工廠)。麥冬、制何首烏、丹參、茯苓對照藥材、大黃素、丹參酮Ⅱ對照品(批號:170098-200608、140034-20061211，中國藥品生物制品檢定所);安神膠囊(長春海外制藥集團有限公司生產(chǎn)，國藥準字Z20073024，批號:110316、110930、110926);水為超純凈水，乙腈和甲醇均為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 TLC 定性鑒別

(1)麥冬:取膠囊25 粒，稱取內容物約5 g，加蒸餾水60 ml，水浴加熱提取2 h，冷卻，3 000 rpm 離心10 min，取上清液，加入鹽酸3 ml，水浴加熱1 h，冷卻，加三氯甲烷25 ml，萃取3 次，合并萃取液，旋轉蒸發(fā)儀濃縮至2 ml，既得供試品溶液。麥冬對照藥材2 g，加蒸餾水45 ml，參照上述方法制得麥冬對照藥材溶液。毛細吸管分別吸取上述溶液各2 μl，點于硅膠G薄層板上進行層析，甲醇-乙醚(V ∶V =3 ∶1)為展開劑進行展開，取出并晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點清晰顯色為止。結果顯示，供試品溶液和麥冬對照藥材溶液在硅膠G薄層板相應的位置顯色。(2)制何首烏:取膠囊25 粒，取內容物約5 g，加甲醇80 ml，超聲波輔助提取1 h，3 000 rpm 離心10 min，取上清液，水浴蒸干，加蒸餾水10 ml 超聲輔助溶解，鹽酸2 ml，水浴加熱25 min，冷卻，30 ml 乙醚進行萃取，萃取3 次，合并萃取液，水浴蒸干，加甲醇1 ml 溶解既得供試品溶液。取何首烏對照藥材2 g，參照上述方法制得制何首烏對照藥材溶液。再取大黃素對照品0.5 g，加甲醇10 ml，超聲輔助溶解，水浴加熱濃縮至1 ml，得對照品溶液。毛細吸管吸取上述溶液各2 μl，點于硅膠G 薄層板上進行層析，以甲醇-石油醚-甲酸(V∶V∶V =11∶5∶2)為展開劑進行展開，取出并晾干，365 nm 波長下進行紫外光燈檢查。結果顯示，供試品溶液和制何首烏對照藥材溶液以及對照品溶液均在相同的位置顯示橙色熒光斑點。(3)丹參:取膠囊25 粒，取內容物約5 g，石油醚30 ml，超聲輔助提取30 min，水浴蒸干，甲醇1 ml 溶解既得供試品溶液。丹參對照藥材1 g，參照上述方法制得制成對照藥材溶液。丹參酮Ⅱ對照品0.5 g，加甲醇10 ml，超聲輔助溶解，水浴加熱濃縮至1 ml，得對照品溶液。毛細吸管吸取上述溶液各2 μl，點于硅膠G 薄層板上進行層析，以石油醚-乙酸乙酯(V∶V =8∶1)為展開劑進行展開，取出并晾干。結果顯示，供試品溶液和丹參對照藥材溶液以及對照品溶液均在相同的位置顯示相同斑點。(4)茯苓:取膠囊25 粒，取內容物約5 g，加乙醚80 ml，飽和氯化鈉溶液2 ml，超聲輔助提取1 h，提取3 次，合并提取液，取乙醚層，揮干，殘渣加正己烷1 ml 溶解既得供試品溶液。茯苓對照藥材1 g，乙醚40 ml，超聲輔助提取1 h，3 000 rpm 離心10 min，取上清液，水浴蒸干，殘渣采用1 ml 正己烷溶解既得對照藥材溶液。毛細吸管吸取上述溶液各2 μl，點于硅膠G 薄層板上進行層析，以石油醚-丙酮-乙酸乙酯(V∶V∶V =85∶15∶1)為展開劑進行展開，取出并晾干，365 nm波長下進行紫外光燈檢查。結果顯示，供試品溶液和茯苓對照藥材溶液均在相同的位置顯示相同的熒光斑點。

2.2 色譜條件

Agilent XDS C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，流動相為乙腈-水(V∶V =25∶50)，流速1.0 ml/min，進樣量為10 μl，柱溫為25 ℃。檢測波長為286 nm，丹參酮ⅡA峰理論板數(shù)＞2 000。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液:丹參酮ⅡA 標準品精密稱取5 mg，10 ml甲醇超聲輔助溶解，轉移至10 ml 容量瓶中，甲醇補充至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液:取膠囊100 粒，取內容物約10 g，石油醚30 ml，超聲輔助提取30 min，水浴蒸干，甲醇1 ml溶解并轉移至50 ml 容量瓶中，甲醇補充至對應的刻度，既得供試品溶液。2.2.3 陰性樣品溶液:參照的安神膠囊制備工藝制備缺丹參樣品。精密稱取樣品5 g，參照供試品溶液的制備方法制備陰性樣品溶液。

2.4 干擾試驗

準確吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10 μl，參照“2.2”項下色譜條件進行測定。結果顯示，陰性溶液色譜中無對應的丹參酮ⅡA峰，見圖1。

