譚金峰，馬云云

(1.濰坊市環(huán)境監(jiān)測(cè)中心站，山東濰坊 261041； 2濰坊市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東濰坊 261041)

超高效液相色譜法測(cè)定卡托普利片中卡托普利二硫化物含量

譚金峰1，馬云云2

(1.濰坊市環(huán)境監(jiān)測(cè)中心站，山東濰坊 261041； 2濰坊市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東濰坊 261041)

采用超高效液相色譜法測(cè)定卡托普利片中卡托普利二硫化物的含量。用Waters AcquityUPLC BEH C18色譜柱，以乙腈-水(pH 3.0)為流動(dòng)相，流速0.2 mL／min，進(jìn)樣量為5 μL，外標(biāo)法以峰面積定量?？ㄍ衅绽蚧锏馁|(zhì)量濃度在0.2～10 μg／mL范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系，r＞0.999 95，峰面積測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.65% (n=6)，加標(biāo)回收率為98.9%，二硫化物與主峰的分離度大于6.0。用該法對(duì)4批樣品進(jìn)行檢測(cè)，卡托普利二硫化物含量為0.3%～3.8%。與常規(guī)液相色譜法比較，該法分離效率高，重復(fù)性好，可用于卡托普利片的質(zhì)量控制。

超高效液相色譜法；卡托普利二硫化物；含量測(cè)定；質(zhì)量控制；快速檢驗(yàn)

卡托普利片為抗高血壓藥物，是血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑，臨床上被廣泛應(yīng)用，屬于國家基本藥物目錄品種。制劑中卡托普利二硫化物(以下簡稱二硫化物)是一種已知雜質(zhì)，目前行業(yè)內(nèi)普遍采用《中國藥典》規(guī)定的高效液相色譜法測(cè)定，外標(biāo)法定量。按照《中國藥典》中的色譜條件［1］測(cè)定二硫化物出峰慢、峰形差、理論板數(shù)低、使用大粒徑填料、耗時(shí)、難以快速定量，即使采用梯度洗脫也需運(yùn)行35 min［2］，還會(huì)導(dǎo)致基線波動(dòng)，影響準(zhǔn)確定量，而且梯度洗脫較等度洗脫重現(xiàn)性差。目前中國藥典中藥品快速檢驗(yàn)技術(shù)［3］不斷增加，在測(cè)定卡托普利片中卡托普利二硫化物時(shí)需要有效手段快速分離二硫化物并準(zhǔn)確定量。超高效液相色譜法在藥物分析、食品檢測(cè)、環(huán)境監(jiān)測(cè)等方面的研究已有不少報(bào)道［4-15］，但目前還未見采用超高效液相色譜法測(cè)定卡通托普利中二硫化物的報(bào)道。筆者采用該法建立了二硫化物的快速分析方法，方法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，分離度與重復(fù)性好，分析效率高，可為卡托普利質(zhì)量控制提供參考方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

液相色譜儀：Waters AcquityTM UPLC型，配有高壓泵，雙波長紫外檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，Empower Pro色譜工作站，美國Waters公司；

電子天平：AX205型，瑞士Mettler-Toledo公司；

超純水儀：Integral 3型，法國Millipore公司；

數(shù)控超聲波清洗器：KQ-700DV型，昆山市超聲儀器有限公司；

無菌濾膜：0.2 μm；

移液器：100μL，1 mL；

卡托普利：批號(hào)100318-201105，含量99.5%，中國食品藥品檢定研究院；

卡托普利二硫化物：批號(hào)100319-201105，含量為100.0%，中國食品藥品檢定研究院；

卡托普利片：由A、B、C 3家生產(chǎn)企業(yè)提供，A企業(yè)有2個(gè)批次，規(guī)格均為25 mg；

乙腈：色譜純，美國Fisher Scientific公司；

實(shí)驗(yàn)用水為自制超純水(電阻率為18.25 MΩ·cm)；

實(shí)驗(yàn)用其它試劑均為分析純。

1.2 色譜條件

色譜柱：Water Acquity UPLC BEH C18色譜柱(2.1 mm×100 mm，1.7 μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(體積比為25∶75，以磷酸調(diào)節(jié)pH為3.0)，流速為0.2 mL／min；柱溫：35℃；檢測(cè)波長：215 nm；進(jìn)樣體積：5 μL。

