王文祎 徐 佳 劉 杰 楊瑤珺

(北京中醫(yī)藥大學中藥學院，北京，100102)

不同生長方式防風色原酮物質含量測定及差異性分析

王文祎 徐 佳 劉 杰 楊瑤珺

(北京中醫(yī)藥大學中藥學院，北京，100102)

目的：以同時測定防風中的兩種色原酮物質升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷為目標，建立了上述兩種物質的的含量測定方法。方法：色譜柱采用Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；梯度洗脫的流動相為水、甲醇，檢測波長254 nm，流速1 mL/min，柱溫35 ℃，進樣量10 μL。結果：不同生長方式的防風樣品的5-O-甲基維斯阿米醇苷含量無統計學意義，野生和栽培防風的升麻素苷含量有差異，不同生長方式對防風樣品的色原酮含量有差異。結論：野生防風質量較好，同時測定兩種色原酮方法簡便，結果準確，精密度、重現性、穩(wěn)定性較好，可以此作為防風中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的測定方法。

防風；色原酮；升麻素苷；5-O-甲基維斯阿米醇苷

2010版《中華人民共和國藥典》使用固定流動相比例的方法對升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷進行含量測定。本實驗通過考察發(fā)現，采用固定比例流動相的方法在前10 min時，標準品出峰完全，但樣品中色譜峰未能完全分離，可能會影響實驗的結果。

因此本實驗參考相關文獻[7-15]以梯度洗脫的方法同時測定升麻素苷，5-O-甲基維斯阿米醇苷為目標，建立了防風中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量測定方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本實驗共收集野生防風樣品15份，栽培防風25份，所有樣品經北京中醫(yī)藥大學楊瑤珺教授鑒定為傘形科植物Saposhnicoviadivaricata(Turcz.)Schischk.的干燥根。樣品見表1。

儀器使用Sigma 3K15離心機(Sigma公司)，Sartorious BP110S分析天平(北京賽多利斯儀器有限公司)，DFT-100手提式高速中藥粉碎機(溫嶺市大德中藥機械有限公司)，Aglient 1100液相系統(Aglient公司，美國)，KQ5200E超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

試劑使用甲醇(Fisher公司，色譜純)，屈臣氏蒸餾水，升麻素苷對照品(111522-201209，純度98%，中國食品藥品檢定研究院)，5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品(111523-201208，純度98%，中國食品藥品檢定研究院)。

表1 測定防風樣品表

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：水、甲醇(梯度洗脫如表2)；檢測波長254 nm，流速1 mL/min，柱溫35 ℃，進樣量10 μL。

表2 梯度洗脫表

1.2.2 對照品溶液的配置 精密稱取升麻素苷對照品4.14 mg，5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品3.27 mg，加甲醇定容到10 mL容量瓶中，再分別精密吸取兩種對照品溶液各1 mL，混合、定容，制成每1 mL含升麻素苷0.0828 mg，5-O-甲基維斯阿米醇苷0.0654 mg的混標溶液。

近年來，隨著大數據、互聯網、云計算等智能化信息技術在教育領域的深入，加之新課改提倡以人為本的全新發(fā)展觀的實施，我國開始逐漸進入網絡強國時代，并積極推進信息技術與學校教育教學的全面融合，試圖改善舊式教學方式.那么說到底，什么樣的教育才能克服學校教育在過去乃至現在始終存在的漏洞？本文提出一種新型教育方式，即智慧教育，它可以引導學生發(fā)現、發(fā)展和培養(yǎng)智慧.而要想實現這一切就必然需要創(chuàng)造一個具備智慧教育所有要求的環(huán)境——智慧學校.同時放眼國際，世界多個國家也均在圍繞智慧學校不同程度地展開了相應的研究，在數學教學領域尤為凸顯[1].

