雷 穎，吳莉紅

（甘肅林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院園林工程系，甘肅 天水 741020）

四季秋海棠組培快繁技術(shù)研究

雷 穎，吳莉紅

（甘肅林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院園林工程系，甘肅 天水 741020）

以四季秋海棠莖切段為外植體，研究四季秋海棠組培快繁技術(shù)。結(jié)果表明，在MS+500 mg/L LH+ 3.0 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA培養(yǎng)基上，不定芽誘導(dǎo)效果較好，分化率達(dá)100%。適合四季秋海棠繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IAA+0.3 mg/L GA3和MS+2.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+0.5 mg/L GA3。適宜的生根培養(yǎng)基為1/2 MS+0.2 mg/L IAA，生根率為100%，移栽后成活率達(dá)97%。

四季秋海棠；組織培養(yǎng)；快速繁殖

四季秋海棠（Begonia semper florens Link et Otto.），別名瓜子海棠或玻璃秋海棠，是秋海棠科秋海棠屬多年生宿根花卉［1～2］。株高20～40 cm，莖稍多汁，葉互生、翠綠色、卵圓形至廣橢圓形，葉基部偏斜，聚傘花序腋生，花大；因其花、葉、莖都呈肉質(zhì)，酷似玻璃而得名。玻璃海棠枝葉青翠，花色妖艷濃郁，如同盛裝美人，如栽培得當(dāng)，可四季開花，是良好的室內(nèi)小型盆栽觀賞花卉。亦作花壇用花，溫暖地區(qū)或溫暖季節(jié)可布置于庭院或花壇［3］。

四季秋海棠容榮花貴，易養(yǎng)護(hù)管理，頗受廣大消費(fèi)者喜愛，有較大的推廣和應(yīng)用空間。但在我國(guó)北方，種子早期未熟先落，采用扦插繁殖數(shù)量有限，因此應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖試管苗具有重要的意義。我們通過試驗(yàn)研究取得了較好的培養(yǎng)方案，增殖率高，幼苗健壯，移栽成活率高，可為四季秋海棠規(guī)?；a(chǎn)提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

培養(yǎng)材料為甘肅林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院花卉品種示范基地種植的四季秋海棠幼苗或幼嫩新枝。

1.2 方法

1.2.1 外植體建立 選取四季秋海棠幼苗或幼莖，剪去葉片，切成2～3 cm小段，用清水處理干凈，在超凈工作臺(tái)上用70%酒精浸泡30 s，用無菌水沖3遍，再轉(zhuǎn)入0.1%升汞浸5 min，用無菌水沖洗5遍［4～6］，然后置于高壓滅菌過的鋪有濾紙的培養(yǎng)皿中，剪成長(zhǎng)0.5～1.0 cm，含有1個(gè)節(jié)的小莖段，接種在分化培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。

1.2.2 初代培養(yǎng) 初代培養(yǎng)以MS+500 mg/L LH為基礎(chǔ)培養(yǎng)基［7～8］，分別添加0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mg/L 6-BA和0.1、0.2、0.3、0.4 mg/L NAA，觀察記載平均芽數(shù)、苗高等指標(biāo)，20 d后統(tǒng)計(jì)分化率。

1.2.3 繼代培養(yǎng) 將初代培養(yǎng)所得的簇生嫩莖切成長(zhǎng)1.0～1.5 cm的小段，轉(zhuǎn)接到以MS為基本培養(yǎng)基，添加1.0、2.0、3.0、4.0 mg/L 6-BA和0.1、0.3、0.5 mg/L NAA和0.1、0.3、0.5 mg/L IAA以及0.1、0.2、0.3、0.5、0.8、1.0 mg/L GA3的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)。觀察記載生長(zhǎng)情況，30 d后統(tǒng)計(jì)玻璃苗比例。

1.2.4 生根培養(yǎng) 將繼代培養(yǎng)所得的嫩莖切下，轉(zhuǎn)入以1/2MS為基本培養(yǎng)基，分別添加0.1 mg/L NAA和0.1、0.2、0.5 mg/L IAA以及0.1、0.3 mg/L IBA的生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，觀察生根情況，20 d后統(tǒng)計(jì)生根率。

1.2.5 移栽 將生根后的試管苗不開蓋在溫室中置3 d后，開蓋置6 d，然后移栽于珍珠巖的基質(zhì)中，每天噴水3次，15 d后上盆，統(tǒng)計(jì)成活率。

1.3 培養(yǎng)條件

所有培養(yǎng)基都添加蔗糖3%、瓊脂0.6%，pH 5.6。培養(yǎng)基在1.5 kg/cm2壓力、121℃濕熱滅菌20 min［9］。培養(yǎng)室溫度為（20±2）℃［10］，光照14 h/d，光照度2 000 Lx［11］。

2 結(jié)果與分析

2.1 初代培養(yǎng)

從表1可知，四季秋海棠初代培養(yǎng)基中，在一定范圍內(nèi)，隨著6-BA和NAA的濃度的增大，分化率增大、平均芽數(shù)增多、平均苗高增高，其中MS+500 mg/L LH+3.0 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA培養(yǎng)基對(duì)叢生芽的誘導(dǎo)率較高，為100%，平均芽數(shù)為6.0。但當(dāng)6-BA濃度大于3.0 mg/L、NAA濃度大于0.4 mg/L時(shí)，平均芽數(shù)減少，平均苗高降低，且分化時(shí)間推遲?？梢?，MS+500 mg/L LH+ 3.0 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA培養(yǎng)基適合四季秋海棠的初代培養(yǎng)。

2.2 繼代培養(yǎng)

