王文祎 徐 佳 劉 杰 楊瑤珺

(北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京，100102)

不同生長(zhǎng)方式防風(fēng)色原酮物質(zhì)含量測(cè)定及差異性分析

王文祎 徐 佳 劉 杰 楊瑤珺

(北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京，100102)

目的：以同時(shí)測(cè)定防風(fēng)中的兩種色原酮物質(zhì)升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷為目標(biāo)，建立了上述兩種物質(zhì)的的含量測(cè)定方法。方法：色譜柱采用Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；梯度洗脫的流動(dòng)相為水、甲醇，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，流速1 mL/min，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果：不同生長(zhǎng)方式的防風(fēng)樣品的5-O-甲基維斯阿米醇苷含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，野生和栽培防風(fēng)的升麻素苷含量有差異，不同生長(zhǎng)方式對(duì)防風(fēng)樣品的色原酮含量有差異。結(jié)論：野生防風(fēng)質(zhì)量較好，同時(shí)測(cè)定兩種色原酮方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性較好，可以此作為防風(fēng)中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的測(cè)定方法。

防風(fēng)；色原酮；升麻素苷；5-O-甲基維斯阿米醇苷

2010版《中華人民共和國(guó)藥典》使用固定流動(dòng)相比例的方法對(duì)升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷進(jìn)行含量測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)考察發(fā)現(xiàn)，采用固定比例流動(dòng)相的方法在前10 min時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)品出峰完全，但樣品中色譜峰未能完全分離，可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。

因此本實(shí)驗(yàn)參考相關(guān)文獻(xiàn)[7-15]以梯度洗脫的方法同時(shí)測(cè)定升麻素苷，5-O-甲基維斯阿米醇苷為目標(biāo)，建立了防風(fēng)中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量測(cè)定方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本實(shí)驗(yàn)共收集野生防風(fēng)樣品15份，栽培防風(fēng)25份，所有樣品經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)楊瑤珺教授鑒定為傘形科植物Saposhnicoviadivaricata(Turcz.)Schischk.的干燥根。樣品見(jiàn)表1。

儀器使用Sigma 3K15離心機(jī)(Sigma公司)，Sartorious BP110S分析天平(北京賽多利斯儀器有限公司)，DFT-100手提式高速中藥粉碎機(jī)(溫嶺市大德中藥機(jī)械有限公司)，Aglient 1100液相系統(tǒng)(Aglient公司，美國(guó))，KQ5200E超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

試劑使用甲醇(Fisher公司，色譜純)，屈臣氏蒸餾水，升麻素苷對(duì)照品(111522-201209，純度98%，中國(guó)食品藥品檢定研究院)，5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品(111523-201208，純度98%，中國(guó)食品藥品檢定研究院)。

表1 測(cè)定防風(fēng)樣品表

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：水、甲醇(梯度洗脫如表2)；檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，流速1 mL/min，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量10 μL。

表2 梯度洗脫表

1.2.2 對(duì)照品溶液的配置 精密稱(chēng)取升麻素苷對(duì)照品4.14 mg，5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品3.27 mg，加甲醇定容到10 mL容量瓶中，再分別精密吸取兩種對(duì)照品溶液各1 mL，混合、定容，制成每1 mL含升麻素苷0.0828 mg，5-O-甲基維斯阿米醇苷0.0654 mg的混標(biāo)溶液。

近年來(lái)，隨著大數(shù)據(jù)、互聯(lián)網(wǎng)、云計(jì)算等智能化信息技術(shù)在教育領(lǐng)域的深入，加之新課改提倡以人為本的全新發(fā)展觀的實(shí)施，我國(guó)開(kāi)始逐漸進(jìn)入網(wǎng)絡(luò)強(qiáng)國(guó)時(shí)代，并積極推進(jìn)信息技術(shù)與學(xué)校教育教學(xué)的全面融合，試圖改善舊式教學(xué)方式.那么說(shuō)到底，什么樣的教育才能克服學(xué)校教育在過(guò)去乃至現(xiàn)在始終存在的漏洞？本文提出一種新型教育方式，即智慧教育，它可以引導(dǎo)學(xué)生發(fā)現(xiàn)、發(fā)展和培養(yǎng)智慧.而要想實(shí)現(xiàn)這一切就必然需要?jiǎng)?chuàng)造一個(gè)具備智慧教育所有要求的環(huán)境——智慧學(xué)校.同時(shí)放眼國(guó)際，世界多個(gè)國(guó)家也均在圍繞智慧學(xué)校不同程度地展開(kāi)了相應(yīng)的研究，在數(shù)學(xué)教學(xué)領(lǐng)域尤為凸顯[1].