1.3 溶液配制

1.3.1 對(duì)照品溶液

避光精密稱取二硫化物12.51 mg，置于25 mL棕色量瓶中，加甲醇振搖溶解后定容，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，于4℃冰箱避光保存。精密稱取10.33 mg卡托普利樣品于100 mL棕色量瓶中，精密加入3 mL二硫化物儲(chǔ)備液，用流動(dòng)相溶解定容，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液［16］。

1.3.2 供試品溶液

取樣品10片稱量，避光研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量(相當(dāng)于卡托普利25 mg)，置于50 mL量瓶中，加入約25 mL流動(dòng)相振搖10 min，用流動(dòng)相定容后搖勻，備用。

2 結(jié)果與討論

2.1 供試品溶液制備方法

優(yōu)選了不同提取條件制備供試品溶液，采用不同提取方式(超聲、振搖)，不同振搖時(shí)間(5，10，15 min)，最終確定振搖10 min，此條件下二硫化物基本提取完全，且振搖不會(huì)升溫，比超聲提取法更加溫和，可避免不當(dāng)前處理造成的正誤差，方法簡單，成本較低。

2.2 流動(dòng)相

在流動(dòng)相的篩選過程中，考察了甲醇-磷酸鹽緩沖液、乙腈-磷酸鹽緩沖液(1 g NaH2PO4溶解到1 L水中，磷酸調(diào)pH為3.0)、乙腈-水(以磷酸調(diào)節(jié)pH為3.0)等度洗脫。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在相同配比、流速的條件下，甲醇洗脫體系的洗脫效率不如乙腈體系而壓力卻更高，采用水代替磷酸鹽緩沖液色譜峰變化不大，故選擇乙腈-水為流動(dòng)相，利于保護(hù)色譜柱。流動(dòng)相中有機(jī)相的比例變化對(duì)二硫化物的保留時(shí)間及其與主峰的分離度影響較大，乙腈含量為30%時(shí)，分離度低于4.0；降低乙腈含量至25%時(shí)，分離度達(dá)到6.0，滿足藥典要求；若再降低至20%，雖然分離度增至8.7，但出峰時(shí)間延長約1倍且理論塔板數(shù)降低約一半。故采用25%乙腈，出峰時(shí)間合適，分離度和理論板數(shù)較高，柱壓較小。

2.3 流動(dòng)相流速

在流動(dòng)相為乙腈-水(體積比為25∶75)、柱溫為35℃的條件下，比較了0.1，0.2，0.25，0.3 mL／min不同流速對(duì)色譜分離的影響。雖然二硫化物的保留時(shí)間隨流速升高而縮短，但與主峰的分離度以及峰面積與理論板數(shù)都會(huì)降低，另外柱壓較高，容易超限漏液，故最終選擇流動(dòng)相流速為0.2 mL／min。

2.4 色譜系統(tǒng)適用性

取對(duì)照品溶液、供試品溶液及稀釋樣品的流動(dòng)相(作為空白樣品溶液)各5 μL注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算二硫化物的含量，色譜圖見圖1。由圖1可知，空白樣品溶液色譜圖中在被測(cè)組分峰位上沒有吸收峰，故對(duì)測(cè)定無干擾。二硫化物保留時(shí)間約為4.2 min，約為主峰的2倍，與主峰的分離度大于6.0，單針運(yùn)行5 min即可，理論踏板數(shù)按二硫化物計(jì)算不低于5 000，脫尾因子在0.9～1.0之間，峰形良好。

2.5 線性關(guān)系、檢出限與定量限

移取二硫化物對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，加入流動(dòng)相稀釋配制成0.2，0.5，1，2，5，10，20 μg／mL的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。分別取5 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積Y對(duì)各對(duì)照品濃度X(μg／mL)進(jìn)行線性回歸，得到的回歸方程為Y=30 618.8X-1 230.2，相關(guān)系數(shù)r=0.999 95，表明二硫化物濃度在0.2～10 μg／mL的范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系。

將0.2 μg／mL二硫化物對(duì)照品溶液用流動(dòng)相逐級(jí)稀釋后進(jìn)樣測(cè)定，得到二硫化物的檢出限LOD(S／N=3)為0.1 μg／mL，定量限LQD(S／N=10)為0.2 μg／mL。