30 d后的增殖結(jié)果因激素配比不同而異（表2），嫩莖增殖倍數(shù)隨6-BA濃度的增高呈現(xiàn)增大后減少的趨勢(shì)，濃度過高會(huì)影響芽苗的高生長(zhǎng)，且有玻璃化現(xiàn)象產(chǎn)生。從試驗(yàn)結(jié)果可知，MS+2.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IAA與MS+2.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA是四季秋海棠較為理想的繼代培養(yǎng)基，增殖倍數(shù)分別為 7.1和 7.8，但 MS+2.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA培養(yǎng)基中的芽苗玻璃化程度相對(duì)較高。

表1 不同培養(yǎng)基上四季秋海棠初代培養(yǎng)結(jié)果

表2 不同培養(yǎng)基上四季秋海棠繼代培養(yǎng)結(jié)果

在四季秋海棠的繼代培養(yǎng)過程中，6-BA對(duì)芽苗的增殖起著決定性的作用，但其濃度較高時(shí)，芽苗高生長(zhǎng)受到擬制，且會(huì)出現(xiàn)玻璃苗［12～13］，而濃度降低分化率又隨之下降。在原基礎(chǔ)上加入不同濃度的GA3進(jìn)行試驗(yàn)［14］，20 d后的結(jié)果（表3）顯示，加入一定濃度的GA3對(duì)芽苗高生長(zhǎng)具有顯著影響，且隨著GA3濃度的升高，苗高呈增高趨勢(shì)，但當(dāng)GA3濃度大于1.0 mg/L時(shí)，苗莖細(xì)弱，葉片皺縮，降低GA3濃度可恢復(fù)正常。GA3濃度為0.1～0.5 mg/L時(shí)植株玻璃化程度較低，芽苗分化較好。綜合分析以上結(jié)果，適合四季秋海棠繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IAA+0.3 mg/L GA3和MS+2.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+0.5 mg/L GA3。

表3 添加GA3對(duì)四季秋海棠繼代生長(zhǎng)的影響

表4 不同生根培養(yǎng)基四季秋海棠試管苗生根情況

2.3 試管苗生根與移栽

生根培養(yǎng)20 d后觀察，以添加一定濃度的IAA培養(yǎng)基生根效果較好（表4），每個(gè)嫩莖基部有根3～5條，長(zhǎng)約3～5 cm，IAA濃度為0.2 mg/L時(shí)效果更好，再生后的完整植株苗形美觀，色澤深綠，移栽后成活率高達(dá)97%。

3 小結(jié)

試驗(yàn)結(jié)果表明，MS+500 mg/L LH+3.0 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA培養(yǎng)基對(duì)叢生芽的誘導(dǎo)率較高，為100%，平均芽數(shù)為6.0個(gè)，是四季秋海棠最適合的初代培養(yǎng)基。在繼代培養(yǎng)階段，對(duì)芽苗增殖產(chǎn)生明顯影響的因素是6-BA，但當(dāng)濃度較高時(shí)會(huì)使芽苗出現(xiàn)玻璃化，而GA3的加入使玻璃苗的概率顯著降低。適合四季秋海棠繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IAA+0.3 mg/L GA3和MS+2.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+0.5 mg/L GA3。添加濃度為0.2 mg/L的IAA，有利于四季秋海棠試管苗的生根。

［1］ 北京林業(yè)大學(xué)園林系花卉教研室.花卉學(xué)［M］.北京：中國(guó)林業(yè)出版社，1999.

［2］ 夏春森，朱義君.名新花卉標(biāo)準(zhǔn)化栽培［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2005.

［3］ 陳俊愉，劉師漢.園林花卉［M］.上海：上海科技出版社，1980.

［4］ 劉 敏.花卉組織培養(yǎng)與工廠化生產(chǎn)［M］.北京：地質(zhì)出版社，2002.

［5］ 陳振光.植物組織培養(yǎng)與試管育苗［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2004.

［6］ 譚文澄，戴策剛.觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)［M］.北京：中國(guó)林業(yè)出版社，1991.

［7］ 侯 娜，郭軍戰(zhàn)，王 港，等.東方百合（Lilium oritential）組織培養(yǎng)研究［J］.西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，23 （3）：120～122.

［8］ 李紅梅，王義強(qiáng).銀杏胚芽組織培養(yǎng)試驗(yàn)初報(bào)［J］.甘肅農(nóng)業(yè)科技，2008（3）：37-39.

［9］ 雍繼偉，任繼文.水梔子的組織培養(yǎng)和快速繁殖［J］.甘肅林業(yè)科技，2007，32（5）：17-18.

［10］ 任繼文，雷 穎.金絲桃組織培養(yǎng)再生體系的建立［J］.西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，25（3）：90-92.

［11］ 樊軍鋒，李 玲，韓一凡，等.84K楊葉片外植體再生系統(tǒng)的建立［J］.西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，17（2）：33-36.

［12］ 卜學(xué)賢，陳維倫.試管植物的玻璃化現(xiàn)象［J］.植物生理學(xué)通訊，1987，23（5）：13-19.

［13］ ZIV M，MEIR G，HARLEVY A.Factors influencing the production of hardened glaucous carnation plantlets in virtro［J］.Plant cell.Tissue and Drgan Culture. 1982，2（1）：55-65.

［14］ 雷 穎.黃海棠的組織培養(yǎng)和快速繁殖［J］.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，38（3）：357-360.

（本文責(zé)編：陳 珩）

S682.1；Q813.1

A

1001-1463（2015）02-0034-03

10.3969/j.issn.1001-1463.2015.02.013

2014-08-15；

2014-12-02

雷 穎（1966—），女，甘肅天水人，副教授，主要從事遺傳育種學(xué)與園林植物栽培養(yǎng)護(hù)學(xué)的教學(xué)與研究。聯(lián)系電話：（0）13629388692。