1.2.3 樣品溶液的配置 精密稱(chēng)取防風(fēng)樣品粉末(過(guò)60目篩)0.5 g，加甲醇10 mL，浸泡過(guò)夜，超聲提取20 min，離心15 min，取濾液用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

1.3 方法學(xué)考察

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制及線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液2 μL、4 μL、6 μL、8 μL、10 μL、16 μL、24 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積值，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果：升麻素苷計(jì)算回歸方程為Y=2249.3X+13.749，r=0.9999，含量在0.1656-1.9872 mg/mL范圍內(nèi)；5-O-甲基維斯阿米醇苷計(jì)算回歸方程為Y=2747.1X+20.482，r=0.9997，含量在0.1308～1.5696 mg/mL范圍內(nèi)，表明線性關(guān)系良好。

1.3.2 精密度考察 分別吸取對(duì)照品溶液，0.45 μm濾膜濾過(guò)，進(jìn)樣5次，每次10 μL，分別測(cè)定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷峰面積。結(jié)果：RSD分別為0.28%、0.34%，表明儀器精密度良好。

1.3.3 重現(xiàn)性考察 精密稱(chēng)取防風(fēng)藥材(FFA-15)2批，每批5份，每份0.5 g，加甲醇10 mL，浸泡過(guò)夜，超聲提取20 min，離心15 min取濾液用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積計(jì)算含量。結(jié)果：升麻素苷RSD為0.48%，5-O-甲基維斯阿米醇苷RSD為1.25%，表明重現(xiàn)性良好。

1.3.4 穩(wěn)定性考察 精密吸取同一供試品溶液10 μL，在0 h，4 h，8 h，12 h，24 h分別測(cè)定峰面積。結(jié)果：升麻素苷RSD為0.62%，5-O-甲基維斯阿米醇苷RSD為1.43%，表明樣品在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

1.3.5 加樣回收率考察 精密稱(chēng)取已知升麻素苷含量的防風(fēng)藥材粉末6份，分別加入相同含量的升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品溶液，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果：升麻素苷平均加樣回收率為98.98%，RSD為2.56%，5-O-甲基維斯阿米醇苷平均加樣回收率為96.72%，RSD為1.13%，符合要求。

2 結(jié)果

2.1 野生和栽培防風(fēng)樣品的含量測(cè)定 本實(shí)驗(yàn)對(duì)25份栽培防風(fēng)樣品、15份野生防風(fēng)樣品，按“樣品溶液配置”方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 防風(fēng)樣品中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量測(cè)定結(jié)果表

樣品編號(hào)升麻素苷(%)5-O-甲基維斯阿米醇苷(%)總含量(%)樣品編號(hào)升麻素苷(%)5-O-甲基維斯阿米醇苷(%)總含量(%)FA-10.36240.13230.4947FB-10.19230.17020.3626FA-20.38480.12440.5092FB-20.12710.09930.2263FA-30.23590.09570.3315FB-30.17360.19130.3649FA-40.20540.19450.3999FB-40.12030.16490.2853FA-50.11470.29480.4095FB-60.19670.18670.3834FA-60.30410.11310.4172FB-70.15750.08620.2437FA-70.17390.05520.229FB-80.22870.15370.3825FA-80.85470.25071.1054FB-90.13120.05660.1877FA-90.26380.19370.4575FB-100.26260.11810.3807FA-110.12420.33530.4594FB-110.20470.13360.3382FA-120.35620.12780.484FB-120.14720.13190.2791FA-130.14010.13860.2787FB-150.23210.21450.4467FA-150.37210.1030.4751FB-160.20320.29240.4956FA-160.21170.0820.2938FB-170.01890.42010.4391FA-170.29520.14340.4386FB-200.58240.44471.0271平均含量0.2930.1590.452FB-210.10550.15960.265FB-220.07010.10330.1733FB-230.15140.11950.2709FB-240.15910.12910.2882FB-250.14550.22450.37FB-260.16170.20490.3666FB-270.13990.06550.2055FB-280.10270.06960.1723FB-290.09860.14880.2474FB-300.11430.04260.1569平均含量0.1690.1650.334

本實(shí)驗(yàn)對(duì)25份栽培防風(fēng)樣品，15份野生防風(fēng)樣品進(jìn)行了含量測(cè)定。2010版《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定防風(fēng)中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的總量不得少于0.24%。

40份樣品中有7份樣品的升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的總量低于0.24%。其中栽培防風(fēng)樣品中FFB-2、FFB-9、FFB-22、FFB-27、FFB-28、FFB-30六批升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的總量低于0.24%，不合格率為24%。野生防風(fēng)樣品中FFA-7批樣品升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的總量總量低于0.24%，不合格率為6.7%。野生防風(fēng)的合格率高于栽培防風(fēng)。

栽培防風(fēng)升麻素苷平均含量為0.17%，5-O-甲基維斯阿米醇苷平均含量為0.16%，升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷平均含量為0.33%。野生防風(fēng)升麻素苷平均含量為0.29%，5-O-甲基維斯阿米醇苷平均含量為0.16%，升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷平均含量為0.45%。從總體上看，野生防風(fēng)的色原酮類(lèi)成分高于栽培防風(fēng)。