圖1 空白樣品(A)、混合對(duì)照品(B)、二硫化物對(duì)照品(C)和卡托普利片樣品(D)的色譜圖

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，峰面積測(cè)定結(jié)果見表1。由表1可知，二硫化物峰面積測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.65%，表明方法精密度良好。

表1 精密度測(cè)定結(jié)果

2.7 加標(biāo)回收試驗(yàn)

取已知二硫化物含量的卡托普利片細(xì)粉6份(二硫化物含量為0.004 9 g／g)，每份約80 mg(平均片重為83.4 mg)，精密稱定，置于50 mL容量瓶中。分別精密加入1 mL二硫化物儲(chǔ)備液，加標(biāo)量為0.5 mg，按1.2.2方法制備供試品溶液，依法測(cè)定并計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。由表2可知，二硫化物平均回收率為98.9%(n=6)，表明方法準(zhǔn)確度良好。

表2 二硫化物加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測(cè)定

采用所建方法對(duì)來自3家企業(yè)的4批卡托普利片樣品(A1，A2，B，C)進(jìn)行測(cè)定，二硫化物質(zhì)量濃度測(cè)定結(jié)果見表3。由表3可知，有一批檢出二硫化物含量占標(biāo)示量的3.8%，為不合格批次(藥典規(guī)定二硫化物的限度為不得超過標(biāo)示量的3.0%)。

表3 樣品中二硫化物測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)語

建立了超高效液相色譜法測(cè)定卡托普利二硫化物含量的方法，該法測(cè)定二硫化物保留時(shí)間穩(wěn)定，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、精密度高、回收率符合檢測(cè)要求。與常規(guī)液相色譜法比較，超高效液相色譜的分析時(shí)間大幅縮短，分離效率高，重復(fù)性好，溶劑用量少。該法可作為實(shí)驗(yàn)室方法改進(jìn)的參考依據(jù)，可用于卡托普利片的質(zhì)量控制。

［1］ 國家藥典委員會(huì).中國藥典2010年版第一增補(bǔ)本［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2012:329.

［2］ 蔡濤，任修文.對(duì)卡托普利片中卡托普利二硫化物檢查項(xiàng)測(cè)定方法的改進(jìn)［J］.中國藥事，2014，28(11): 1 252-1 256.

［3］ 劉明理，馬雙成.藥品快速檢驗(yàn)技術(shù)研究及應(yīng)用管理中需要加強(qiáng)的工作［J］.中國藥事，2012，26(8): 857-870.

［4］ 石俊敏，管佳，張慶文,等.超高效液相色譜在藥物分析中的應(yīng)用［J］.藥物分析雜志，2008，28(9): 1 583-1 588.

［5］ 李耿，孟繁蘊(yùn)，楊洪軍，等. UPLC法同時(shí)測(cè)定腦心通膠囊中5個(gè)成分的含量［J］.藥物分析雜志，2013，33(3): 414-418.

［6］ 王麗娜，黃峻榕，張立，等.超高效液相色譜法測(cè)定嬰幼兒配方奶粉中的葉黃素［J］.色譜，2013，31(12): 1 228-1 231.

［7］ 王瑞國，蘇曉鷗，王培龍，等.超高效液相色譜法測(cè)定飼料中苯乙醇胺A［J］.分析化學(xué)，2013，41(3): 389-393.

［8］ 葉曦雯，彭燕，牛增元，等.超高效液相色譜-線性離子阱／靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜鑒別紡織品中禁用芳香胺及其異構(gòu)體［J］.色譜，2014，32(9): 1 005-1 012.

［9］ 王點(diǎn)點(diǎn)，陳源，宋寧慧，等.超高效液相色譜法測(cè)定稻田土壤及水中的噻蟲啉與氟蟲雙酰胺殘留［J］.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2013，32(1): 138-142.

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［11］ 彭濤，王超，呂怡兵，等.超高效液相色譜法快速檢測(cè)地表水中丁基黃原酸［J］.中國環(huán)境監(jiān)測(cè)，2013，29(2): 65-68.

［12］ 王星，池玉梅，康安.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法定性和高效液相色譜法定量分析天南星中氨基酸成分［J］.色譜，2014，32(12): 1 326-1 332.