1.2.3 樣品溶液的配置 精密稱取防風樣品粉末(過60目篩)0.5 g，加甲醇10 mL，浸泡過夜，超聲提取20 min，離心15 min，取濾液用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.3 方法學考察

1.3.1 標準曲線繪制及線性關系考察 分別精密吸取對照品溶液2 μL、4 μL、6 μL、8 μL、10 μL、16 μL、24 μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積值，以對照品進樣量為橫坐標，峰面積值為縱坐標，繪制標準曲線。結果：升麻素苷計算回歸方程為Y=2249.3X+13.749，r=0.9999，含量在0.1656-1.9872 mg/mL范圍內；5-O-甲基維斯阿米醇苷計算回歸方程為Y=2747.1X+20.482，r=0.9997，含量在0.1308～1.5696 mg/mL范圍內，表明線性關系良好。

1.3.2 精密度考察 分別吸取對照品溶液，0.45 μm濾膜濾過，進樣5次，每次10 μL，分別測定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷峰面積。結果：RSD分別為0.28%、0.34%，表明儀器精密度良好。

1.3.3 重現性考察 精密稱取防風藥材(FFA-15)2批，每批5份，每份0.5 g，加甲醇10 mL，浸泡過夜，超聲提取20 min，離心15 min取濾液用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液，分別進樣10 μL，測定峰面積計算含量。結果：升麻素苷RSD為0.48%，5-O-甲基維斯阿米醇苷RSD為1.25%，表明重現性良好。

1.3.4 穩(wěn)定性考察 精密吸取同一供試品溶液10 μL，在0 h，4 h，8 h，12 h，24 h分別測定峰面積。結果：升麻素苷RSD為0.62%，5-O-甲基維斯阿米醇苷RSD為1.43%，表明樣品在24 h內基本穩(wěn)定。

1.3.5 加樣回收率考察 精密稱取已知升麻素苷含量的防風藥材粉末6份，分別加入相同含量的升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品溶液，測定峰面積，計算含量。結果：升麻素苷平均加樣回收率為98.98%，RSD為2.56%，5-O-甲基維斯阿米醇苷平均加樣回收率為96.72%，RSD為1.13%，符合要求。

2 結果

2.1 野生和栽培防風樣品的含量測定 本實驗對25份栽培防風樣品、15份野生防風樣品，按“樣品溶液配置”方法制備供試品溶液，分別進樣10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜峰面積，根據標準曲線方程計算升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量。測定結果見表3。

表3 防風樣品中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量測定結果表

樣品編號升麻素苷(%)5-O-甲基維斯阿米醇苷(%)總含量(%)樣品編號升麻素苷(%)5-O-甲基維斯阿米醇苷(%)總含量(%)FA-10.36240.13230.4947FB-10.19230.17020.3626FA-20.38480.12440.5092FB-20.12710.09930.2263FA-30.23590.09570.3315FB-30.17360.19130.3649FA-40.20540.19450.3999FB-40.12030.16490.2853FA-50.11470.29480.4095FB-60.19670.18670.3834FA-60.30410.11310.4172FB-70.15750.08620.2437FA-70.17390.05520.229FB-80.22870.15370.3825FA-80.85470.25071.1054FB-90.13120.05660.1877FA-90.26380.19370.4575FB-100.26260.11810.3807FA-110.12420.33530.4594FB-110.20470.13360.3382FA-120.35620.12780.484FB-120.14720.13190.2791FA-130.14010.13860.2787FB-150.23210.21450.4467FA-150.37210.1030.4751FB-160.20320.29240.4956FA-160.21170.0820.2938FB-170.01890.42010.4391FA-170.29520.14340.4386FB-200.58240.44471.0271平均含量0.2930.1590.452FB-210.10550.15960.265FB-220.07010.10330.1733FB-230.15140.11950.2709FB-240.15910.12910.2882FB-250.14550.22450.37FB-260.16170.20490.3666FB-270.13990.06550.2055FB-280.10270.06960.1723FB-290.09860.14880.2474FB-300.11430.04260.1569平均含量0.1690.1650.334

本實驗對25份栽培防風樣品，15份野生防風樣品進行了含量測定。2010版《中華人民共和國藥典》規(guī)定防風中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的總量不得少于0.24%。

40份樣品中有7份樣品的升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的總量低于0.24%。其中栽培防風樣品中FFB-2、FFB-9、FFB-22、FFB-27、FFB-28、FFB-30六批升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的總量低于0.24%，不合格率為24%。野生防風樣品中FFA-7批樣品升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的總量總量低于0.24%，不合格率為6.7%。野生防風的合格率高于栽培防風。