2.2 野生和栽培防風(fēng)在升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量上的差異性 將野生和栽培防風(fēng)分別與升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量相關(guān)聯(lián)，使用SPSS軟件對(duì)其進(jìn)行分析，顯著性差異情況見(jiàn)表4。

表4 野生和栽培防風(fēng)的色原酮含量顯著差異表a

注：a.分組變量：品種(1=栽培，2=野生)

升麻素苷含量數(shù)據(jù)、5-O-甲基維斯阿米醇苷含量數(shù)據(jù)和色原酮總含量數(shù)據(jù)通過(guò)正態(tài)性檢驗(yàn)，sig<0.05均不服從正態(tài)分布，因此用非參數(shù)的秩和檢驗(yàn)。升麻素苷含量漸進(jìn)顯著性(雙側(cè))<0.05，說(shuō)明野生和栽培防風(fēng)的升麻素苷含量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不同生長(zhǎng)方式的防風(fēng)樣品的升麻素苷含量不一樣。5-O-甲基維斯阿米醇苷含量漸進(jìn)顯著性(雙側(cè))>0.05，說(shuō)明野生和栽培防風(fēng)的5-O-甲基維斯阿米醇苷含量無(wú)差異，不同生長(zhǎng)方式的防風(fēng)樣品的5-O-甲基維斯阿米醇苷含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。色原酮總含量漸進(jìn)性顯著性(雙側(cè))<0.05，說(shuō)明野生和栽培防風(fēng)的色原酮總含量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不同生長(zhǎng)方式對(duì)防風(fēng)樣品的色原酮含量有差異。

3 討論

通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可看出栽培與野生防風(fēng)色原酮總量的含量有差異，野生防風(fēng)的色原酮總量要高于栽培防風(fēng)，說(shuō)明野生防風(fēng)的質(zhì)量要優(yōu)于栽培防風(fēng)。而從兩種色原酮物質(zhì)含量來(lái)看，差異主要體現(xiàn)在升麻素苷的含量。野生防風(fēng)升麻素苷含量明顯高于栽培防風(fēng)升麻苷含量，而5-O-甲基維斯阿米醇苷含量在栽培和野生防風(fēng)中含量基本相同，差異性不顯著。因此可增加樣本量，繼續(xù)探究栽培與野生防風(fēng)和升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷的關(guān)系，考察升麻素苷的含量是否適合作為鑒別栽培和野生防風(fēng)、評(píng)價(jià)防風(fēng)質(zhì)量?jī)?yōu)劣的依據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)梯度洗脫方法同時(shí)測(cè)定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷，有效避免呀藥典方法中色譜峰未能完全分離的問(wèn)題，而且方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性較好，可以此作為防風(fēng)中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的測(cè)定方法。

本實(shí)驗(yàn)還考查了栽培與野生防風(fēng)中兩種色原酮物質(zhì)含量的差異，并采用SPSS軟件分析，但數(shù)據(jù)顯示栽培與野生防風(fēng)只在升麻素苷含量有差異，5-O-甲基維斯阿米醇苷無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能與防風(fēng)的內(nèi)在生長(zhǎng)機(jī)制有關(guān)，值得進(jìn)一步探究。

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(2014-09-28收稿 責(zé)任編輯：張文婷)

Content Determination and Difference Analysis of Chromone in Fangfeng with Different Growth Patterns

Wang Wenyi, Xu Jia, Liu Jie, Yang Yaojun

(TMCCollege,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102,China)

Objective:To establish a content determination method to simultaneously determine two kinds of chromoneS including Prim-O-glucosylcimifugin and 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol in Fangfeng. Methods: Agilent TC-C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) was used as chromatographic column; water and methanol were used as gradient elution of the mobile phase, wave length of 254nm was detected, with the flow rate of 1 mL / min, column temperature of 35 ℃, the injection volume 10μL. Results: 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O- Methylvisamminol content of Fangfeng with different growth patterns had no significant difference; there was difference in the content of Prim-O-glucosylcimifugin between wild and cultivated Fangfeng; there were differences in Chromones contents in Fangfeng with different growth patterns. Conclusion: Wild Fangfeng has better quality, and the simultaneous determination of two Chromones method is simple, accurate, with good precision, reproducibility and stability, and this can be used as determination method of Prim-O-glucosylcimifugin and 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol in Fangfeng.

Fanbfeng; Chromone; Prim-O-glucosylcimifugin; 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol

北京中醫(yī)藥大學(xué)“重點(diǎn)學(xué)科”開(kāi)發(fā)課題(編號(hào)：2013-2DXKKF-21)

楊瑤珺(1969—)，女，博士，教授，碩士研究生導(dǎo)師，黑龍江哈爾濱人，北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，研究方向：中藥品種及質(zhì)量鑒定，E-mail：yangyaojunbucmtcm@163.com

R284.1

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.09.031