［13］ 龍澤榮，徐微微，鹿毅，等.分子印跡固相萃取-超高效液相色譜法測(cè)定河水中的堿性橙Ⅱ［J］.理化檢驗(yàn)：化學(xué)分冊(cè)，2014，50(8): 937-943.

［14］ 李慧勇，譚建華，郭長虹，等.化妝品中黃芩苷與白鮮堿的超高效液相色譜檢測(cè)及質(zhì)譜確證［J］.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2014，33(12): 1 399-1 403.

［15］ 崔思嬌，羅潔，馬天成，等.酸棗仁的超高效液相色譜指紋圖譜［J］.中國藥學(xué)雜志，2013，48(7): 509-511.

［16］ 國家藥典委員會(huì).中國藥典2010年版第二部［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010: 130.

我國已制定492項(xiàng)食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)國務(wù)院食品安全委員會(huì)辦公室等18個(gè)部門聯(lián)合下發(fā)的通知，2015年全國食品安全宣傳周活動(dòng)已正式拉開帷幕。在以“尚德守法，全面提升食品安全法治化水平”為主題的全國食品安全宣傳周主場(chǎng)活動(dòng)上，記者獲悉，我國迄今已制定公布492項(xiàng)食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)，基本覆蓋保障食品安全的主要指標(biāo)萬余項(xiàng)。

作為本次宣傳周主場(chǎng)活動(dòng)的重頭戲，在當(dāng)天的分論壇——“聚焦新修《食品安全法》”上，食品藥品監(jiān)管總局相關(guān)負(fù)責(zé)人指出，作為此次修法重要的增加條款之一，網(wǎng)絡(luò)食品交易的相關(guān)規(guī)定填補(bǔ)了對(duì)食品生產(chǎn)、流通、餐飲服務(wù)和食用農(nóng)產(chǎn)品銷售等各個(gè)環(huán)節(jié)存在的網(wǎng)絡(luò)交易監(jiān)管制度空白，將保證消費(fèi)者在互聯(lián)網(wǎng)食品交易中所產(chǎn)生的交易糾紛，能夠迅速得以解決。

1 強(qiáng)化食品安全統(tǒng)一治理

全國人大高票通過新修訂的食品安全法，進(jìn)一步明確了預(yù)防為主、風(fēng)險(xiǎn)管理、全程控制、社會(huì)共治的原則，著力構(gòu)建最嚴(yán)格的覆蓋全過程的監(jiān)管制度。

新法從104條增加到154條，新增50條，對(duì)原有70%的條文進(jìn)行了實(shí)質(zhì)性修改；法律文本從1.5萬字增加到3萬字；法律責(zé)任從15條增加到28條。這部被稱為“史上最嚴(yán)”的食品安全法，標(biāo)志著我國食品安全工作在法治化軌道上又邁出了重大步伐。

2 體現(xiàn)刑事責(zé)任追究優(yōu)先

公安部治安管理局打假處處長許成磊也認(rèn)為，新法充分體現(xiàn)了“最嚴(yán)厲的處罰”。而其中最突出的表現(xiàn)，就是對(duì)一些嚴(yán)重危害人體健康的食品安全違法行為體現(xiàn)了“刑事責(zé)任追究優(yōu)先”。許成磊說，新食品安全法突出“刑事責(zé)任優(yōu)先”，比如第123條規(guī)定經(jīng)營病死、死因不明的禽、畜、獸、水產(chǎn)動(dòng)物肉類及其制品的，原則上即構(gòu)成刑法第143條規(guī)定的生產(chǎn)銷售不符合安全標(biāo)準(zhǔn)的食品罪，要予以刑事追究。

新法還首次規(guī)定對(duì)危害較大、尚未構(gòu)成犯罪的7種違法情形由公安機(jī)關(guān)給予行政拘留處罰。許成磊說，此次新修訂食品安全法規(guī)定了7種危害相對(duì)較大的食品安全違法情形在達(dá)不到刑事追究的情況下，情節(jié)嚴(yán)重的，在給予吊銷許可證的同時(shí)，可由公安機(jī)關(guān)對(duì)直接負(fù)責(zé)的主管人員和其他直接責(zé)任人員處5日以上15日以下拘留。