2.5 線性關系

準確吸取對照品溶液0.1、1、2、3、4、5 ml 置于10 ml 的容量瓶中，甲醇補充至相應的刻度，分別進樣10 μl，參照“2.2”項下色譜條件進行測定，以峰面積為縱坐標(Y)，丹參酮ⅡA濃度為橫坐標(X)繪制標準曲線，結果表明，丹參酮ⅡA在0.005 ～0.25 mg/ml 范圍線性關系良好，其回歸方程為Y=6.99 ×105X+5.99 ×103，r=0.999 4。

2.6 精密度試驗

準確吸取對照品溶液1 ml 于10 ml 容量瓶中，甲醇補充至相應刻度，準確吸取10 μl 進樣，參照“2.2”項下色譜條件進行測定，連續(xù)檢測5 次，記錄峰面積。計算顯示，峰面積的RSD為0.27%，提示儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取膠囊100 粒，精密稱取內容物10 g，參照“2.3.2”項下制備供試品溶液，冰箱1 ℃保存，分別于0、2、8、10、15、20、24 h進行測定，記錄峰面積。結果顯示，峰面積的RSD為0.35%，供試品溶液24 h 穩(wěn)定性良好。

2.8 重復性試驗

精密稱取同一批樣品(批號110316)1 g，共5 份，參照“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，準確吸取溶液10 μl 進樣，參照“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄峰面積。結果表明，樣品中丹參酮ⅡA峰面積的RSD 為1.27%。

2.9 加樣回收率試驗

精密稱取同一批樣品(批號110930)5 g，加入丹參酮ⅡA對照品溶液4.5 ml，平行3 份，參照“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，進樣10 μl，測定，計算回收率。結果顯示，丹參酮ⅡA平均回收率99.43%，表明此方法測定準確可靠，見表1。

圖1 對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液色譜圖Fig 1 HPLC chromatogram of control substance solution，test solution and negative sample solution

表1 丹參酮ⅡA加樣回收率試驗結果Tab 1 Standard recovery rate of tanshinone ⅡA

2.10 樣品測定

精密稱取同一批樣品(批號110926)10 g，參照“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，平行實驗3 份，進樣10 μl，測定，計算丹參酮ⅡA平均含量，結果顯示，該藥品的平均含量為0.586 9 mg/g，RSD為0.65%。

3 討論

3.1 樣品處理

本研究對安神膠囊的提取條件，考慮到丹參酮ⅡA極性較弱，選擇石油醚進行提取，超聲輔助提取30 min。

3.2 波長選擇

本研究初實驗對波長進行了比較，發(fā)現(xiàn)采用240 nm、260 nm、286 nm、295 nm 都可以準確檢測，但286 nm、10 lun 時，峰的分離度明顯，峰形比良好，故選擇286 nm 作為檢測波長。

3.3 流速選擇

本研究分別對流速分別為0.5 ml/min、1.0 ml/min、

1.5 ml/min進行實驗，結果表明，流速為1 ml/min時效果明顯，流速過大彼此分離度減小，相反流速過小，實驗時間過長。

3.4 流動相選擇

本研究分別考察了乙腈-0.2%磷酸溶液(V∶V =10∶80)，乙腈-水(V∶V=25∶50)以及甲醇-乙腈-水(V∶V∶V=4∶20∶40)，結果顯示，乙腈-水(V∶V=25∶50)分離效果明顯。

［1］ 盧方浩，杜智敏，張波，等. 安神膠囊鎮(zhèn)靜催眠作用的研究［J］.哈爾濱醫(yī)科大學學報，2003，37(2):125-127.

［2］ 石洲寶，藺興堯，陳長浩，等. 安神膠囊安全性及毒性研究［J］.世界最新醫(yī)學信息文摘:連續(xù)型電子期刊，2014，14(28):257-258.

［3］ 付聰.安神膠囊主要藥效學實驗［J］.中國社區(qū)醫(yī)師:醫(yī)學專業(yè)，2011，13(32):8.

［4］ 張曉紅，王月茹，謝偉. 安神膠囊的薄層色譜鑒別［J］. 陜西中醫(yī)，2013，34(9):1231-1232.

［5］ 高菲，譚思思，姚琳，等.復方刺五加顆粒的質量控制［J］. 中國醫(yī)院藥學雜志，2012，32(15):1193-1196.

［6］ 管敏，王淼，達慶國. 參味合劑質量控制研究［J］. 安徽醫(yī)藥，2014，18(8):1440-1443.

［7］ 閻維維，張詠梅.通脈養(yǎng)心丸質量控制研究［J］. 中草藥，2011，42(9):1751-1754.

［8］ 張燕，莫曉燕，曹陽，等.芪膠膏的薄層色譜鑒別［J］. 中國藥業(yè)，2013，22(23):32-33.

［9］ 沈愛云.黃芪、丹參中多種有效成分的制備和質量控制［J］. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2013，9(12):67-68.

［10］ 蔣桂香，呂應年，范世錦，等. 濃縮丹參骨寶顆粒中水溶性有效成分的質量控制研究［J］.中國醫(yī)藥導報，2011，8(34):67-69.