栽培防風升麻素苷平均含量為0.17%，5-O-甲基維斯阿米醇苷平均含量為0.16%，升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷平均含量為0.33%。野生防風升麻素苷平均含量為0.29%，5-O-甲基維斯阿米醇苷平均含量為0.16%，升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷平均含量為0.45%。從總體上看，野生防風的色原酮類成分高于栽培防風。

2.2 野生和栽培防風在升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量上的差異性 將野生和栽培防風分別與升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量相關聯，使用SPSS軟件對其進行分析，顯著性差異情況見表4。

表4 野生和栽培防風的色原酮含量顯著差異表a

注：a.分組變量：品種(1=栽培，2=野生)

升麻素苷含量數據、5-O-甲基維斯阿米醇苷含量數據和色原酮總含量數據通過正態(tài)性檢驗，sig<0.05均不服從正態(tài)分布，因此用非參數的秩和檢驗。升麻素苷含量漸進顯著性(雙側)<0.05，說明野生和栽培防風的升麻素苷含量有統計學意義，不同生長方式的防風樣品的升麻素苷含量不一樣。5-O-甲基維斯阿米醇苷含量漸進顯著性(雙側)>0.05，說明野生和栽培防風的5-O-甲基維斯阿米醇苷含量無差異，不同生長方式的防風樣品的5-O-甲基維斯阿米醇苷含量無統計學意義。色原酮總含量漸進性顯著性(雙側)<0.05，說明野生和栽培防風的色原酮總含量有統計學意義，不同生長方式對防風樣品的色原酮含量有差異。

3 討論

通過實驗數據可看出栽培與野生防風色原酮總量的含量有差異，野生防風的色原酮總量要高于栽培防風，說明野生防風的質量要優(yōu)于栽培防風。而從兩種色原酮物質含量來看，差異主要體現在升麻素苷的含量。野生防風升麻素苷含量明顯高于栽培防風升麻苷含量，而5-O-甲基維斯阿米醇苷含量在栽培和野生防風中含量基本相同，差異性不顯著。因此可增加樣本量，繼續(xù)探究栽培與野生防風和升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷的關系，考察升麻素苷的含量是否適合作為鑒別栽培和野生防風、評價防風質量優(yōu)劣的依據。

本實驗通過梯度洗脫方法同時測定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷，有效避免呀藥典方法中色譜峰未能完全分離的問題，而且方法簡便，結果準確，精密度、重現性、穩(wěn)定性較好，可以此作為防風中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的測定方法。

本實驗還考查了栽培與野生防風中兩種色原酮物質含量的差異，并采用SPSS軟件分析，但數據顯示栽培與野生防風只在升麻素苷含量有差異，5-O-甲基維斯阿米醇苷無統計學意義，這可能與防風的內在生長機制有關，值得進一步探究。

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(2014-09-28收稿 責任編輯：張文婷)

Content Determination and Difference Analysis of Chromone in Fangfeng with Different Growth Patterns

Wang Wenyi, Xu Jia, Liu Jie, Yang Yaojun

(TMCCollege,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102,China)

Objective:To establish a content determination method to simultaneously determine two kinds of chromoneS including Prim-O-glucosylcimifugin and 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol in Fangfeng. Methods: Agilent TC-C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) was used as chromatographic column; water and methanol were used as gradient elution of the mobile phase, wave length of 254nm was detected, with the flow rate of 1 mL / min, column temperature of 35 ℃, the injection volume 10μL. Results: 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O- Methylvisamminol content of Fangfeng with different growth patterns had no significant difference; there was difference in the content of Prim-O-glucosylcimifugin between wild and cultivated Fangfeng; there were differences in Chromones contents in Fangfeng with different growth patterns. Conclusion: Wild Fangfeng has better quality, and the simultaneous determination of two Chromones method is simple, accurate, with good precision, reproducibility and stability, and this can be used as determination method of Prim-O-glucosylcimifugin and 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol in Fangfeng.

Fanbfeng; Chromone; Prim-O-glucosylcimifugin; 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol

北京中醫(yī)藥大學“重點學科”開發(fā)課題(編號：2013-2DXKKF-21)

楊瑤珺(1969—)，女，博士，教授，碩士研究生導師，黑龍江哈爾濱人，北京中醫(yī)藥大學中藥學院，研究方向：中藥品種及質量鑒定，E-mail：yangyaojunbucmtcm@163.com

R284.1

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.09.031