3 新增互聯(lián)網(wǎng)食品交易監(jiān)管

隨著我國電子商務(wù)的迅猛發(fā)展，網(wǎng)購已經(jīng)成為居民日常消費(fèi)的主要方式之一。在此背景下，新食品安全法對(duì)互聯(lián)網(wǎng)食品交易的規(guī)定，也是此次修法的一大關(guān)注點(diǎn)，是重要的增加條款之一。

食品藥品監(jiān)管總局食品監(jiān)管二司司長張靖說，網(wǎng)絡(luò)食品交易存在一定風(fēng)險(xiǎn)，當(dāng)前互聯(lián)網(wǎng)食品經(jīng)營監(jiān)管面臨一些難以解決的問題，既有產(chǎn)業(yè)政策跟不上的問題，也有監(jiān)管能力跟不上的問題。因此，將于2015年10月1日實(shí)施的新版食品安全法，對(duì)網(wǎng)絡(luò)食品經(jīng)營新增了制度性規(guī)定。

張靖認(rèn)為，新法通過規(guī)定互聯(lián)網(wǎng)食品交易第三方平臺(tái)三類義務(wù)，使互聯(lián)網(wǎng)食品經(jīng)營中食品安全、消費(fèi)者權(quán)益保護(hù)等問題能夠落實(shí)責(zé)任承擔(dān)者，確?；ヂ?lián)網(wǎng)食品交易的安全，同時(shí)也保證消費(fèi)者在互聯(lián)網(wǎng)食品交易中所產(chǎn)生的交易糾紛，并能夠迅速得以解決。

(中國分析計(jì)量網(wǎng))

DNA分子檢測(cè)方法成為國標(biāo)

國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)批準(zhǔn)國家標(biāo)準(zhǔn)《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程真實(shí)性和品種純度鑒定》(GB／T3543.5-1995)第1號(hào)修改單，其中規(guī)定品種真實(shí)性或身份鑒定允許采用DNA分子檢測(cè)方法，這為快速準(zhǔn)確打擊品種假冒侵權(quán)違法行為提供了有力依據(jù)，該修改自2015年7月1日起實(shí)施。

修改單中增加6.2.4 DNA分子檢測(cè)方法，具體內(nèi)容：品種真實(shí)性驗(yàn)證或身份鑒定，允許采用簡單重復(fù)序列(簡稱SSR)和單核苷酸多態(tài)性(簡稱SNP)分子標(biāo)記方法。檢測(cè)采用抽取有代表性的檢測(cè)樣品與標(biāo)準(zhǔn)樣品、DNA指紋數(shù)據(jù)庫比較的方式。同時(shí)，修改單還將6.4條中“田間小區(qū)種植是鑒定品種真實(shí)性和測(cè)定品種純度的最為可靠、準(zhǔn)確的方法”修改為“田間小區(qū)種植是鑒定品種真實(shí)性和測(cè)定品種純度的可靠方法之一?！?/p>

(儀器信息網(wǎng))

Determination of Captopril-Disulphide in Captopril Tablets by Ultra-Performance Liquid Chromatography

Tan Jinfeng1, Ma Yunyun2
(1. Weifang Environmental Monitoring Center， Weifang 261041, China; 2. Weifang Institute for Food and Drug Control， Weifang 261041, China)

Ultra-performance liquid chromatographic method for the determination of captopril-disulphide in captopril tablets was established. The method was performed on a Waters Acquity UPLC BEH C18analytical column and the mobil phase consisted of acetonitrile-H2O (pH 3.0) with flow rate of 0.2 mL／min. The injection volume was 5 μL and the content was quantited by the area of the disulphide peak with the standard curve. The concentration of captopril-disulphide was linear with the peak area in the range of 0.2-10 μg／mL,r=0.999 95. The relative standard deviation of area detection results was 0.65% (n=6). The average recoveries was 98.9%, the peaks of captopril and disulphide were well isolated and the chromatographic separation degree was more than 6.0. The method was used for detecting four batches of samples, and the results were in the range of 0.3-3.8%. Compared with routine liquid chromatography，this method has high separation and good repeatability，which can be used for the quality control of captopril.

UPLC; captopril-disulphide; content determination; quality control; rapid test

O657.7

：A

：1008-6145(2015)04-0036-04

10.3969／j.issn.1008-6145.2015.04.011

聯(lián)系人：譚金峰；E-mail: tanjinfeng@163.com

2015-04-14